母树年龄和复幼对锥栗插穗生理及不定根发生的影响

【目的】探讨母树年龄及基部促萌复幼对锥栗Castanea henryi半木质化嫩枝扦插生根的影响,从生理水平和解剖结构特征解析其可能原因,为锥栗扦插繁殖提供理论和实践指导依据。【方法】对2年生和8年生锥栗母树分别进行基部截干促萌复幼处理,以当年生半木质化的新枝为试材,以不截干枝条为对照,分别于扦插后0、7、14 d取插穗基部,通过制作石蜡切片对插穗生根部位进行解剖观察,测定可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、木质素含量、氧化酶活性、激素水平的动态变化,并于扦插后60 d统计各处理的扦插生根率和生根数量。【结果】1)扦插14 d后,可见2年生锥栗插穗有不定根长出,8年生锥栗插穗基部有白色突起。2)母树年龄越大,扦插生根率越低,且基部促萌复幼对锥栗插穗不定根的影响不显著(P>0.05)。2 a对照、2 a复幼的生根率(68.0%、70.0%)和每插穗不定根数量(11.3、10.6)显著高于8 a对照和8 a复幼的生根率(3.2%、4.4%)和每插穗不定根数量(3.2、2.9)(P<0.05)。3)8 a插穗木质素含量在不定根发生过程中显著高于2 a插穗(P<0.05),且复幼不能降低插穗木质素含量。扦插7 d后8 a插穗的可溶性蛋白含量在对照和复幼处理中均显著低于2 a插穗(P<0.05)。4)在不定根发生过程中,IAAO酶活性在不同年龄和复幼插穗间差异均不显著(P>0.05);8 a插穗的IAA水平显著高于2 a插穗(P<0.05)。扦插7 d后,2 a锥栗插穗的SOD显著高于8 a锥栗插穗(P<0.05),8 a插穗的GA3含量显著高于2 a插穗(P<0.05)。【结论】母树年龄是影响锥栗插穗不定根发生的主要要素,单纯基部平茬促萌复幼措施可能不适宜被用来提高锥栗成年插穗的不定根发生率。调控木质素的合成和代谢途径可能是提高锥栗成年插穗不定根发生的关键。

循环复幼对水曲柳生长繁殖及生理的影响

为解决水曲柳(Fraxinus mandshurica)因年龄效应而导致的插穗生根能力在3年生后显著下降的问题,以4年生水曲柳实生苗为研究对象,探究循环扦插复幼对克服年龄效应的作用,尤其是循环次数和截干处理2个关键因素对水曲柳萌蘖、生长和扦插生根的影响,以及循环复幼过程中水曲柳的生理变化。结果表明:循环复幼次数的增加和截干处理都能提高水曲柳的复幼程度,呈现萌生枝数量增加、枝条细化、茎节缩短的特征,同时显著提高扦插再生能力。在循环复幼次数达到3次且叠加截干处理时,与未循环复幼相比萌枝数量提高了6.56倍,生根率提高了7.44倍。循环复幼1~3次,植株生长素吲哚乙酸(IAA)、细胞分裂素(CTK)水平提高,赤霉素(GA3)水平在第3次时才显著提升,而脱落酸(ABA)水平呈逐渐下降趋势;循环复幼后植株中过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性降低,丙二醛(MDA)和可溶性糖含量减少。这些生理指标变化都与植株幼化状态相符。可见,循环复幼可有效恢复幼化状态,诱导水曲柳形成较高IAA、GA3和较低ABA水平的萌枝,同时降低了抗氧化酶活性、MDA与可溶性糖含量,有利于实现水曲柳复幼,从而提高扦插生根率,实现水曲柳良种的快速高效无性繁殖。

基于外植体生理复幼的麻栎茎段无菌离体培养

以离体休眠枝条复幼处理后的萌芽茎段为外植体,开展20年生成龄麻栎的离体再生影响因素研究。结果表明:初代培养,以1/2 MS+3.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L KT+0.2 mg/L IBA为优选培养基,不定芽诱导率可达69.70%;继代培养,以1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L KT+0.2 mg/L IBA为优选增殖培养基,芽增殖系数约为2.0,但茎尖死亡率高,影响不定芽的连续继代。在影响继代苗茎尖死亡率的各试验因素中,培养基种类、继代转接时间、培养基中氯化钙浓度、硼酸浓度对继代培养中不定芽茎尖死亡率均有显著影响。WPM培养基中,继代培养23 d,硼酸质量浓度为12.4 mg/L,茎尖死亡率最低(13.06%)。在改良WPM+0.3 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA的培养基上,成龄麻栎继代苗生根率最高(19.91%)。本试验为麻栎树种改良及无性快繁奠定了基础。

