复合水解酶黑曲霉HD-1固体发酵工艺研究

黑曲霉HD-1是一株分泌高单位酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、糖化酶等多种水解酶的生产菌,本研究采用单因素搜索和正交试验对其固体发酵工艺进行优化,并采用中心组合设计进行扩大生产试验,结果表明酶活可达:酸性蛋白酶1.1万U左右,果胶酶9千u以上,纤维素C_X酶1.1万U左右,纤维素C_L酶4千U以上,糖化酶7千U左右。同时说明数理统计方法设计实验,工作量小,优化结果准确。

泛素-蛋白水解酶复合体通路在生殖系统中的研究进展

泛素 蛋白水解酶复合体通路 (ubiquitin proteasomepathway,UPP)广泛参与机体多种代谢活动 ,如细胞周期调控、细胞凋亡、免疫和变态反应、以及多种恶性肿瘤、遗传病和神经系统疾病的发生 ,但UPP在生殖系统的研究目前仍处于起步阶段 .新近的研究资料表明UPP不仅参与精子发生、精子变态 ,以及雌雄配子结合后精子线粒体的降解等雄性生殖系统的多种生理活动 ,也与妊娠早期和正常月经周期子宫内膜的组织重建、甾体激素受体的代谢等雌性生殖系统的生理活动密切相关 .

泛素-蛋白水解酶复合体通路在卵母细胞减数分裂和受精中的作用

泛素-蛋白水解酶复合体通路(Ubiquitin-proteasome pathway,UPP)高效快速并高度选择性地降解特定的蛋白质,从而参与控制多种重要的细胞生物学过程。在卵母细胞减数分裂和受精过程中,该通路通过降解细胞周期中的关键因子,如细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子等细胞周期调控因子,从而参与卵母细胞生发泡破裂、第一极体排放、MⅡ阻滞的维持和克服等过程,使细胞通过特定的检验点。此外,UPP也与丝裂原活化蛋白激酶通路、Polo样激酶、成熟促进因子、蛋白激酶C、钙调蛋白依赖激酶Ⅱ等减数分裂关键调节因子相互作用来参与卵母细胞减数分裂成熟和受精。一些周期蛋白(如 后期促进复合体的某些亚单位等)还充当泛素连接酶成分,直接参与泛素化过程。

泛素-蛋白水解酶复合体通路与病毒侵染

泛素 蛋白水解酶复合体通路 (Ubiquitin proteasomepathway ,UPP)是细胞内依赖于ATP、非溶酶体途径的蛋白质降解通路 ,广泛参与包括细胞周期调控、细胞凋亡、信号转导、转录调控、免疫应答及抗原呈递等多种机体代谢活动。UPP在病毒侵染中作用的研究仍处于起步阶段。已发现 ,昆虫病毒和非洲猪瘟病毒分别是迄今发现唯一编码泛素和泛素连接酶的病毒。最近 ,大量的研究表明 ,病毒利用宿主细胞的UPP逃避免疫系统监控。

复合植物水解酶提取花生油脂体工艺研究

为了提高花生油脂体的提取率,选用复合植物水解酶辅助提取花生油脂体。通过单因素实验考察了料液比、酶用量、酶解时间、酶解温度对复合植物水解酶提取花生油脂体提取率的影响。在单因素实验的基础上,采用正交试验对复合植物水解酶提取花生油脂体的工艺进行优化。实验结果表明,在所选取的参数范围内,各因素对花生油脂体提取率的影响由大到小为:料液比、酶解温度、酶解时间、酶用量。获得其较佳工艺条件为料液比1:4(g/mL)、酶用量1.25%、酶解时间80min、酶解温度50℃,在该条件下花生油脂体提取率为48.92%。

泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子体外获能、顶体反应及穿卵中的作用

采用能阻断泛素-蛋白水解酶复合体通路(UPP)的抑制剂——ALLN, 抗泛素化蛋白的单克隆 抗体—— UCP1和抗泛素的多克隆抗体—— anti-Ub处理精子或卵, 通过统计B型、AR型精子百分率的变化和形成原核的卵的百分率的变化, 研究部分阻断或完全阻断UPP通路对体外精子获能、顶体反应及穿卵的影响. 结果表明: UCP1, anti-Ub及ALLN对精子体外获能和顶体反应均无明显影响, 但对精子穿卵能力有显著抑制作用. 据此推测UPP可能参与精子体外穿卵过程.

