细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21在HHV-8病毒裂解复制周期的作用

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)病毒裂解复制周期的影响。方法组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA预处理后,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)阳性的iSLK.219细胞数,实时定量PCR检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8病毒相关基因的mRNA水平。脂质体转染p21-siRNA后,免疫印迹法检测iSLK.219和TREx-K-Rta BCBL-1细胞中p21蛋白表达,计算RFP阳性iSLK.219细胞百分率,检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中ORF50和PAN的mRNA水平,CCK-8法和台盼蓝染色观察细胞存活情况。结果SAHA显著增强iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K8.1的mRNA水平和p21蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默p21后,iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50和PAN mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且保护SAHA介导的TREx-K-Rta BCBL-1细胞死亡。结论抑制HDAC活性通过调控p21促进HHV-8病毒裂解复制。

蜂毒肽Protopolybia-MPⅢ及其优化突变体对HSV-1病毒复制周期不同阶段的抑制活性研究

目的:研究蜂毒肽Protopolybia-MPⅢ及其优化突变体MPⅢ-3/4/7/10/14在体外对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)复制周期不同阶段的抑制活性。方法:通过qPCR技术和多肽分阶段孵育平台,检测蜂毒肽Protopoly⁃bia-MPⅢ及5个优化突变体在Vero细胞内对HSV-1感染的预防作用,以及其对HSV-1复制周期不同阶段的影响。结果:Protopolybia-MPⅢ多肽突变体MPⅢ-4/10/14预处理Vero细胞后去除上清,能限制HSV-1感染。进一步通过多肽抗病毒作用阶段分析实验,发现野生型多肽Protopolybia-MPⅢ主要作用于HSV-1复制周期的吸附阶段,而MPⅢ-3/14主要作用于病毒复制周期的进入/融合以及进入后阶段,MPⅢ-4/7主要作用于病毒复制周期的吸附以及进入/融合阶段,MPⅢ-10主要作用于病毒复制周期的吸附以及进入后阶段。结论:本工作明确了蜂毒肽Protopolybia-MPⅢ及其突变体MPⅢ-3/4/7/10/14对HSV-1复制周期不同阶段的抑制活性,初步阐明了Protopolybia-MPⅢ多肽优化突变体抗病毒活性提高的原因,为胡蜂抗病毒多肽的分子设计和药用研究奠定基础。

禽呼肠孤病毒的分子特征和复制周期

禽呼肠孤病毒是Orthoreovirus属5种病毒之一,该属还包括非致融哺乳动物呼肠孤病毒、致融哺乳动物呼肠孤病毒和狒狒呼肠孤,以及从爬行动物中分离的致融病毒。禽呼肠孤病毒和哺乳动物呼肠孤病毒是Orthoreovirus属的两个主要类群,尽管它们有许多共同的分子特征和物理化学特征,但它们在宿主范围、致病性和基因组编码能力以及各种生物学和血清学特性方面有所不同。

轮状病毒复制周期早期阶段的研究现状

本文就轮状病毒复制周期的早期阶段：吸附、穿入及脱壳三方面现状予以综述。

乙型肝炎病毒复制周期

1973年证实乙型肝炎病毒(HBV)有DNA多聚酶活性。次年发现内源性模板是一个3千碱基对双链环DNA。和动物HBV:鸭乙型肝炎病毒(DHBV)及土拔鼠肝炎病毒(WHV)相似。如合成途径相同,HBV基因组局部结构与逆转录病毒环状前病毒相似。HBV的生活周期也与逆转录病毒相同。因而,使人们相信植入诱变是人和动物HBV转化肝细胞的机理。

狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞中的复制周期的观察

病毒的复制过程是很复杂的。研究病毒的复制过程是大多数实验病毒学家关注的焦点〔１〕，这对病毒的致病性、潜伏期、病毒的诊断、疫苗生产中毒种接种量、培养时间、收获时间都非常重要。我们对ＣＴＮ－１毒株在Ｖｅｒｏ细胞中感染、吸附和复制周期进行了初步研究。１材料...

细胞周期蛋白激酶9（CDK9）对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）裂解复制周期的影响

目的 探讨细胞周期蛋白激酶9（cyclin-dependent kinase 9，CDK9）在卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus，KSHV）裂解复制周期中的作用。方法 分别应用CDK9特异性抑制剂FIT-039处理或CDK9小干扰RNA（siRNA）转染iSLK.219及TREx-K-Rta BCBL-1细胞，四环素（Dox）或佛波酯（TPA）和丁酸钠刺激48 h后，分别采用荧光显微镜和实时定量PCR（qPCR）方法观察红色荧光蛋白（RFP，病毒裂解复制）阳性细胞数目及KSHV相关基因的mRNA转录水平。染色质免疫沉淀（ChIP）试验检测KSHV PAN启动子上RNA PolⅡ及其磷酸化CTD-S2的富集含量。结果 FIT-039处理和CDK9-siRNA转染后，iSLK.219细胞RFP阳性率显著降低、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中KSHV裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K2的mRNA转录水平明显下降。且FIT-039处理后，TREx-K-Rta BCBL-1细胞中KSHV PAN启动子上结合的RNA PolⅡ及其磷酸化CTD-S2含量显著下降。结论 CDK9可能通过磷酸化RNA PolⅡ丝氨酸调控KSHV病毒裂解复制。

树[鼠句]肝细胞可支持丙型肝炎病毒侵入及完整复制周期

近日美国《病毒学杂志》发表了第二军医大学微生物学教研室戚中田教授组的最新研究成果，他们通过丙型肝炎病毒（HCV）体外培养模型系统证明了树驹原代肝细胞（PTH）表达有支持HCV侵入的全部功能性受体分子，并能支持HCV完整的生命周期，包括入侵、复制以及释放。