基于幼砧嫁接的红椎复幼苗生理指标变化

红椎作为一种优良的乡土阔叶树种,开发利用价值高、应用前景广,是我国南方重要的造林树种。针对目前林木遗传分化差异大,林分质量整体不高的现状,通过无性繁育进行优异种质繁育利用是实现红椎人工林提质增效,促进红椎产业发展的关键。生理年龄效应是限制红椎无性繁育困难的关键。本试验以成年红椎优树为研究对象,通过连续幼砧嫁接方式,分析了嫁接诱导复幼植株相关生理指标的变化。结果表明:幼砧嫁接显著提升了嫩枝扦插生根率,复幼程度提升,其中连续嫁接4轮,生根率可达90%以上。与未嫁接植株相比,经嫁接复幼植株中IAA水平增加,ABA水平下降,GA水平在嫁接4轮时显著提升,ZR水平在嫁接1轮时即达最高。同时,嫁接复幼后植株中丙二醛(MDA)含量减少,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性降低,可溶性糖含量减少,而可溶性蛋白含量无明显变化。该研究表明,通过幼砧嫁接能有效诱导红椎生理复幼,高水平IAA和低水平ABA、活性氧化物与可溶性糖含量,有利于实现红椎复幼。

树木复幼的研究概述

幼龄树木通常具有良好的生根能力、旺盛和通直的生长习性与较强的抗性,然而随着树木的成熟这些特性会逐渐丧失。复幼是使成熟树木重现某些幼态性状的过程。成熟树木的复幼和幼态保持是林木生产、无性繁殖、遗传改良和生物技术在林木中应用中十分重要的科学问题。本文对树木的组织和器官保持幼态的特性、顶端分生组织表达幼态的潜能、与复幼相关的生理、生化和分子生物学以及复幼方法等方面的研究进行了概述,并对今后的研究和需要解决的关键问题提出了意见和建议。

复幼促进核桃不定根发生的DNA甲基化机制探讨

该研究以核桃的复幼和成龄插穗为材料,通过甲基化修饰依赖性内切酶测序技术(MethylRAD-Seq),在全基因组水平上检测成龄与复幼插穗中DNA甲基化位点分布特征,进一步对复幼处理前后插穗中差异甲基化位点相关基因的表达情况进行分析。结果显示:(1)复幼处理可显著降低核桃插穗的DNA甲基化水平。(2)功能富集分析结果显示,差异甲基化位点相关基因主要参与油菜素内酯信号转导、次级代谢产物生物合成和木质素生物合成等功能,参与光合作用、MAPK(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、果糖和甘露糖代谢、cAMP(cyclic AMP,CAMP)信号途径和苯丙烷生物合成等代谢通路。(3)qRT-PCR分析结果显示,复幼处理前后,不定根发生的关键调控基因NAC1、ARF5、ARF6和WRKY22在复幼和成龄材料中具有不同的表达模式。研究认为,复幼处理降低了核桃插穗中基因组DNA的甲基化水平,进而影响不定根发生过程关键功能基因的表达,可能是复幼调控核桃不定根发生能力的重要途径。

中药复幼合剂治疗女童卵巢囊肿合并性早熟的临床观察

目的观察中药复幼合剂对女童卵巢囊肿合并性早熟的临床疗效。方法对卵巢囊肿诊断明确且伴有性早熟表现,符合中医肝郁气滞、阴虚火旺证型的30例患儿,给予口服中药复幼合剂治疗,3个月为1个疗程,治疗1~2个疗程。观察卵巢囊肿消失情况、乳核大小变化和临床症状的改善,于治疗前后分别进行乳房分期评定、雌激素(E2)检测、阴道脱落细胞涂片、子宫和卵巢B超检查、拍X光片测骨龄等检查。结果 30例患儿痊愈22例,有效6例,无效2例,临床总有效率93. 3%。30例患儿中22例乳房恢复至TannerⅠ期;19例雌激素水平升高患儿治疗后仅1例雌激素水平仍高;30例阴道细胞涂片阳性患儿治疗后26例转阴;27例子宫增大患儿治疗后23例恢复正常;30例患儿治疗后28例卵巢囊肿消失;12例阴道出血患儿治疗后11例停止出血;27例有阴道白带患儿治疗后24例白带消失;80%患儿肝郁气滞、阴虚火旺的症状得到改善。在有效患儿中,有2例经垂体激发试验证实为中枢性性早熟。结论中药复幼合剂对女童卵巢囊肿合并性早熟具有较好的干预作用,可使大部分患儿卵巢囊肿消失,具有控制性征发育,改善肝郁气滞、阴虚火旺症状,降低雌激素水平,延缓骨龄成熟速度的作用。卵巢囊肿可引发女童外源性性早熟,也有合并中枢性早熟的可能。

