壳多糖及其衍生物在动物细胞培养中应用研究进展

壳多糖作为一种碱性天然多糖 ,由于其无毒且具有良好的生物及组织相容性而备受人们的重视 ,本文综述了壳多糖及其衍生物作为细胞培养微载体材料、生物微胶囊材料、基因转移载体、细胞培养生物因子及作为药物吸收促进因子 5个方面的研究进展。

甲壳质的衍生物合成生物膜的结构和功能

目的合成壳聚糖磷酸酯作为诱导生物组织矿化的生物大分子膜。方法对天然聚阳离子多糖—壳聚糖进行磷酸化本体改性,制备用于引导组织再生的壳聚糖膜。结果磷酸化壳聚糖可以诱导磷灰石晶体的生成,且其诱导能力与取代度有关系,较高取代度的磷酸化壳聚糖诱导磷灰石形成的能力反而不如取代度相对低的磷酸化壳聚糖。结论壳聚糖和磷酸化壳聚糖磷酸酯可以作为调控磷灰石晶体生长的有机基质模板;促进成骨细胞增殖和分化。

壳聚糖-聚乳酸复合人工硬脑膜的研制

目的:采用生物可降解材料聚乳酸和壳聚糖制作一种新型的可吸收人工硬脑膜。方法:实验于1999-06/2002-06年在华北煤炭医学院附属医院实验中心完成。实验材料主要为壳聚糖粉、聚乳酸网、质量浓度为10g/L的冰醋酸和铺膜设备。用稀酸溶解壳聚糖粉末,用特制的铺膜设备在聚乳酸网上成膜。碱、蒸馏水处理后,环氧乙烷消毒后备用。按国家有关规定的标准对人工硬脑膜进行物理性能及化学性能的测试。结果:①人工硬脑膜(湿态)物理性能测试结果:强度≥0.2N/m m,50%作负荷伸长20%不断裂,弹性恢复力82%,厚度约为(0.21±0.02)m m,耐缝性(0.32±0.08)N/m m。②人工硬脑膜化学性能测试结果:水中可溶物0.38%,易氧化物合格,酸碱度合格,灰分0.23%,重金属含量合格。结论:应用可吸收生物材料制备的人工硬脑膜,在物理性能上接近人体正常硬脑膜,能够保证手术缝合时不脱边、不撕裂,且能随颅内压的变化而有一定的弹性伸缩。其化学性能符合国家有关体内植入物的标准,可望成为一种理想的人体硬脑膜替代物。

医用几丁糖预防输卵管再通术后粘连的应用

目的:研究医用几丁糖预防输卵管介入再通术后粘连阻塞的临床疗效。方法:129例阻塞性输卵管介入再通术患者被随机分为研究组(54例)和治疗组(74例),治疗组仅作消炎灌注治疗,研究组输卵管开通作消炎灌注后,再注入医用几丁糖。结果:两组阻塞输卵管再通率分别为96.1%、96.5%。术后12个月内,研究组妊娠率为51.9%(28/54),治疗组妊娠率25.3%(19/74)。两组术后妊娠率比较差异有显著性。结论:输卵管再通术后应用医用几丁糖能较有效地防止输卵管再次炎症阻塞。

几丁糖预防术后肠粘连疗效观察

【目的】观察几丁糖预防术后肠粘连的临床效果。【方法]243例胃肠道恶性肿瘤手术患者，随机分成治疗组和对照组。治疗组121例应用几丁糖预防术后肠粘连，对照组122例术后直接关腹。【结果】治疗组6例（4．96％）发生粘连性肠梗阻，对照组25例（20．49％）发生，差异有显著性（P＜0．05）。两组分别有8例和12例本院再手术，比较两组腹腔粘连程度，治疗重度粘连显著低于对照组（P＜0．05）。【结论】医用几丁糖能有效减轻腹腔粘连程度及预防肠粘连的发生。

