4个Y-miniSTR基因座荧光标记复合扩增体系的建立

目的:构建DYS456,DYS392,DYS439,Y-GATA-H4等4个Y-mini STR基因座复合扩增体系,评价其检测敏感度、数据库兼容性和对降解检材的分型能力。方法:设计4个Y-mini STR的引物,用FAM、JOE、ROX、TAMRA分别标记其上游引物,构建复合扩增体系。利用本体系的引物扩增稀释过的Y23试剂盒的ladder,制备等位基因分型标准物。比较该体系与Promega Power PlexY23试剂盒在普通检材、降解检材的分型能力、敏感度和分型结果。结果:同一样本体系分型结果和商业化试剂盒Y23 STR分型结果相同,4个Y-mini STR复合扩增体系和对降解检材的分型成功率更高,敏感度一致,具有数据库兼容性。结论:本研究中的4个Y-mini STR复合扩增体系对降解检材的检测具有应用价值,敏感性较好,具有数据库兼容性,可以作为对降解检材分型时商业化试剂盒的补充。

13个快速突变Y-STR复合扩增体系的建立

目的 建立一套包含迄今所知全部13个快速突变Y-STR基因座的复合扩增检测体系,并对其进行性能验证及法医学应用价值评估。方法 采用五色荧光标记技术,通过引物设计、体系调配,构建出包含13个快速突变Y-STR基因座(DYF387S1、DYF399S1、DYF403S1、DYF404S1、DYS526、DYS449、DYS518、DYS547、DYS570、DYS576、DYS612、DYS626、DYS627)的一套复合扩增体系。根据文献和Sanger法测序,总结了一套快速突变Y-STR基因座的推荐命名方式。对该体系的灵敏度、种属特异性、抗抑制能力等性能及对DNA混合样本的扩增效果进行测试。结果 成功构建了一套快速突变Y-STR检测体系,归纳整理了一套推荐命名方式。经优化,该体系在退火温度为59℃、扩增循环数为28次时扩增效果最佳。体系灵敏度达0.125ng,有良好的种属特异性,对EDTA、血红素、腐殖酸及靛蓝等有较强的抗抑制能力。在高浓度的女性背景下(男女成分比为1∶4000),体系仍能扩增出完整的男性DNA分型。同时,对不同比例的男性DNA混合样本也表现出较好的扩增效果。结论 本文构建的复合扩增检测体系性能良好,可用于男性家系的精细化排查,可作为常见Y-STR检测试剂盒的重要补充。

法医DNA检验中快速复合扩增体系的建立

目的:建立快速法医DNA检验的复合扩增体系。方法:应用chelex法提取血样DNA,聚合酶链式反应复合扩增,非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳银染分型。结果:该方法缩短了检测时间,节省了人力和财力。结论:该方法快速可行,在法医DNA检验中具有较高的应用价值。

MD-VF-Auto SEM法与浮游生物基因复合扩增体系在溺死诊断中的应用比较

目的比较微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜(microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscopy,MD-VF-Auto SEM)法与浮游生物基因复合扩增体系在溺死诊断中的应用效果。方法采用MD-VF-Auto SEM法和浮游生物基因复合扩增体系分别对10例非溺死案例和50例溺死案例的肺、肝、肾组织进行检测分析,比较两种方法在各组织中的阳性检出率。结果溺死案例使用MD-VF-Auto SEM法检验的硅藻阳性率为100%,在6例非溺死案例的肝、肾组织中检出少量硅藻。浮游生物基因复合扩增体系的阳性率为84%,非溺死案例的肺、肝、肾组织结果均为阴性。两种方法检测结果相比,肝、肾组织的阳性率和总阳性率差异均具有统计学意义(P<0.05),而肺组织阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论MD-VF-Auto SEM法对硅藻检验具有较高的灵敏度,而浮游生物基因复合扩增体系还可检出硅藻外的其他浮游生物。两种方法相结合,可为溺死诊断提供更可靠的依据。

