基于PSCA的肽-DNA复合疫苗的构建及其免疫学效应的检测

目的设计、制备和鉴定PLL-PSCA14-22/-pcDNA3.1(+)-PSCA复合疫苗及其免疫学效应的检测。方法将带正电荷的多聚赖氨酸(PLL)通过化学方法与PSCA的一个CTL表位肽PSCA14-22偶联,将上述阳离子多肽PLL-PSCA14-22与带负电荷的编码PSCA的重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA利用正负电荷相吸作用制备靶向PSCA的肽-DNA复合疫苗;通过DNA阻滞实验和DNaseⅠ保护实验鉴定制备的疫苗;将制备成功的复合疫苗体外转染Hela细胞,通过RT-PCR检测该疫苗的转染效率;并进一步通过LDH释放实验检测该疫苗对PSCA阳性的前列腺癌细胞系LNCaP的特异性杀伤效应。结果当PLL-PSCA14-22多肽与pcDNA3.1(+)-PSCA重组质粒正负电荷比≥2时,DNA电泳条带完全消失,即重组质粒pcDNA3.1(+)-PSCA完全被PLL-PSCA14-22多肽所包裹,复合疫苗可有效抵抗DNaseⅠ的消化作用。RT-PCR结果表明该复合疫苗在体外可有效转染Hela细胞,且当正负电荷比为64时出现较高的转染效率,并且能够有效激发CTL应答杀伤LNCaP细胞。结论成功构建的靶向PSCA的多肽-DNA复合疫苗可有效转染真核细胞,诱导CTL应答杀伤前列腺癌细胞,该研究为进一步体内动物实验探讨该疫苗对前列腺癌的免疫治疗效应奠定了基础。

新城疫V_4+C_(30)复合疫苗的制备和免疫研究

将新城疫病毒V4株与克隆_3 0株组成复合疫苗 ,两疫苗株在等浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )条件下不存在明显的相互干扰现象 ,高浓度 ( 1∶10稀释 )V4株可以抑制低浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )C30 株致死鸡胚的能力 ,免疫研究表明 ,复合疫苗兼顾了两种疫苗株的优点。

中国对虾复合疫苗的初步研究

于1996年11月-1997年5月，运用差异离心、蔗糖梯度离心、柱层析等方法从发病中国对虾分离出杆状病毒并纯化；分别用冷乙酸处理法、十二烷基硫酸钠-苯酚法提取纯化该病毒的结构蛋白与核酸、λDNA；分别用十二烷基硫酸钠煮沸法、三氯乙酸法纯化弧菌的肽葡聚糖和鸡卵粘蛋白；配制出小牛血清白蛋白、蜗牛凝集素两溶液。然后从超氧化物歧化酶（SOD）活力和溶菌活力两种免疫指标分析灭活病毒和以上提取、纯化的7种大分子物质对中国对虾的免疫效果，根据其结果筛选几种物质制成复合疫苗，测定复合疫苗对对虾的免疫作用。结果表明，病毒免疫后的SOD活力、溶菌活力均有提高。7种大分子物质免疫后，除小牛血清白蛋白外，其余6种物质的两种酶活性均有提高。以6种物质组成的复合疫苗免疫实验表明，两种酶活力提高明显（SOD活力最高峰达224．10units，溶菌活力最高峰为0．122units）。说明复合疫苗具有提高SOD和溶菌活力的作用，可以增强中国对虾的防御能力。

关键词：复合疫苗

葛兰素史克制药公司宣布，该公司生产的百白破合脊髓灰质炎复合疫苗Kinrix近日通过了美国FDA批准。注射一针Kinrix即可预防百日咳、白喉、破伤风、脊髓灰质炎四种疾病。

美泰研制的“复合疫苗”可降低三成感染艾滋病风险，但仍远低于成功疫苗的有效率且迄今不清楚该疫苗作用机理

据2009年9月25日及28日《参考消息》分别援引美联社曼谷9月24日及路透社华盛顿9月28日电，美国和泰国科研人员2009年9月24日在曼谷宣布，在泰国进行的一种新型疫苗临床试验表明，这种疫苗可使人体感染艾滋病病毒的风险降低31％，科学家对在经历了近年艾滋病疫苗研发“屡战屡败”的局面后获得的这一预防艾滋病“联合疫苗”的试验结果持谨慎乐观的态度，因为它比成功疫苗的有效率在70％至80％至少也要达50％相差很远，