N,O-羧甲基壳聚糖对小白鼠精子畸形的影响

目的:观察能明显促进禽类等动物的生长发育,改善肉质的新型饲料添加剂N,O-羧甲基壳聚糖对昆明种小白鼠精子畸形的影响,分析其应用在畜牧生产中的安全性。方法:实验于2005-06-22/2005-08-06于南京农业大学动物医学院药理组实验室完成。挑选体质量25～28g的小鼠50只,以随机数字表法分为生理盐水组、环磷酰胺组、N,O-羧甲基壳聚糖(南京龙源天然多酚合成厂提供,商品名为毕罗喜,质量浓度为105g/kg)2,4,8g/kg剂量组,每组10只。N,O-羧甲基壳聚糖2,4,8g/kg剂量组分别给予相应剂量的N,O-羧甲基壳聚糖,溶于1mL生理盐水,2,4g/kg剂量1次灌服,8g/kg剂量分2次灌服,每次间隔约3h;生理盐水组给予生理盐水1mL;环磷酰胺组给予环磷酰胺0.04g/kg,溶于1mL生理盐水。给药前禁食10h,不禁水。连续灌胃5d,给药后30d麻醉下处死,取两侧附睾按Wyrobek方法涂片,观察小白鼠精子畸形状况。评估标准参照农业部兽药评审委员会办公室编写的兽药试验技术规范汇编(2001年)。评估内容参照沈建忠主编的动物毒理学(中国农业出版社,2002年),包括各种畸形的精子形态:不定形、胖头、香蕉头、无钩、双头(多头)和双尾(多尾)等,及其分类计数。每组随机选取5只小鼠,计算总畸形率。精子畸形率(%)=畸形精子总数/检查精子总数×100。结果:最终25只小鼠进入结果分析,每组5只。①环磷酰胺组的精子畸形率远高于生理盐水组和N,O-羧甲基壳聚糖2,4,8g/kg剂量组(6.10%,2.48%,2.46%,2.64%,2.78%,P<0.01);N,O-羧甲基壳聚糖2,4,8g/kg剂量组与生理盐水组比较,差异无显著性意义(P>0.05),且各剂量组之间差异也没有显著性意义(P>0.05)。②各组精子畸形主要表现为头部或尾部异常。以无定形和胖头居多,占35.48%(292/823)和29.28%(241/823);其次是无钩形及香焦形多见,占19.68%(162/823)和13.49%(111/823);偶尔可见双头双尾形,只占2.07%。结论:N,O-羧甲基壳聚糖精子畸形试验结果呈阴性,说明其对雄性生殖细胞没有明显的遗传毒性。

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植改善帕金森病模型鼠的旋转行为(英文)

背景:细胞组织的微囊化移植是近年来帕金森病治疗的研究热点之一,目前发展较成熟、应用较多的是海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊,但其易于囊周纤维化、易破碎等缺点,使其临床应用受到了限制。应用国内研制的新型微胶囊材料海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊将PC12细胞微囊化后移植入帕金森病模型鼠纹状体内,观察其作用。目的:观察海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植治疗,改善帕金森病模型大鼠旋转行为的作用。设计:随机对照动物实验。单位:吉林大学第二医院和中国科学院大连化学物理研究所。材料:成年雄性Wistar大鼠40只,体质量(220±10)g;海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊;PC12细胞。方法:实验于2002-05/12在吉林大学第二医院动物实验室和中国科学院大连化学物理研究所完成。①应用国产新型材料壳聚糖制成的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞。②将成功建立的23只帕金森病大鼠模型随机分为3组,微囊化PC12细胞组10只、裸PC12细胞组7只、空微胶囊组6只。分别将海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞、裸PC12细胞、空微胶囊移植入帕金森病模型鼠损伤侧纹状体内。③以阿朴吗啡检测移植前后大鼠旋转行为的差异。观察黑质及纹状体内微包囊的形态并检测微胶囊内细胞的活性。主要观察指标:①移植前后大鼠的旋转行为。②黑质和纹状体的病理形态。③回收的微包囊的完整性及囊内PC12细胞的活性。结果:①微囊化PC12细胞移植组在移植4周时旋转行为显著低于移植前和空微囊移植组犤(6.9±2.8),(11.7±5.5),(10.5±1.6)r/min,P<0.05犦,症状改善至少持续3个月;裸PC12细胞移植组大鼠的旋转行为与移植前相比也有改善犤(5.6±1.1),(9.5±1.5)r/min,P<0.05犦,但仅持续了2个月,且部分大鼠颅内有致死性肿瘤形成。空微囊移植组移植前后大鼠的旋转行为无明显差异。②回收微胶囊内的PC12细胞再培养生长良好,并且具有生物活性。结论:微囊化PC12细胞脑内移植能够改善阿朴吗啡诱发的帕金森病模型鼠的旋转症状,海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠新型微胶囊具有免疫隔离和抑制肿瘤形成的作用,有着广泛的临床应用前景。