响应面优化复合植物水解酶提取梅州金柚皮可溶性膳食纤维

采用复合植物水解酶结合酸法提取梅州金柚皮中可溶性膳食纤维,以单因素试验为基础,以可溶性膳食纤维提取率为指标,选择酸法适合提取条件,再根据Box-Behnken实验设计原理,通过响应面分析得到酶法提取优化组合条件。得到最佳工艺为:稀硫酸p H3、物料比固定为1:20、酸解温度为50℃,酸解时间2 h,酶解温度为44℃,酶添加量为0.25 mg/g,酶解时间为2 h,此时可溶性膳食纤维提取得率为20.2438 mg/g。膳食纤维的持水力为9.397 g/g,溶胀性为11.25 m L/g,梅州金柚皮可以作为一种优良的膳食纤维来源。

泛素-蛋白水解酶复合体通路对小鼠围植入期子宫血管内皮生长因子及其受体表达的影响

以小鼠宫角注射为动物模型,用0.1μg/mL lactacystin抑制子宫中泛素-蛋白水解酶复合体通路,检测小鼠围植入期(妊娠第5-7天)子宫胚胎植入数量变化以及血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1和Flk-1)的表达变化.结果表明,抑制泛素-蛋白水解酶复合体通路后,小鼠胚胎植入数量显著下降:半定量RT-PCR及Western blot结果显示,注射lactacystin除引起子宫中VEGF及其受体mRNA和蛋白表达显著降低外,也使VEGF转录调节因子HIF-1的α亚基(HIF-1α)mRNA及蛋白表达降低.以上结果表明泛素-蛋白水解酶复合体通路可能通过调节HIF-1α而影响VEGF的表达,同时该通路也参与VEGF受体的表达调控,这可能是影响小鼠胚胎植入的原因之一.

泛素-蛋白水解酶复合体通路对Smad通路的调节

Smad通路是转化生长因子 β(TGF β)胞外信号自跨膜受体向核内传递的信号通路。Smads最终与靶基因启动子结合 ,完成TGF β对核内基因转录的调控作用。泛素 蛋白水解酶复合体通路 (UPP)是参与众多细胞生理事件的重要蛋白水解途径。Smad通路的适时关闭是完成Smads正确转录调控功能的重要机制。近 3年的最新研究发现了降解Smads及Smad通路调节蛋白的泛素连接酶新成员 ,如Smurf1、Smurf2、SCF/Roc1、SIAH1、UbcH5等 ,从而证明Smad通路的关闭和调节通过UPP实现。

泛素-蛋白水解酶复合体通路

在细胞生命周期中 ,在一定时间必须有新的功能蛋白的产生而启动细胞的增殖、分化和运转 ,与此同时也伴有完成功能的蛋白质的降解 .细胞内蛋白质降解必须有精确的时间和空间的调节和选择 .如果蛋白质降解的时间、速率和部位出现异常 ,将导致严重的细胞增殖、分化的障碍 ,甚至细胞凋亡 .泛素_蛋白水解酶复合体通路是一种细胞胞质和核内蛋白ATP依赖性的非溶酶体降解机制 ,具有高度选择性地进行细胞内蛋白的降解 ,尤其是短命的功能蛋白、癌基因产物和变性变构蛋白等 .应急状态下也降解细胞内其他结构蛋白 .此种降解通路具有高度的进化上的保守性 .泛素由 76个氨基酸组成 ,广泛存在于某些细菌、酵母菌、昆虫、鱼、牛、人及高等植物之中 ,功能相似而氨基酸变化很小 .此种特异性的蛋白水解通路的发现被认为是细胞周期调控、肿瘤发生发展和免疫学等研究的重大转折 ,现已深入到生物医学研究的各个领域 .

毛细管电泳法测定绿茶酶解液中的还原糖成分

建立了一种利用毛细管电泳测定绿茶酶解液中主要还原糖的方法。针对绿茶浸提液中可能含有的麦芽糖、乳糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、半乳糖醛酸等9种主要还原糖,当被1-甲基-3-苯基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生后,在电压21 kV,硼酸浓度200 mmol/L,pH值11.0和柱温25℃的条件下可实现基线分离。对这9种还原糖衍生物作标准曲线,在0.5-10 mmol/L浓度范围内线性相关度R2为0.9939-0.9994,最低检测极限范围是0.09-0.23μmol/mL,9种还原糖衍生物加标回收率在94.04%-101.9%。应用该方法测定绿茶酶解液中主要还原糖的组分和含量,得出酶解液中主要含有木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和半乳糖醛酸5种,它们的浓度随着复合水解酶的来源不同而不同。