FDA批准甲乙型肝炎复合疫苗

最近,美国食品药品管理局(FDA)批准对18岁以上成年人使用一种甲乙肝炎复合疫苗双福立适(Twinrix)。此疫苗是由史克生物制药公司生产的单抗原甲肝疫苗和乙肝疫苗成分组成,双福立适复合疫苗的抗原成分自1995年和1989年以采一直分别应用于美国的甲肝和乙肝单剂抗原疫苗中。

新型抗疟疾复合疫苗

人的免疫系统面临着失去抵卸寄生虫侵袭的能力。当入侵的寄生虫攻击机体时,它们通过4个不同阶段变形,即表达不同的基因在每个阶段用不同的蛋白质将它们自己包围起来。人的免疫系统只能攻击一种形式的“入侵者”,而其他“入侵者”未被损害。在努力防治这种疾病中,研究人员已构思一种新疫苗,该疫苗能使免疫系统发现和抵制22种不同形态的寄生虫。

欧盟批准使用PCV-2/支原体复合疫苗

欧盟委员会已经批准在欧盟同时使用猪疫苗Ingelvac CircoFLEX和Ingelvac MycoFLEX。这两个疫苗的投入使用将使猪圆环病毒病（PCVD）和流行性肺炎这两种最重要和代价高昂的疾病可以进行预防。

急性肠病复合疫苗的保护效力

俄研制出一种能预防幼畜肠道疾病的复合疫苗。取30头怀孕晚期的黑白花种乳牛分成试验组和对照组。饲养管理条件相同。试验组(n=15),在分娩前1.5—2个月,皮下注射7.0ml抗急性肠病复合疫苗,过10天再以同量同法注射一次;对照组(n=15),肌注10ml抗大肠杆菌病多价福尔马林菌苗。接种后分别在第10天和第20天作临床检查和检测血清抗体滴度。上述乳牛所产犊牛。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对SPF雏鸡的免疫效果

用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗分别免疫1日龄SPF雏鸡,免疫后9d观察法氏囊病变,免疫后14、21、28d对各组鸡采血测定IBDV中和抗体,21d及28d时用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果表明,免疫后9d免疫复合物疫苗组鸡法囊正常,活疫苗组鸡法氏囊全部明显萎缩;免疫后14、21、28d,免疫复合物疫苗组鸡IBDV中和抗体分别为2.9±0.99、8.1±0.88和10.6±1.78,活疫苗组IBDV中和抗体分别为3.3±1.14、8.3±1.16和9.2±1.23,免疫后21d及28d疫苗免疫组均100%保护。试验证明免疫复合物疫苗比活疫苗更为安全,免疫复合物疫苗免疫SPF雏鸡产生比活苗更高的IBDV中和抗体,保护率达100%。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡病毒载量和免疫效果的比较研究

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡法氏囊及外周血淋巴细胞(PBMC)中的病毒载量及免疫效果,本研究采用IBD免疫复合物疫苗和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,于免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采用SYBRGreenI荧光定量PCR、ELISA方法及中和试验检测免疫鸡法氏囊和PBMC中IBDV载量和免疫鸡血清中IBDV抗体滴度,并攻毒,计算两种疫苗的保护率。结果显示,活疫苗免疫7d时IBDV在法氏囊和PBMC中的载量均比其它时间点的高,在14d时到达到最高,之后逐渐下降;两种疫苗刺激产生的IBDV抗体滴度随免疫时间的延长呈升高趋势;在免疫后7d攻毒两种疫苗的保护率均为0,其它时间的攻毒保护率均为100%。本研究结果表明,IBD免疫复合物疫苗与活疫苗免疫后病毒在鸡体内开始大量复制的时间并不相同,但免疫效果基本相同。本实验为IBD免疫复合物疫苗的研发提供实验依据。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄低母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法代囊病病毒（IBDV）BX株抗原和IBDV高免血清按一定比例混合,初步制备了无菌的鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1-5（分别含有32、8、4、0.5及0.125单位IBDV中和抗体）,用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1-5及BX株活疫苗分别免疫1日龄低母源抗体水平雏鸡,免疫后9d观察法氏囊病变,免疫后28d采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后9d,复合物疫苗1-3免疫组鸡法氏囊正常,复合物疫苗4、5免疫组和BX株活疫苗免疫组分别有2/10、4/10和5/10的试验鸡法氏囊出现了病变;免疫后28d,复合物疫苗1-5免疫组和BX株活疫苗免疫组IBDV中和抗体效价分别为8.34log2、9.60log2、9.21log2、7.88log2、9.50log2和9.12log2,攻毒保护率分别为90%、100%、100%、80%、90%和80%。试验结果表明鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗2、3（分别含8、4单位IBDV中和抗体）免疫1日龄低母源抗体水平的雏鸡效果最好,攻毒保护率能达到100%。

