不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究

目的分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液,并比较分离纯化效果。方法用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液,透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态;分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion,SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA,HCD)含量,计算病毒抗原回收率和杂质去除率;用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性,并用t检验分析两种层析介质纯化效果差异。结果Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态;两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义(P>0.05),但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者,且差异有统计学意义(P<0.05);动物实验表明两种层析介质纯化的病毒样品均具有良好的免疫原性。结论相对于Sepharose 4FF层析介质,Capto Core700在保证病毒抗原蛋白回收率的基础上可以更有效地去除HCP、HCD和总蛋白质等工艺相关杂质。本研究为MDCK细胞生产H5N1型流感病毒疫苗纯化工艺开发提供了参考。

Capto Core 400和Sepharose 6FF在Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化工艺中的应用比较

目的:分别用新型复合型层析介质Capto Core 400和传统介质Sepharose 6FF纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒(Sabin strain poliovirus,sPV)去除宿主细胞蛋白(hostcell protein,HCP)和DNA,并且比较纯化结果及工艺参数。方法:用Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Vero细胞培养的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV浓缩液。分别检测纯化后sPV的D抗原含量、HCP残留量和DNA残留量,计算D抗原回收率、HCP和DNA去除率,并用t检验分析差异。结果:Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV的D抗原回收率差异均无统计学意义(t值分别为1.09、1.08、1.02,P值均>0.05),但前者的Vero细胞HCP(t值分别为3.15、3.23、3.54)和DNA去除率均高于后者(t值分别为3.41、3.25、3.62),且差异有统计学意义(P值均<0.05)。Capto Core 400与Sepharose 6FF的介质使用体积比值为0.05,上样后纯化时间比值为0.04,工作缓冲液使用量比值为0.25,工艺线性流速比值为10,每升介质上样量比值为20,最大耐压力比值为2。结论:对比Sepharose 6FF,Capto Core 400可以更有效地去除Vero细胞HCP与DNA,各个工艺参数得到了优化,提高了sPV层析纯化的工作效率,并节约了时间和成本。