紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对HCASMC炎性活化过程中TLR4-MyD88信号通路的影响

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中TLR4-MyD88信号通路的影响。方法选用4-6代的HCASMC,用四唑盐(MTT)比色法筛选出紫杉醇水蛭素支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性大、小两个浓度,使细胞活力保持在90%以上。进而将细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)造模组、LPS造模+紫杉醇水蛭素大浓度组、LPS造模+紫杉醇水蛭素小浓度组,其中大、小浓度紫杉醇水蛭素复合物处理组在LPS造模前预处理细胞4 h,继而用Q-PCR法对TLR4和MyD88 mRNA进行检测,并用Western blotting法检测对应蛋白表达的变化。结果 1μmol/L的紫杉醇配比0.8 mg/ml水蛭素对HCASMC生长有明显的抑制作用,细胞活力与空白对照组相比差异明显(P<0.05)。1μmol/L的紫杉醇配比0.4 mg/ml水蛭素干预后细胞活力降低为78.7%,对细胞生长产生了一定影响,其余各浓度组细胞活力均能保持在90%以上。紫杉醇水蛭素复合物预处理细胞4 h后,Q-PCR结果显示,与空白对照组相比,LPS造模后可同时激活TLR4、MyD88的mRNA表达(P<0.05),HCASMC炎症模型构建成功。各干预组经紫杉醇水蛭素处理后,与单纯LPS模型组相比,TLR4的mRNA基因表达量显著降低(P<0.05),但不影响MyD88基因表达(P>0.05)。Western blotting结果显示:与空白对照组相比,LPS模型组TLR4、MyD88蛋白表达明显升高(P<0.05),成功构建了稳定的HCASMC炎症模型。经紫杉醇水蛭素处理后,各干预组TLR4、MyD88蛋白表达较LPS模型组显著降低(P<0.05),其中紫杉醇水蛭素大浓度组的抗炎作用相对更强。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC细胞炎性活化过程中TLR4-MyD88通路的激活具有明显的抑制作用,此抑制作用不通过影响MyD88基因表达来产生,而可能与其对MyD88蛋白水平的调控有关。

Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物的构建及在滑膜肉瘤小鼠模型上的应用

目的建立Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物并利用复合物制作移植瘤动物模型,为其他软组织肿瘤动物模型的建立提供思路。方法培养扩增SW982细胞,消化收集细胞,用Metrigel对SW982细胞进行重悬,同时加入VEGF,应用Transwell制作Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物,并进行培养,HE染色观察细胞支架复合物形态结构。选取10只4周龄雌性SCID小鼠,随机分成支架组和对照组。支架组小鼠腋下移植细胞支架复合物,对照组注射移植细胞培养基悬液。8周后,比较两组造模成功率,取材HE染色观察肿瘤的组织形态特点。结果利用Metrigel对SW982细胞进行立体式培养,能够很好的模拟细胞在体的生长状态。采用细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,成瘤率较对照组明显提高,且肿瘤体积更大,细胞密度更高,肿瘤内部有新生血管。结论利用MetrigelVEGF-SW982细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,能够极大地提高模型成瘤率,为滑膜肉瘤的研究提供便利。

水凝胶与陶瓷化骨及β-磷酸三钙复合对骨髓基质细胞成骨能力的影响

目的 :观察水凝胶 (hydrogel ,HG)分别与陶瓷化骨 (ceramicbovinebone ,CBB)、β 磷酸三钙 (β tricalciumphosphate ,β TCP)复合成的复合材料对骨髓基质细胞 (MSCs)的生长、分化的影响 ,寻找更适合骨组织工程的复合物支架材料。方法 :将诱导的骨髓基质细胞接种于CBB HG、β TCP HG上 ,另外MSCs分别接种于单纯的CBB、β TCP上作为对照 ,进行体外培养。 5、10d取材 ,细胞计数观察贴附及增殖情况 ,扫描电镜观察细胞形态以及与材料的贴附情况 ,检测碱性磷酸酶的活性以及免疫组织化学方法检测Ⅰ型胶原的分泌情况。结果 :骨髓基质细胞与各组材料均能形成良好贴附 ,两种复合材料上贴附的细胞数量明显高于对照组 ,CBB HG、β TCP HG两组间细胞的碱性磷酸酶的活性以及Ⅰ型胶原的分泌量无明显差别 ,但显著高于对照组。结论 :CBB HG、β TCP HG均能促进骨髓基质细胞分化及基质分泌 。

