拟南芥复制因子C亚基3基因突变削弱了植物对紫外辐射的抗性(英文)

在前期以EMS(甲基磺酸乙酯)筛选更多抗生物和非生物逆境的突变体试验中,发现了1个从G到A的点突变体rfc3-1,该点突变削弱了植株抗紫外辐射的能力.将野生型拟南芥复制因子C亚基3基因转化到突变株rfc3-1后恢复了突变株的野生型表型,证明紫外辐射抗性异常表型是由拟南芥复制因子C亚基3基因突变所引起的,AtRFC3在拟南芥紫外辐射抗性中起重要作用.

拟南芥复制因子C亚基1在胚胎发生中起重要作用(英文)

复制因子C包含1个大亚基和4个小亚基,在DNA复制、损伤修复和细胞增殖中起重要作用,拟南芥复制因子C亚基1(AtRFC1)是人类复制因子C大亚基p140的同源蛋白。在对3个复制因子C亚基1的T-DNA插入突变株系rfc1-1、rfc1-2和rfc1-3的检验中,证实插入位点分别位于第16、19号外显子和启动子区域。T-DNA在外显子中的插入突变引起胚胎发育异常并导致胚胎和种子败育。将野生型拟南芥复制因子C亚基1基因转化到突变株系rfc1-1和rfc1-2后恢复了突变株的野生型表型,证明胚胎发生异常表型是由拟南芥复制因子C亚基1基因突变所引起的,AtRFC1在拟南芥胚胎发生中起重要作用。

感毒清口崩片对流感病毒FM1感染小鼠肺组织细胞间粘附因子(ICAM-1)和细胞转录复制因子(NF-κB P65)表达的影响

目的:探讨感毒清口崩片对流感病毒FM1致小鼠病毒性肺炎的细胞免疫作用机理。方法:以小鼠经鼻吸入流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)复制小鼠病毒性肺炎模型,用感毒清高、中、低剂量灌胃治疗5天,并设利巴韦林、莲花清瘟阳性对照及正常对照。采用SABC免疫组织化学法检测流感病毒感染小鼠肺组织细胞因子ICAM-1、NF-κB P65的表达。结果:感毒清高、中、低剂量组和利巴韦林、莲花清瘟组与模型组比较ICAM-1阳性表达明显减少(P<0.01);模型组NF-κB P65显著高于正常组(P<0.01)。各给药组NF-κB P65的活化程度(棕黄色颗粒)明显少于模型组(P<0.01)。结论:感毒清能抑制ICAM-1和NF-κB P65,从而抑制过度的炎症反应,减轻肺损伤。

人类复制因子C4在肺腺癌进展中的初步功能探究

目的:分析人类复制因子C第四大亚基(RFC4)在肺腺癌组织和细胞中的表达,探究其在肺腺癌进展中的作用。方法:通过starBase分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中RFC4在肺腺癌组织中的表达;通过Kaplan-Meier plotter分析RFC4与肺腺癌的预后关系;利用人肺腺癌细胞A549、H1437和人正常肺上皮细胞BEAS-2B分析RFC4在肺腺癌细胞中的表达情况;转染RFC4 siRNA后,利用CCK-8法和Transwell法检测RFC4 siRNA对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:RFC4在肺腺癌组织中高表达,并与肺腺癌预后有较强的相关性,RFC4表达越高,肺腺癌患者的总生存期和无复发生存期就越低,预后较差;同样地,RFC4在肺腺癌细胞系中的表达也高于正常肺上皮细胞;RFC4 siRNA降低了肺腺癌细胞中RFC4的表达,使肺腺癌细胞的增殖、迁移侵袭能力下降。结论:RFC4在肺腺癌细胞中高表达,并促进了肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,涉及的详细分子机制还须进一步探究。

复制因子C蛋白复合物功能研究进展

复制因子C(repication factor C,RFC)是由5个亚基组成的蛋白复合物,在DNA复制和修复及细胞分裂增殖和抗逆性生长中具有重要的生物学功能。近年来,动物中有关RFC的研究发展较快,但是植物中有关RFC的研究起步较晚,研究相对滞后。从RFC蛋白复合体的组成与功能,酵母、人类和植物RFC各亚基的功能等方面综述RFC的研究进展。