激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律(英文)

背景:新型组织工程材料和许旺细胞扩增后置入生物合成管内去修复周围神经的缺损,是人工生物材料管的两大进展。目的:以胶原几丁糖为支架,以激活态的许旺细胞为种子细胞,观察二者的亲和性以及激活态的许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律,为人工神经的预构做准备。设计:开放性实验。单位:复旦大学附属华山医院手外科。材料:实验于2003-07/2003-12在卫生部手功能重建重点实验室完成。选取清洁级雄性SD大鼠4只。胶原几丁糖膜(上海其胜生物材料技术研究所提供),许旺细胞激活液(自制)。方法:大鼠麻醉后坐骨神经切断预变性7d,再次麻醉后引颈处死,迅速切取双侧坐骨神经,置于含青霉素和链霉素的D-HANK’S液中,剔除神经外膜,剪碎成1mm的小段,移入盛有质量浓度为5g/L的胰蛋白酶和0.6g/L的胶原酶的离心管中,每2mL液体中加入激活液0.5mL,复合酶分步消化法获激活态许旺细胞,以浓度为2×107L-1激活态的许旺细胞200μL接种于胶原几丁糖膜上和培养皿上,2周后通过相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况,S-100染色鉴定细胞的纯化程度。主要观察指标:①绘制细胞生长曲线,确定体外倍增时间。②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果。③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果。结果:①体外倍增时间的确定:激活态的许旺细胞接种于胶原几丁糖膜和培养皿上时的浓度均是2×107L-1,2周后细胞浓度分别达到30×107L-1和20×107L-1。根据DT=(t-t0)lg2/(lgn-lgn0)算出激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的倍增时间为4d。②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果:接种于培养皿上的激活态许旺细胞24h后大多数由圆球形变成长梭形,有突起,多为双极,也有的呈三极状;接种于膜上的激活态许旺外形上和培养皿中无明显差异,但膜上的激活态许旺细胞在相差显微镜下犹如“刻在沙地上的文字”一般。S-100染色见激活态许旺细胞成棕色,纯度达95%以上。③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果:激活态许旺细胞多数生长于胶原几丁糖膜的凹陷中或紧贴膜表面,呈有规律的首尾相接贴附于膜上,胞体呈纺锤形,直径在4～6μm,长度为60～80μm,细胞呈梭形,有许多细小分枝。1周时膜的形态仍然完整。结论:胶原几丁糖膜和高度纯化的激活态许旺细胞有良好的亲和性,以其为工艺材料制成的组织工程支架很有可能在促进周围神经再生中发挥优势作用。

动物来源生化药物的研究和开发思路

本文以胸腺激素(TH)、超氧化物歧化酶(SOD)、壳多糖(chitin)及其衍生物、玻璃酸(HA)、低分子肝素(LMWH)

医用几丁糖联合腹腔镜技术治疗输卵管伞端闭锁性不孕50例临床分析

目的:分析医用几丁糖联合腹腔镜技术治疗输卵管伞端闭锁性不孕的临床效果。方法:因输卵管粘连导致不孕症患者50例,行腹腔镜下粘连松解及伞端造口术,并行输卵管通液术,随机选取26例术中通液加入几丁糖,另24例用生理盐水+庆大霉素+地塞米松;观察两组输卵管的再通率,半年妊娠率。结果:术中通液用几丁糖者再通率100%,妊娠率57.6%,对照组再通率50%,半年妊娠率37.5%,有明显差异性(P<0.05)。结论:几丁糖联合微创技术治疗输卵管远端阻塞性不孕症疗效显著,是理想的治疗手段,值得推广。

结膜下注射医用几丁糖治疗甲状腺相关性眼病上睑退缩疗效研究

目的探讨结膜下注射医用几丁糖与曲安奈德对甲状腺相关性眼病(TAO)上睑退缩的治疗效果。方法选择2014年1月至2017年10月在重庆市人民医院确诊的TAO患者60例,随机分为生理盐水组(A组)、医用几丁糖组(B组)、曲安奈德组(C组),每组20例。观察3组上睑退缩恢复情况。结果注射后4、8周时,B、C组上睑退缩恢复情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05);B、C组上睑退缩恢复情况分别与A组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论结膜下注射医用几丁糖可有效恢复TAO患者上睑退缩。