含弓形虫复合抗原基因的真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达

目的研究弓形虫复合抗原真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B在哺乳动物细胞中的表达情况。方法利用脂质体介导的转染技术,将真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B和空载体pcDNA3.1分别转染He-la细胞,400μg/mlG418加压筛选和200μg/mlG418维持筛选,获得稳定转染的Hela细胞。采用SDS-PAGE和West-ern-blot方法对复合基因P30-P22-CTXA2/B的表达产物进行鉴定。结果SDS-PAGE结果显示,重组质粒转染Hela细胞后的表达产物分子质量单位为64ku,Western-blot显示此蛋白条带能被抗P30抗体识别。结论构建的真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B能在哺乳动物细胞中成功表达插入基因所编码的融合蛋白,为进一步动物实验提供了实验依据。

问号澳洲型钩端螺旋体复合抗原基因ompL_1/flaB_2表达质粒的构建

目的 为增强澳洲型钩端螺旋体 (简称澳洲型钩体 ) 6 0 7株抗原的免疫原性 ,而构建其外膜蛋白抗原基因ompL1和内鞭毛抗原基因flaB2 的复合抗原基因重组质粒。方法 通过聚合酶链反应扩增ompL1及flaB2 ,将其分别克隆到pcD NA3 1/Myc-His(+)载体T7启动子下游 ,进行序列测定分析 ,在此基础上将ompL1及flaB2 同时克隆至表达载体 pcD NA3 1/Myc -His(+) ,构建成A - pcLMF1复合抗原基因表达质粒。结果 澳洲型钩体 6 0 7株的ompL1及flaB2 与报道的其它株钩体的序列呈很高的同源性。澳洲型钩体重组质粒A -pcLMF1经酶切鉴定证实 :有一 1 8kb片段插入。结论 澳洲型钩体复合抗原基因ompL1/flaB2

基因重组戊肝病毒多价复合抗原的表达及初步应用

目的 :利用基因工程技术体外表达高效 HEV多价复合抗原 ,建立一套敏感和特异的抗 HEV检测体系。方法 :将前期构建的基因重组戊肝病毒多价复合抗原表达质粒转化大肠埃希菌 JM10 9,筛选鉴定阳性克隆并进行诱导表达 ,表达产物经分子筛层析纯化后 ,利用 western blot作抗原特异性鉴定。以此抗原建立 EL ISA检测卫生部生物药品检定所 HEV血清参比品及临床血清标本 ,同时以 Genelab公司抗 HEVEL ISA试剂盒作为对照进行对比研究。结果 :重组质粒转化大肠埃希菌 JM10 9株后的阳性克隆 ,经诱导在SDS- PAGE中出现一条分子量大小约为 31.5 k D的蛋白条带 ,该蛋白纯化后经 Western Blotting检测证实为 HEV特异性抗原。以此抗原包被酶联板建立 EL ISA检测 5 3份国家卫生部标准 HEV参比血清 ,灵敏度达 10 0 % (38/38) ,特异度达 93.3% (14 /15 )。用此方法检测 6 8份临床标本 ,并与 Genelab EL ISA试剂盒结果比较 ,两者阴阳性相符的有 6 4份 ,总符合率为 94 .1%。结论 :本实验克隆表达的基因重组戊肝病毒多价复合抗原具有良好抗原性 ,以此抗原建立的抗 HEV EL ISA具有灵敏度高、特异性强的特点 。

HLA-DR、DQ等位基因与精神分裂症相关性的研究

目的 证明HLA DR、DQ等位基因与精神分裂症的发病密切相关。方法 HLA DR、DQ等位基因检测 :PCR SSP分型。结果 发现在大连地区随机选择的精神分裂症患者的HLA DQ8基因的频率 (9.0 % )明显高于正常对照 (2 .5 % )。精神分裂症患者的HLA DR、DQ等位基因的某些位点与免疫指标的改变有相关性。结论 ①HLA DQ8基因与精神分裂症有关联 ,可以认为HLA DQ8基因可能是精神分裂症的易感基因。②HLA DR、DQ等位基因的某些组合可能是精神分裂症发病的危险组合模式 ,对预测精神分裂症的基因易感性具有潜在的应用价值。③精神分裂症的免疫指标的改变与HLA DR、DQ等位基因的某些位点有相关性 ,说明精神分裂症与它的免疫指标的变化可能有内在的联系。

猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析

体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。

HLA-A、B等位基因多态性与“长寿”的相关性及其可能的免疫学机制

目的探讨HLA-A、B等位基因多态性与“长寿”的相关性及其可能的免疫学机制。方法应用微量聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对大连地区“长寿老年人”的40条染色体HLA-A、B等位基因进行分型,同时建立随机对照组。对20例“长寿老年人”的ANA和RF进行检测。结果“长寿老年人”的HLA-A29基因频率(5.00%)明显高于正常对照(0.33%)(P<0.05);HLA-B13基因频率(17.50%)明显高于正常对照(7.00%)(P<0.05)。而HLA-B61的基因频率(0.00%)明显低于正常对照组(12.00%)(P<0.05)。其他等位基因频率在实验组与对照组之间无显著性差异。“长寿老年人”ANA阳性率为90%,RF的阳性率为20%。结论HLA-A29和HLA-B13基因可能是人类长寿的有利基因,HLA-B61与长寿负相关,可能是长寿的不利基因。“长寿老年人”免疫学指标有特征性改变,可能与长寿有关。HLA-A、B等位基因的某些组合可能是二者的基因基础。

猪瘟病毒复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性

为研究猪瘟病毒多表位疫苗,参照GenBank及文献中已发表的猪瘟病毒抗原表位,结合计算机分析软件进行优化和组合。将重组的多表位基因BT23人工合成克隆至pMD18-T质粒中,利用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切并回收BT23基因,将BT23基因片段亚克隆插入pGEX-6P-1表达载体中,构建了猪瘟病毒复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT23,经酶切和测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,以终浓度为0.9mmol/L的IPTG进行诱导,8h后表达量最高,表达产物为融合蛋白,并且以包涵体形式存在,分子质量约36ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western-blot检测结果表明,表达的融合蛋白能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,说明表达产物具有良好的反应原性。免疫攻毒试验结果表明,复合多表位融合蛋白具有免疫保护作用,这为应用该融合蛋白制备猪瘟病毒免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗的研究奠定了基础。

HLA-DRB1和HLA-DQB1基因与肝癌及肺癌的相关性研究

目的：通过对肝癌及肺癌患者HLA-DRB1、DQB1等位基因位点的检测，探讨HLA-DRB1、DQB1基因多态性与肝癌和肺癌的关联性。方法采用PCR-SSP技术，检测50例肝癌患者、54例肺癌患者的HLA-DRB1、HLA-DQB1基因位点18个，并以100名健康志愿者作为对照。结果肝癌组及肺癌组HLA-DQB1＊03型频率明显高于对照组，HLA-DQB1＊06型频率明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）；肝癌组和肺癌组之间差异无统计学意义。结论 HLA-DQB1＊03可能是肿瘤的易感基因；HLA-DQB1＊06可能是肿瘤的抗性基因。