基于多组学数据分析复制因子C4在肝细胞癌中的表达及预后

目的探讨复制因子C4(RFC4)作为肝细胞癌(HCC)潜在的预后标志物及其临床意义。方法使用基因表达谱分析(GEPIA)、Oncomine、UALCAN、人类蛋白图谱数据库和Kaplan-Meier plotter网站,分析RFC4 mRNA和蛋白在HCC中的表达,探讨其表达水平与HCC临床病理特征和预后的关系。通过cBioPortal网站分析HCC中RFC4的基因突变、拷贝数变异、mRNA表达及与预后的关系。利用String、Metascape数据库和Cytoscape软件对共表达基因和蛋白间的相互作用进行分析及可视化处理,并预测其生物学功能。结果与正常组织相比,RFC4 mRNA在HCC中显著高表达(P=4.58×10-8),同时发现RFC4 mRNA的表达水平与HCC的淋巴结转移、肿瘤分期及病理分级有关(P<0.05)。生存分析结果显示,相比RFC4 mRNA低表达组,RFC4 mRNA高表达组患者的总生存时间(HR=1.81,95%CI:1.26~2.59;P=0.001)、无进展生存时间(HR=1.65,95%CI:1.20~2.26;P=0.0019)及无复发生存时间(HR=1.70,95%CI:1.19~2.42;P=0.0029)均显著缩短。相比无RFC4基因改变组,RFC4基因变异组患者的预后更差(P<0.05)。富集分析结果显示,RFC4与其相关表达基因主要参与细胞周期、细胞分裂、DNA复制和修复等生物学过程。结论HCC中RFC4过度表达与预后相关,其可能是HCC潜在的预后生物标志物。

复制因子C亚基3基因突变对拟南芥开花和种子发育的影响

以拟南芥突变体rfc3-1为材料,研究了拟南芥复制因子C亚基3(AtRFC3)基因突变对拟南芥植株开花和种子发育的影响。结果表明:RFC3基因突变导致rfc3-1的开花时间比野生型植株提前1周,呈小花表型,且导致种子发育异常。将野生型AtRFC3基因转化到突变体rfc3-1后,恢复了突变株的野生型表型,证实AtRFC3基因在拟南芥花器官和种子发育中起重要作用。

肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1和复制因子C2的表达及临床意义

目的探讨肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1(Flap-endonuclease 1,FEN1)和复制因子C2(replication factor C2,RFC2)的表达及其临床意义。方法采用生物信息学方法分析FEN1、RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的表达;采用免疫组化法检测80例肺鳞状细胞癌及癌旁组织中FEN1和RFC2蛋白的表达,利用RT-PCR法检测两者mRNA表达并分析相关性,分析FEN1、RFC2与临床病理特征的关系;收集患者随访资料,绘制患者的生存曲线。结果FEN1和RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的高表达率分别为77.50%(62/80)、70.00%(56/80),在癌旁组织中的高表达率分别为42.50%(34/80)、32.50%(26/80),与公共数据库分析结果一致。RT-PCR结果显示,肺鳞状细胞癌组织中RFC2、FEN1 mRNA表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01);相关性分析结果显示,两者的表达存在明显正相关。不同TNM分期患者的FEN1、RFC2蛋白表达差异有统计学意义,是否存在胸膜侵犯与RFC2蛋白的表达差异有关。FEN1、RFC2高表达肺鳞状细胞癌患者的总生存期均低于低表达组。单因素分析结果表明:RFC2高表达、FEN1高表达、TNM分期与肺鳞状细胞癌患者的预后有关;多因素分析结果表明:TNM分期、FEN1和RFC2高表达是影响肺鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素。结论FEN1和RFC2有助于评估肺鳞状细胞癌患者的预后,两者之间存在协同作用,可能成为新的肿瘤标志物。

复制因子C4在胰腺导管腺癌中的表达及其与预后相关性研究

目的检测复制因子C4(RFC4)在胰腺导管腺癌组织中的表达情况,初步探究RFC4与胰腺导管腺癌的临床预后关系。探讨RFC4作为胰腺导管腺癌潜在的生物标志物的可能性。方法通过生物信息学的方法分析RFC4在胰腺导管腺癌组织及癌旁正常组织中的mRNA水平,并分析其表达与胰腺导管腺癌患者的生存率间的关系。回顾性分析76例接受手术治疗的胰腺导管腺癌患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测胰腺导管腺癌组织和癌旁正常组织中的RFC4蛋白的表达水平,分析其与胰腺导管腺癌患者临床病理特征的关系。结果生物信息学分析结果显示,RFC4的mRNA在胰腺导管腺癌组织中显著高表达,并与患者总生存率(P=0.046)与无病生存率(P=0.042)显著相关。免疫组化结果表明,RFC4在胰腺导管腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。RFC4在胰腺导管腺癌组织中的高表达与肿瘤大小相关(P=0.043),而与年龄、性别、肿瘤分级的相关性无统计学意义(均P>0.05)。结论胰腺导管腺癌组织中RFC4呈显著高表达并提示不良预后,且其表达水平与胰腺导管腺癌患者肿瘤大小有关。RFC4可能作为胰腺导管腺癌潜在的预后预测因子。

