复制缺陷型HCV C基因腺病毒表达载体的构建包装及鉴定

目的:构建能表达HCVC基因的复制缺陷型腺病毒表达载体.方法:将HCVH株C区基因定向插入到腺病毒穿梭质粒pAd.CMV-Link.1中,获得重组质粒pAd.HCV-C,再与pJM17共转染293细胞,包装腺病毒表达载体.通过酶切、PCR及测序对穿梭质粒进行了鉴定.对腺病毒载体进行了感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.利用间接免疫荧光法和Westernblot检测了腺病毒载体在人肝癌细胞HepG2中的表达.结果:酶切、PCR及测序鉴定证实,穿梭质粒插入片段为HCVC区基因.包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带HCVC区基因,并可以在HepG2细胞中表达HCVC抗原.结论:包装成功的复制缺陷型腺病毒载体可以在HepG2细胞中表达HCVC抗原,为丙型肝炎的基因治疗及疫苗的进一步研究奠定了基础.