低毒力新城疫抗原抗体复合物疫苗研究

用低毒力新城疫病毒La Sota株作为复合物疫苗抗原,与新城疫特异性中和抗体混匀配制了不同比例的8种复合物疫苗,用1日龄SPF雏鸡进行免疫效果试验。试验1组～8组分别免疫复合物疫苗1～8,试验9组免疫常规新城疫活疫苗,试验10组为空白对照组。免疫后3周采血测定HI抗体效价,同时用新城疫强毒北京株F48E9攻击。试验1组～10组HI抗体效价分别为23.6、23.1、22.3、24.13、24.85、25.0、25.0、24.5、25.1、22.14。攻毒后1组～10组鸡的死亡率分别为30%、50%、90%、10%、0%、0%、0%、0%、0%、100%。结果表明,低毒力新城疫病毒LaSota株与特异性抗体制备的复合物疫苗,可以减轻疫苗的毒副作用,提高疫苗的安全性,其免疫效果比常规活苗好。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗免疫鸡的NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ应答特性比较

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血和脾脏淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子表达水平的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照。于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d取外周血和脾脏,采用ELISA方法测外周血血清和LPS刺激后脾脏淋巴细胞培养上清中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ浓度。结果表明,免疫复合物疫苗免疫对鸡外周血中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ表达基本无影响,活疫苗免疫能引起NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ表达水平上调;免疫复合物疫苗和活疫苗免疫再经LPS刺激后均能引起脾脏淋巴细胞中NF-κB、IL-8、IL-10表达水平上调,但对IL-6表达水平起下调作用,对MHC-Ⅱ表达水平无影响。提示IBD活疫苗免疫对鸡外周血和脾脏免疫功能的影响更大,结果为IBD免疫复合物疫苗的研发提供依据。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄中等母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和BX株活疫苗分别免疫1日龄中等母源抗体水平京红雏鸡,同时免疫1日龄SPF雏鸡作对照,免疫后第9天观察法氏囊病变,免疫后第28天采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后第9天,免疫复合物疫苗组SPF雏鸡和京红雏鸡法氏囊均正常,BX株活疫苗组SPF雏鸡法氏囊出现了萎缩病变;免疫后第28天,对照SPF雏鸡和京红雏鸡的免疫复合物疫苗组、BX活疫苗组IBDV中和抗体效价分别为9.2log2、8.5log2和7.2log2、4.4log2,攻毒保护率均为100%。试验结果表明免疫复合物疫苗免疫1日龄中等水平母源抗体雏鸡效果很好,能产生较高的中和抗体,攻毒保护率能达到100%。

弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5诱导小鼠免疫应答的研究

目的观察弓形虫复合基因疫苗pcSAGl-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5，分别通过PCR、酶切和测序鉴定后，转染人宫颈癌细胞（HeLa细胞），蛋白印迹（Westernblotting）分析重组蛋白的体外表达情况。70只昆明小鼠随机均分为5组（每组14只），分别为pc-SAGl组、pcROP5组、pcSAGl-ROP5组、空质粒组和空白对照组。重组质粒组每次每只肌注100μg重组质粒，每2周免疫1次，共3次。空质粒组和空白对照组分别注射等量的空质粒和PBS。于每次免疫前和末次免疫后2周眼眶采血。制备血清。采用ELISA法检测pcSAGl-ROP5组小鼠末次免疫后2周的血清与重组蛋白SAGl、ROP5和SAGl-ROP5结合的效价，以及5组小鼠的各次血清中抗弓形虫抗体IgG水平。末次免疫后3周，每组小鼠取10只腹腔接种10s弓形虫速殖子，观察生存时间。末次免疫后4周，采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中r干扰素（IFN-r）和白细胞介素4（IL-4）的水平。结果重组真核表达质粒构建成功。Westernblotting分析结果显示，重组质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5均能在HeLa细胞中表达，重组蛋白的相对分子质量（尬）分别为31000、57000和88000。pcSAGl-ROP5组小鼠血清与重组蛋白SAGl、ROP5和SAGl-ROP5结合的效价分别为1：320、1：160和1：2560。3个重组质粒组小鼠血清抗弓形虫IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间的延长逐渐升高，末次免疫后2周，pcSAGl-ROP5组小鼠血清IgG抗体水平（0．612±0．031）显著高于其他各组（P〈0．05）。攻击感染后，pcSAGl-ROP5组小鼠的平均存活时间为（288±7）h，较pc—SAGl组和pcROP5组分别延长了48h和96h（P〈0．05）。末次免疫后4周，pcSAGl-ROP5组小鼠脾细胞培养上清中IFN-1水平[（908．52±6．31）pg／m1]显著高于其他各组（P〈0．05），各组的IL-4水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论与弓形虫单基因疫苗pcSAGl和pcROP5相比，复合基因疫苗pcSAGl-ROP5所诱导的抗弓形虫IgG抗体和IFN-1水平较高，攻击感染后存活时间延长。

新城疫复合物疫苗对1日龄雏鸡免疫效果的研究

用新城疫病毒La Sota株作为复合物疫苗抗原,与新城疫特异性中和抗体混匀配制成4种不同比例的复合物疫苗,用1日龄普通雏鸡进行免疫效果对比试验。试验1～4组分别为免疫复合物疫苗1～4,试验5组免疫常规新城疫活苗,试验6组为空白对照组。免疫后3周采血测定HI抗体效价,同时用新城疫强毒北京株F48E9攻击。试验结果显示,试验1～6组HI抗体效价分别为3.2log2、3.1log2、3.3log2、3.2log2、3.1log2、2.9log2;攻毒后,试验1～6组鸡的死亡率分别为15%、20%、0%、35%、30%、50%。因此,新城疫病毒LaSota株与新城疫特异性抗体制备成复合物疫苗,能保持疫苗中抗原的免疫原性,并可减轻疫苗的毒副作用,提高疫苗的安全性,其免疫效果比常规活苗好。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗体外介导鸡淋巴细胞NF-κB表达的调节通路研究

为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗体外刺激对鸡淋巴细胞NF-κB表达的影响,以及IBD免疫复合物疫苗和活疫苗引起淋巴细胞NF-κB的表达是否与PKC通路、PTK通路、Ca2+通道的调节有关,以及对细胞内Ca2+浓度的影响,试验选取28日龄SPF鸡脾脏,分离脾脏淋巴细胞,分别用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗刺激,另外设立分别加入PKC抑制剂、PTK抑制剂、Ca2+抑制剂、NF-κB抑制剂的对照组,加LPS的阳性组,加PBS的空白组。体外分别培养21 h和45 h后,ELISA方法测定细胞培养上清中NF-κB浓度,激光共聚焦显微镜观察细胞内NF-κB核移位情况,流式细胞仪测定细胞内Ca2+浓度。结果表明,IBD免疫复合物疫苗和活疫苗体外刺激均能够引起NF-κB、Ca2+浓度升高,使NF-κB发生核移位,但免疫复合物疫苗引起细胞内Ca2+浓度的升高与对照组无显著性差异,活疫苗与对照组差异显著(P<0.05)。提示IBD免疫复合物疫苗和活疫苗体外刺激能够激活淋巴细胞内NF-κB,引起Ca2+浓度的升高,但两种疫苗引起NF-κB表达的上调与PKC、PTK通路无相关性,与Ca2+通道的调节有关。

抗原-抗体复合物疫苗研究进展

抗原-抗体复合物疫苗是由特异性高免血清按照恰当的比例与抗原混合而制成。免疫复合物疫苗能够增强抗原递呈细胞的递呈能力,能有效的提高机体的免疫能力。近年来国内外研究者做了大量的相关研究,在鸡新城疫和传染性法氏囊病等禽病的复合物疫苗研究中取得了一定成果,在乙型肝炎复合物疫苗研究中取得了突破性的进展,为病毒性疾病的防控开辟了一条新的途径。论文就免疫复合物疫苗研究方面的优点、作用机制及应用前景进行了综述。