番茄DNA复制因子RFC1在减数分裂重组中的功能研究

减数分裂是真核生物有性生殖所必需,前期研究表明拟南芥DNA复制因子RFC1在减数分裂重组中具有重要作用,但其同源基因在其他物种中的减数分裂或其他功能还未有报道.为了检验番茄RFC1在减数分裂中的功能,我们建立了减数分裂特异RFC1^(RNAi)转基因番茄,发现其花粉活性显著降低,而且减数分裂异常.利用DAPI染色观察染色体形态,发现RFC1^(RNAi)减数分裂细胞在终变期和中期Ⅰ形成多价体,表明重组异常.DNA双链断裂指示蛋白γH2AX在RFC1^(RNAi)粗线期染色体上分布的保留滞后,进一步支持RFC1^(RNAi)中的重组异常.拟南芥和番茄分别属于真双子叶植物中的两个不同大支,蔷薇类和菊类,因此本文的结果也表明DNA合成基因RFC1在进化距离很远的不同植物物种中的功能相对保守.

人类免疫缺陷病毒1型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中的表达

目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Negative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5′端分别引入EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中。为了便于蛋白检测,在下游引物5′端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分别瞬时转染BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测Nef基因的表达情况。结果:成功构建了含Nef基因的重组真核表达质粒,核酸序列分析显示,克隆的Nef基因序列全长651bp,与GenBank中登记的Nef基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在Nef预期位置检测到特异性条带。结论:HIV-1Nef基因在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中获得了正确表达。

人巨细胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞复制允许因子Cdt1表达的影响

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染对人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast，HELF）复制允许因子Cdt1表达的影响，探讨HCMV感染的发病机制。方法以HCMV感染同步化的HELF作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Cdt1 mRNA的表达水平。结果模拟感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平最高，后逐渐下降，至72h时达最低水平，96h时又稍回升。感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平较低，24h时稍升高，48h达最高峰，48h后至72h急剧下降，96h时大致维持72h时水平。两组相比，12h、24h和48h时Cdt1 mRNA表达水平差异有显著性（P为0．001～0．030），12h和24h时感染组较模拟感染组明显降低，48h时感染组较模拟感染组明显升高。模拟感染组Cdt1 mRNA表达水平的高峰出现在感染后12h，而感染组的高峰则出现在感染后48h，较之明显滞后。结论HCMV感染使HELF复制允许因子Cdt1 mRNA的表达水平迟滞。

卡泼肉瘤病毒复制转录激活因子调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义

目的研究卡泼肉瘤病毒(Kaposis′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义。方法突变Bcl-2启动子第1个与第2个CCN9GG样序列,构建了新的报告质粒(命名为pGL3-△RRE1,2),用荧光素酶试验和染色质免疫共沉淀进一步验证CCN9GG样RTA反应元件的功能。构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,佛波酯诱导48 h后,分别用PCR、PI(碘化吡啶)染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率。结果突变第1个与第2个CCN9GG序列导致启动子活性显著降低;染色质免疫共沉淀试验证实RTA蛋白与CCN9GG序列存在直接相互作用。用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,佛波酯诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少。结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生。

卡泼氏肉瘤病毒复制转录激活因子上调宿主细胞survivin表达的机制

目的研究卡泼肉瘤病毒(KSHV)编码的复制转录激活因子(RTA)对宿主细胞survivin表达的调控及机制。方法用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞survivin mRNA和蛋白质表达水平;采用荧光素酶报告基因技术,检测RTA对survivin基因启动子活性的调节。结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞survivin mRNA和蛋白质表达水平显著增高。RTA通过增强survivin基因启动子活性反式激活survivin表达。结论 KSHV RTA能够特异性地增强survivin基因启动子活性,上调宿主细胞survivin表达。

细胞周期相关基因的胶质母细胞瘤预后模型构建及RFC2的细胞增殖效应研究

目的研究复制因子C亚基2(RFC2)与胶质母细胞瘤(GBM)患者预后和肿瘤细胞增殖之间的关系,并探索其在GBM发展中的潜在分子通路。方法利用生物信息学方法,筛选出可作为GBM独立预后因素的细胞周期基因,结合临床指标,构建GBM患者风险评分模型并验证其预测能力,对目标基因RFC2进行GO、KEGG和GSEA分析。取对数生长期的U87 GBM细胞进行慢病毒转染后分组(空白对照组、shRFC2#1、shRFC2#2),通过qRT-PCR、Western blotting、Edu染色、克隆形成实验检测mRNA表达、蛋白表达和细胞增殖。结果RFC2在GBM中表达上调,并随着胶质瘤病理级别升高,呈明显上升趋势。基因功能与通路分析结果提示,RFC2在姐妹染色体分离、染色体分离、细胞器裂变、核分裂、核有丝分裂等进程中,促进细胞周期过程中G1向S期转变。qRT-PCR和Western blotting结果显示,相较空白对照组,慢病毒敲低组中转录mRNA减少(P<0.0001)、翻译蛋白量减少;同样,与空白对照组相比,慢病毒敲低组Edu染色阳性率降低(P<0.0001),集落形成能力相应降低(P<0.001)。结论RFC2在GBM中高表达,且与胶质瘤分级和患者不良预后相关,促进GBM细胞增殖;RFC2有可能成为GBM潜在的生物标志物和治疗靶标。