猫STR基因座复合扩增体系的构建及其法医学应用

目的构建一个猫STR基因座复合扩增体系并对其技术性能进行测试,评估其应用价值。方法整理和分析猫STR基因座文献数据资料,筛选可用于猫个体识别和亲缘关系鉴定的STR基因座和性别鉴定位点,设计荧光标记引物,构建复合扩增体系。对构建的复合扩增体系进行灵敏度、准确性、均衡性、稳定性、种属特异性、组织同一性和混合样本等验证,并对145例猫无关个体进行群体遗传学调查。结果成功筛选到16个猫常染色体STR基因座和1个Y染色体性别决定区,并构建了包含上述基因座的复合扩增体系。DNA模板量低至0.25 ng时仍可得到完整分型,检测其他常见动物样本时未见特异性扩增峰。群体遗传学调查结果显示,16个猫STR基因座累积个体识别率为1-3.57×10^(-20),累积非父排除率为1-6.35×10^(-5),累积匹配概率为3.61×10^(-20)。结论本研究构建的猫STR基因座复合扩增体系灵敏度高、种属特异性好、分型结果准确,能够为司法鉴定领域中涉及猫的种属鉴定、个体识别及亲缘关系鉴定等案件提供有效的解决方法。

牛的13个STR基因座复合扩增体系的构建及法医学验证

目的构建一套适用于牛进行个体识别和亲子鉴定的STR基因座复合扩增体系,并对其法医学应用性能进行评估。方法基于数据库筛选了13个多态性牛STR基因座(TGLA126、BT66、BT165、ETH10、CSSM0113、INRA005、BT54、BT61、INRA023、BM2113、G18833、UMN0929、INRA063),构建了5色荧光复合扩增体系。对复合扩增体系进行了灵敏度、准确性、均衡性、稳定性、种属特异性、组织同一性和混合样本等验证,并在96例牛无关个体样本中进行了群体遗传学调查。结果本研究成功构建了一套包含13个多态牛STR基因座的复合扩增体系,该体系灵敏度达125pg,检测同一个体的不同组织、重复检测样本均得到一致的分型结果,检测常见动物样本时未见特异性扩增峰,体系可耐受血红素(≤200μM)、腐殖酸(≤150 ng/μL)、尿素(≤24000 ng/μL)、靛蓝(≤5000ng/μL)、黑色素(≤400 ng/μL)等PCR抑制剂。13个STR基因座累计个体识别概率为0.99999999997,累计非父排除概率为0.99992666846。结论本研究构建的STR复合扩增体系分型结果准确、稳定,灵敏度高且特异性良好,可以用于牛的种属鉴定、个体识别和亲子鉴定等相关案件。

Y染色体STR的银染复合扩增

目的建立一套Y染色体STR的复合扩增体系,检测中国藏族人群的单倍型分布。方法利用复合扩增的方法扩增DYS434、DYS443和DYS456三个基因座,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染进行分型,检测西藏藏族101名无关男性个体单倍型分布。结果三个基因座在藏族样本中分别检测出4、4、6个等位基因,共检测出31种单倍型,其单倍型的变异度是0.9481,标准误为0.0049。结论Y-STR的复合扩增在法医学的亲权鉴定和个人识别中有重要的作用。

miniSTR基因座及其检测系统在降解检材中的法医学应用

目的建立16个miniSTR基因座的复合扩增体系,探讨其在法医学降解检材中的应用价值。方法采用六色荧光标记技术,对16个miniSTR基因座进行复合扩增体系的构建及法医学应用评估。结果开发出一个六色荧光标记的miniSTR扩增试剂盒,可同时对15个常染色体STR基因座、Amelogenin基因座和DYS391基因座进行分型检测,方法特异性好,分型结果稳定、准确,灵敏度达50 pg,实际案件中常见生物检材的检验结果良好。结论 16个miniSTR复合扩增体系对降解与微量检材的检测具有应用价值,灵敏度高,具有数据库兼容性,可以用于实际案件检验。