真空冷冻干燥法在微孔淀粉制备过程中的应用

分别采用真空冷冻干燥法和真空干燥法对复合酶水解淀粉所得到的微孔淀粉进行干燥处理,并分析测试干燥后的多孔淀粉的吸水率、吸油率和微观形貌,结果表明:采用真空干燥法所得的多孔淀粉颗粒发生团聚,且孔洞结构会受到一定程度的破坏;而采用真空冷冻干燥法,多孔淀粉的颗粒形貌和孔洞结构都保持得较为完好;采用真空冷冻干燥法处理的多孔淀粉的吸水率和吸油率分别比采用真空干燥法处理多孔淀粉的提高了24%和58%;采用真空冷冻干燥法处理的多孔淀粉吸附性能明显提高。在微孔淀粉制备过程中,真空冷冻干燥法更为适合于多孔淀粉的干燥处理。

酶法制备不同发酵度高浓大麦糖浆的研究

报道了以饲料大麦为原料、脱脂玉米粉为辅料,酶法生产75%高浓度啤酒酿造用大麦糖浆及其应用于啤酒酿造试验的研究结果。研究表明,以不适用于发芽的大麦与脱脂玉米粉为原料,全酶法可生产出与麦汁成分相近的大麦糖浆,具有丰富的α-氨基氮等酵母营养物质。探讨了生产不同发酵度糖浆的工艺条件。并通过对高浓度糖浆的保质期进行实验,证明75%的浓度可以长期保存的实验结论。采用所研制的糖浆代替30%的麦芽汁进行啤酒酿造试验获得了理想的结果。

后期促进因子与细胞周期

近年来,发现了细胞周期中许多关键的调控因子,cdc 基因、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及细胞周期蛋白(cyclin)等。其中有丝分裂后期促进因子(APC)构成泛素 蛋白水解酶复合体通路,参与周期蛋白和周期蛋白依赖激酶降解,促进细胞周期的运转。同时,APC的活性也受到 G1 期和 M期的细胞周期依赖蛋白激酶(CDK)的调节, cdc20 为APC的正调控因子,APC与细胞周期各因子间协调作用,促进细胞周期的运转。

CagA阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞表达泛素活化酶E1基因

目的 研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞 (GES 1)作用的机制。方法 将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES 1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES 1细胞进行mRNA差异显示 ,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因。结果mRNA差异显示片断之一命名为PFN1,仅在Hp(CagA+ )培养滤液处理的GES 1细胞中表达 ,斑点杂交结果与之一致。与GeneBank资料序列同源性比较分析提示PFN1与泛素活化酶E1同源性 99% ,即为人类泛素活化酶E1基因的一部分。结论 泛素 蛋白水解酶复合体通路中的泛素活化酶E1基因可能参与了Hp的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程。

利用剩余活性污泥制备洗涤用酶制剂的研究

研究了剩余活性污泥中复合水解酶的提取分离及制成洗涤用复合水解酶制剂的方法.离心脱水的污泥按料液比1∶2加入1%的Triton X-100水溶液搅拌提取60 min,蛋白酶的提取率为71.7%;酶提取液经膜分离和浓缩后用70%乙醇沉淀,沉淀经冷冻干燥得复合水解酶粉末,每千克剩余活性污泥可制备1.7 g复合水解酶粉,其中胶原蛋白酶、碱性蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶的酶活分别为4.216、3.714、11.915、3.060和1.291 U/mg;在复合水解酶液中加入由4%蔗糖、4%甘露醇、30 mmol/L甘氨酸和10 mmol/L MgSO_(4)组成的复合稳定剂可大大延长酶的保存期;再按固体物比4%复合酶粉末、10%硅藻土、10%可溶性淀粉、6%复合稳定剂、70%十水硫酸钠的配方制成洗涤用酶颗粒制剂.酶颗粒制剂的主要酶种类与酶活性与市售商品洗涤用酶制剂一致,可用于作洗涤的酶添加剂.本研究为剩余活性污泥的资源化利用提供了新的途径.

超声辅助酶法提取柚子皮水溶性膳食纤维及其抗氧化活性研究

以柚子皮为原料,采用超声辅助酶法提取柚子皮中水溶性膳食纤维,探讨料液比、加酶量、超声时间对提取率的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验优化工艺条件,并对其抗氧化活性进行研究。结果表明,超声辅助酶法提取柚子皮水溶性膳食纤维的最佳工艺条件为:加酶量400μL,料液比1∶16(g/m L),超声时间25 min,在该工艺条件下的平均提取率为4.67%。浓度为2 mg/m L的柚子皮水溶性膳食纤维对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率分别为(11.72±1.41)%和(40.79±4.06)%,对铁的还原能力为(0.128 3±0.004 7)mmol/g,表现出较好的抗氧化活性。