抗骨结核载药缓释支架的研究进展

骨结核是除肺结核以外发病率最高的结核，占全部结核发病率的3％～5％，占肺外结核发病率的35％～50％。目前，临床治疗一般是用手术清除病灶部位的坏死组织，然后再放置抗结核药物以杀死残留的结核杆菌，但是放置的抗结核药物粉末易被体液冲走。载药骨支架既具有充填重建、诱导成骨作用，又能立体局部持续缓慢释放抗结核药物，能够大大提高抗结核药物的疗效并降低副作用，具有很高的临床价值。本文对抗骨结核载药缓释支架的最新研究进展进行综述，为新型抗结核载药缓释骨支架的设计提供思路。

羊膜细胞Ⅰ型胶原蛋白支架复合物用于修复胎膜破口的研究

目的 探讨羊膜细胞I型胶原蛋白支架复合物用于修复胎膜破口的可行性.方法 将人羊膜间质细胞接种在I型胶原蛋白三维基质中,人羊膜上皮细胞接种在基质的表面,构建羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白支架复合物以模拟人体羊膜组织结构.DAPI标记三维基质中的细胞核以计数羊膜细胞在三维培养第2,8天的细胞数量.动态测定羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白复合物体积.培养含有不同数量羊膜间质细胞的羊膜细胞/I型胶原蛋白支架复合物,15 d后检测抗张强度.结果 第2天和第8天的细胞数目分别是（121±5）/cm2和（124±4）/cm2（P〉0.05）.第5天时,I型胶蛋白的面积为原体积的45%,第10天时约为15%,第15天时约为原14%,羊膜间质细胞的存在对于Ⅰ型胶原蛋白基质具有重新塑形的作用（P〈0.01）,羊膜间质细胞可以导致I型胶原蛋白的收缩,抑肽酶和GM6001也不能抑制这种收缩.羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白复合物抗张强度随人羊膜间质细胞数量的增多而增强（P〈0.01）.结论 羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白支架复合物有望成为修复胎膜破口的材料.

旋转系统下三维培养成纤维细胞-PGA复合物的实验研究

目的 观察微重力旋转培养系统对细胞种植于支架和细胞 支架复合物体外培养的影响。 方法 分离培养兔皮肤成纤维细胞 ,实验用第 2代细胞。 ( 1)分别用静止接种和动态接种方式 ,以 2× 10 6/cm3 的细胞密度接种于PGA网架 ,静止接种即滴加细胞悬液于PGA网架上 ,动态接种是把细胞悬液与PGA网架置于旋转细胞培养系统旋转接种 ,分别于 2、4、8、12、2 4h消化下网架上细胞后计数 ,通过计算细胞吸附率了解细胞吸附情况 ;( 2 )将相同细胞密度静止接种的细胞—PGA复合物分别置于旋转和静止条件下培养 ,于 1、3、5、7、14、2 1dMTT法检测细胞增殖 ;用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长、基质形成及其细胞与PGA纤维结合状况的变化。 结果 细胞吸附量随时间延长而逐渐升高 ,动态组在接种后 8、12、2 4h细胞吸附率显著高于静止接种组 ,分别为 ( 46 70 %±2 16 %)比 ( 31 5 0 %± 3 5 4%) ;( 5 6 36 %± 3 18%)比 ( 34 2 8%± 3 16 %) ;和 ( 6 6 32 %± 4 6 0 %)比( 37 38%± 4 6 6 %)。在 3周培养中旋转培养组细胞增殖快于静止组 ,而且细胞在网架中分布比静止组均匀 ,并伴有活跃的细胞基质分泌。 结论 旋转培养系统具有促进细胞吸附增殖分化和在支架内均匀分布的特点 。

