复制缺陷型痘苗病毒天坛株的细胞生物学特性及复制缺陷机制探究

痘苗病毒减毒株作为基因表达载体,广泛应用于多种疾病的预防和治疗。复制缺陷型痘苗病毒天坛株(Non-replicating Tiantan vaccinia virus,NTV)作为一株高度减毒的痘苗病毒株,其生物学特性和复制缺陷机制还有待研究。探究NTV细胞生物学特性和复制缺陷机制。在不同种属和组织来源的细胞中测定NTV复制能力、细胞嗜性和毒力;Western Blot检测HeLa细胞中的NTV的A17/A27蛋白表达水平,Real-time PCR检测晚期蛋白A17/A27转录水平。NTV在BHK-21、CEF细胞中可有效复制和扩散,而在Vero细胞及人源细胞HeLa、2BS、Hep-2和143TK-中均不能有效复制;在HeLa细胞中,晚期蛋白A17和A27蛋白表达受阻,而转录水平基本不变。NTV是一株复制缺陷型痘苗病毒,在多种细胞中复制和扩散受限;NTV晚期蛋白A17和A27的表达受阻且与蛋白表达转录水平无关,初步判定蛋白表达受阻发生在蛋白翻译阶段。

复制缺陷型痘苗病毒天坛株复制缺陷机制初步探究

目的检测痘苗病毒早期、晚期蛋白表达水平，对复制缺陷型痘苗病毒天坛株（NTV）复制缺陷机制进行初步探究。方法构建原核表达载体表达并纯化与痘苗病毒复制密切相关的早蛋白E3和晚期蛋白F17，免疫小鼠制备相应鼠多抗血清，用其对NTV病毒在非允许细胞中相应蛋白的表达水平进行检测。结果在大肠埃希菌中分别表达、纯化了痘苗病毒E3和F17蛋白，并制备获得了相应的鼠多抗血清；Westernblot鉴定在非允许细胞Hela中复制缺陷型痘苗病毒NTV的早期蛋白E3及晚期蛋白A27能正常表达，但晚期蛋白F17表达受到明显抑制。结论F17蛋白表达受限可能是NTV复制缺陷的机制之一。