基于胃黏膜MyD88、ATF2、NF-κB蛋白表达情况分析化浊解毒方加减治疗慢性萎缩性胃炎的机制

目的:基于胃黏膜髓样分化因子88(MyD88)、活化复制因子2抗体(ATF2)、核因子-kB(NF-κB)蛋白表达情况分析化浊解毒方加减治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的机制。方法:采用随机数字表法将于2021年1月~2023年5月在上海中医药大学深圳医院接受治疗的120例CAG患者分为A组和B组,每组各60例。A组给予幽门螺杆菌根除三联疗法,B组在A组基础上给予化浊解毒方加减治疗,两组均持续治疗2周。比较两组治疗2周后的临床疗效,治疗前、治疗2周后的胃镜黏膜征象积分、成纤维细胞生长因子23(FGF-23)、白细胞介素-32(IL-32)、降钙素基因相关肽(CGRP)、人表皮生长因子(EGF)、胃黏膜MyD88、ATF2、NF-κB蛋白表达情况,治疗期间的不良反应。结果:B组治疗2周后的总有效率高于A组(88.33%vs 71.67%,P<0.05)。两组治疗2周后的胃镜黏膜征象各项评分均比治疗前低,且与A组比较,B组较低(P<0.05)。两组治疗2周后的血清FGF-23、IL-32、EGF水平均比治疗前低,且与A组比较,B组较低;两组血清CGRP水平比治疗前升高,且与A组比较,B组较高(P<0.05)。两组治疗2周后的胃黏膜MyD88、ATF2、NF-κB蛋白表达均比治疗前低,且与A组比较,B组较低(P<0.05)。B组和A组治疗期间的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(5.00%vs 11.67%,P>0.05)。结论:化浊解毒方加减治疗可有效减轻CAG患者胃黏膜炎症反应及胃黏膜损伤程度,分析其机制可能与其能调节胃黏膜MyD88、ATF2、NF-κB蛋白的表达有关,有助于提高治疗效果,且安全性良好。

模因理论在第二语言环境下运用的可行性理论研究

通过分析在第二语言习得环境中是否存在有复制因子特征的语言因子,以及这些语言因子能否经历完整的模因生长过程,且最终生成第二语言模因进行传播,为第二语言环境下模因理论的运用提供理论依据,同时,为第二语言习得给出相应的模因学角度建议。

不同妊娠滋养细胞疾病组织中RFC2、PCNA表达的研究

背景与目的:基因表达谱芯片检测发现葡萄胎和绒毛膜癌存在复制因子C(replicationfactorC,RFC)高表达。复制因子C亚单位2(replicationfactorCsubunit2,RFC2)与DNA的复制和修复及细胞周期信号检查点的功能有关。本研究检测RFC2和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)蛋白在妊娠滋养细胞疾病(gestationaltrophoblasticdisease,GTD)中的表达情况,探讨二者表达的意义。方法:采用免疫组化SP法检测15例正常绒毛、38例葡萄胎、42例侵蚀性葡萄胎和18例绒毛膜癌组织中RFC2和PCNA蛋白表达情况。结果:葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中的RFC2和PCNA蛋白表达水平显著高于正常绒毛(PRFC2=0.000,PPCNA=0.004)。葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中RFC2的表达水平无显著性差异(P值分别为1.000、0.256)。术前未化疗的滋养细胞肿瘤患者(包括侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌)的RFC2表达高于术前化疗≥3疗程者(P=0.028)。WHOⅢ期者RFC2蛋白表达高于Ⅰ期者(P=0.01)。WHO预后评分为高危者,其RFC2表达显著高于低危者(P=0.018)。绒毛膜癌组织中PCNA的表达高于葡萄胎(P=0.037),葡萄胎恶变者PCNA的表达高于未恶变者(P=0.039)。高危组、中危组PCNA的表达高于低危组(P=0.036,P=0.048)。PCNA的表达与滋养细胞肿瘤术前?

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒与增生细胞核抗原的关系

增生细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PCNA)位于真核细胞中，为一环形发夹样蛋白结构，与复制因子和细胞周期蛋白p21(Cipl/Wafl)相互作用，是DNA延长的“分子开关”．他不仅对于DNA的复制，而且对于细胞的许多功能都是必需的，因此对于PCNA调节DNA复制及阐明蛋白相互作用的确切机制的理解是非常重要的．

第二语言模因的理论论证

二语习得环境中有符合模因条件的语言因子,将模因理论引入到二语习得研究中来从理论上是可行的。本文对此进行了理论论证。