脂肪间充质干细胞在创面愈合中的应用

皮肤的创面愈合是一个相对复杂的生物学过程,此过程中需密切协调级联反应来恢复和修复损伤部位,包括细胞迁移和增殖、血管生成、细胞外基质沉积和重塑。在愈合过程中,ADSCs起着不可或缺的作用,而经过特殊处理后的ADSCs可大大加快创面愈合过程,特别是对类似于癌性创面、失神经创面、内分泌疾病等引发的难愈性溃疡创面等特殊创面的治疗,ADSCs的应用还有待开发。本文从ADSCs在创面愈合中的作用机制、经过特殊处理的ADSCs在创面尤其是在难愈性创面的应用等方面进行综述。

以改良方法制作软骨细胞外基质构建高质量组织工程软骨

目的:探讨应用改良方法制作的软骨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)能否构建高质量组织工程软骨。方法:应用传统匀浆-脱细胞方法制作软骨ECM粉末,在此基础上通过物理研磨颗粒筛选获得细腻的软骨细胞外基质粉末(fine extracellular matrix,FECM)。将两种粉末通过冷冻干燥法制成ECM支架和FECM支架作为对照组和实验组。以软骨组织工程中成熟应用的聚乳酸聚羟基乙酸聚合物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]支架为阳性对照组。取等量大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)种植于ECM支架和FECM支架,同时将BMSCs诱导分化为软骨细胞后种植于PLGA支架,然后将3种细胞-支架复合物移植入裸鼠皮下,28 d后取出样本并进行相关检测。结果:FECM支架孔径均一,结构规整,其构建的组织工程软骨在大小、色泽、糖胺多糖(s GAG)分泌以及胶原沉积等方面均远优于对照组构建的组织工程软骨,与阳性对照组无明显差异。结论:由改良方法制作的FECM支架在无外源性转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)情况下可构建出高质量的组织工程软骨,具有潜在的临床应用价值。

深低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞修复兔桡骨缺损

背景:以往研究表明羟基磷灰石复合骨髓间充质干细胞具有良好的骨缺损修复效果,但这种复合材料在冻存后是否具有骨缺损修复效果还不清楚。目的:观察深低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞复合修复骨缺损的效果。方法:制备27只日本大耳白兔桡骨10mm缺损模型,随机分为冻存复合材料组、新鲜复合材料组与羟基磷灰石组,3组分别于骨缺损处植入-80℃保存3个月的羟基磷灰石/同种异体骨髓间充质干细胞复合物、新鲜制备的羟基磷灰石/同种异体骨髓间充质干细胞复合物及单纯羟基磷灰石,植入后8,12周行大体观察、X射线观察及苏木精-伊红染色等组织学观察,并于12周行生物力学检测。结果与结论:术后12周,冻存复合材料组、新鲜复合材料组骨缺损大部分愈合,有成熟骨小梁通过,有的可见髓腔通畅,塑形较好;羟基磷灰石组骨痂生成少,骨缺损部分愈合,塑形欠佳,新骨生成少于冻存复合材料组、新鲜复合材料组(P<0.05)。冻存复合材料组、新鲜复合材料组最大载荷明显大于羟基磷灰石组(P<0.05)。表明低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞复合植骨材料的骨缺损修复能力与新鲜制作的复合材料几乎一致,未因冻存受到影响。

等离子体处理聚乳酸／羟基乙酸材料的细胞相容性

乳酸羟基乙酸共聚（PLGA）支架虽然早就应用于组织工程，用以修复肌腱、骨、外周神经等组织的缺损，但由于其亲水性差，细胞吸附力弱，在制作细胞-支架复合物时，往往效果不甚理想。我们用常压等离子体射流技术制备了PLGA支架。

盆底重建材料在女性盆腔脏器脱垂中的应用

女性盆腔脏器脱垂（female pelvic organ prolapse,FPOP）是一种常见的盆底功能障碍性疾病,是指由于盆底肌肉和盆底支持组织的薄弱,导致盆腔脏器下降,从而引起的脏器位置和功能异常。FPOP多发于40岁以上的中老年女性^（[1]）,尽管不会威胁生命,但严重影响患者的生活^（[2]）。