盐霉素体外对猪流行性腹泻病毒的抑制效果

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种以水样腹泻、呕吐和脱水为主要特征的猪肠道传染病,给全球养猪业造成巨大的经济损失,但目前仍无有效的疫苗和治疗药物。盐霉素(salinomycin, SLM)是一种常用的抗生素,具有不易产生耐药性、排泄迅速、残留量极低的优点。为明确SLM对PEDV的抑制作用,首先通过TCID_(50)(tissue culture infective dose)检测PEDV在Vero细胞上的增殖规律,进一步经CCK-8试验和细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)测定SLM的半数细胞毒性浓度(half-cytotoxic concentration, CC_(50))和其对PEDV的半数抑制浓度(median inhibition concentration, IC_(50)),最后建立SLM、PEDV和Vero细胞的作用模型,利用RT-qPCR、免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay, IFA)技术检测SLM对PEDV复制周期的影响。结果表明PEDV感染Vero细胞后24 h病毒滴度最高(10^(7.7)·0.1 mL^(-1));SLM对Vero细胞的CC_(50)为7.698μmol·L^(-1),对PEDV的IC_(50)为1.617μmol·L^(-1);随着SLM浓度的增加,PEDV滴度、N蛋白和N基因mRNA的表达量逐渐下降;SLM抑制PEDV的复制阶段,对病毒的吸附、入侵和释放阶段无明显影响。该研究结果可以为进一步挖掘PEDV抑制药物提供新思路。

HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响

用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3 1+/GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS-GFP。采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞Phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BCBL-1细胞。收集LZRS-GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平。收集LZRS-Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Westernblot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Northernblot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26mRNA转录水平。重组LZRS-Tat101病毒进一步感染HL3T1细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR/CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能。PCR扩增HHV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3载体中,构建Rta启动子+虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒。此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS-Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性。结果显示:①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染?

宿主蛋白抑制禽流感病毒复制奥秘解开

据中国农科院最新消息,该院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室,潜心研究宿主蛋白调控流感病毒复制周期机制并取得突破性进展,进一步完善了流感病毒与宿主蛋白形成的相互作用网络,深化了对流感病毒复制周期的理解,为研制新的抗流感病毒药物提供了潜在靶点。相关研究成果近日在线发表于国际病原学权威期刊《公共科学图书馆病原体》。

研究揭示氨基肽酶N促进猪德尔塔冠状病毒入侵细胞及复制的分子机制

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是2014年首先在美国发现的一种猪冠状病毒,其感染幼龄仔猪后导致仔猪腹泻、呕吐、脱水和死亡,给养猪业带来巨大威胁。近日,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪消化道传染病创新团队和猪免疫抑制病创新团队共同研究发现猪氨基肽酶N(pAPN)通过内吞途径促进猪德尔塔冠状病毒入侵细胞并完成复制周期,阐明了猪氨基肽酶N促进猪德尔塔冠状病毒入侵细胞及复制的分子机制。相关研究成果在线发表在《病毒学杂志(Journal of Virology)》上。

Ferulaldehyde的体外抗流感作用研究

本研究对从蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)和赤芍(Paeoniae Rubra Radix)中分离的一种苯丙素类化合物ferulaldehyde的抗甲型流感病毒的作用机制进行探索。通过加药时间点、免疫荧光实验、红细胞凝集法与神经氨酸酶活力检测等实验,发现化合物ferulaldehyde主要影响流感病毒的复制和释放环节,干扰病毒的生命周期从而发挥抗流感病毒活性。分子对接结果进一步确认流感病毒NP和NA蛋白很可能是它作用的靶点。同时,该化合物还能显著抑制由流感病毒引起的巨噬细胞炎症相关蛋白和趋化因子的表达。综上所述,化合物ferulaldehyde可能通过直接抑制流感病毒复制和释放的过程以及影响免疫细胞的功能从而发挥抗流感的作用。

牛病毒性腹泻病毒研究进展

牛病毒性腹泻病毒是黄病毒科瘟病毒属的代表种,主要感染牛并引发疾病,造成严重的经济损失。自该病毒发现至今,已有60余年研究历史,随着生物学理论及技术不断发展,特别是反向遗传技术以及蛋白组学在病毒研究领域的应用,人们对该病毒产生了一些新的认识。论文从牛病毒性腹泻病毒的病毒粒子结构组成及功能、病毒复制周期及蛋白裂解过程、细胞损伤及免疫逃逸机制三个方面阐述了近几年牛病毒性腹泻病毒分子生物学研究的进展,重点讨论了病毒复制周期、多聚蛋白裂解、致细胞病变效应和免疫逃逸机制。

口蹄疫研究进展

口蹄疫（ＦｏｏｔａｎｄＭｏｕｔｈＤｉｓｅａｓｅ，ＦＭＤ）是致偶蹄动物的一种急性、高度接触性、发热性传染病，以传播迅速、感染率高而著称，国际兽疫局（ＯＩＥ）将其列为Ａ类传染病之首。该病病原为口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ），属于小ＲＮＡ病毒科口蹄疫病毒属。ＦＭＤ...

人乳头瘤病毒体外研究的技术及进展

人乳头瘤病毒的体外研究技术在人乳头瘤病毒研究中占有重要地位。通过人乳头瘤病毒的人工感染及感染细胞分化诱导技术,目前已可在体外完成多种型别人乳头瘤病毒的复制周期。常用的人乳头瘤病毒体外研究技术、人乳头瘤病毒复制与转录调控、人乳头瘤病毒与宿主细胞相互作用、人乳头瘤病毒感染的干预与治疗等热点问题引起人们的关注。