复幼合剂治疗女童真性性早熟60例临床研究

目的探讨中药复幼合剂治疗女童真性性早熟的临床疗效。方法对诊断明确且符合中医肝郁气滞、阴虚火旺证型的60例真性性早熟女童,给与口服中药复幼合剂治疗,3个月为1个疗程,治疗2个疗程后,观察乳核大小变化和临床证型症状的改善情况,并于治疗前后分别进行乳房指数测量、雌激素(E2)、阴道脱落细胞涂片、子宫和卵巢的B超检查、拍X光片测骨龄等。结果显效32例,有效18例,无效10例,总有效率83.3%。60例治疗前后变化分别为乳核指数P<0.0001,血E2水平P<0.01,阴道细胞涂片阳性例数P<0.001,骨龄P<0.001,子宫和卵泡容积P>0.05。结论复幼合剂具有控制性征发育,改善肝郁气滞、阴虚火旺症状,降低雌激素水平,延缓骨龄成熟速度的作用,是治疗女童真性性早熟的有效药物。

复幼颗粒提取工艺优化及制剂处方研究

目的:对复幼颗粒的提取和制备工艺进行优化,并为中试放大生产的参数控制提供依据。方法:选择盐知母中芒果苷、牡丹皮中芍药苷的含量以及干膏得率为评价指标,以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,通过正交实验优选复幼颗粒的提取工艺,开展浓缩工艺和干燥工艺研究,通过筛选辅料、润湿剂和矫味剂种类和用量,开展复幼颗粒的成型工艺研究。结果:复幼颗粒的最佳制备工艺为,全方11味药加12倍量水提取3次,每次1 h,合并提取液,过滤,滤液减压浓缩成稠膏(相对密度1.10~1.20,60℃),稠膏60℃减压干燥成干膏,按干膏粉:蔗糖:糊精=10∶7∶3的比例,加入相应辅料,并加入0.5%阿司帕坦、0.2%甜橙香精矫味,95%乙醇溶液为润湿剂制粒,即得。结论:该制备工艺简便,有效成分收率高,成品质量稳定,可以为复幼颗粒中试放大生产提供参考。

复幼方药味配伍对盐知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷提取率及稳定性的影响

目的探究复幼方药味配伍对盐知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷提取率及稳定性的影响。方法建立复幼方中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的HPLC测定方法,通过复幼方整体提取和方中各药味与盐知母分别配伍提取,考察不同药味配伍对盐知母中3种成分提取率和稳定性的影响。结果较盐知母单独提取,复幼方全方提取后,新芒果苷、异芒果苷提取率增加,芒果苷提取率降低;各药味与盐知母分别配伍提取后,生地黄-盐知母组、泽泻-盐知母组新芒果苷的提取率降低,地骨皮-盐知母组、生地黄-盐知母组芒果苷的提取率降低,各组异芒果苷的提取率均高于盐知母单独提取。与0 h测得的含量相比,复幼方水提液放置48 h后,新芒果苷含量较稳定,芒果苷含量降低为84.04%,异芒果苷含量升高。关黄柏-盐知母配伍水提液放置48 h后新芒果苷稳定性降低;芒果苷、异芒果苷在地骨皮-盐知母配伍水提液中不稳定,放置48 h后含量分别降低8.37%、9.99%;夏枯草-盐知母配伍水提液放置48 h后,3种成分的含量呈不同程度下降。结论复幼方煎煮提取过程中主要是生地黄、地骨皮影响了新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的提取率,提取液放置过程中主要是关黄柏、地骨皮、夏枯草影响了该3种成分的稳定性,不同的药味配伍及配伍比例是影响复方中有效成分含量的关键因素。

山东省主要阔叶造林树种复幼繁殖的研究

本文选用我省14种主要阔叶造林树种,进行了阳畦埋根催萌和嫩枝扦插的研究。研究结果证明,大多数阔叶造林树种可以通过根段促萌和嫩枝扦插获得大批苗木;能有效地解决嫁接、扦插中存在的砧木效应、位置效应和年龄效应等问题。通过埋根促萌、扦插获得的苗木,均为复幼苗木,以此幼苗做繁殖材料进行再繁殖,加快了繁殖速度。

国槐复幼繁殖技术研究报告

作者采用硬枝扦插、嫩芽扦插和根段育苗的方法进行国槐复幼繁殖试验取得成功。根据试验结果,提出了促进幼苗成活应注意的几个问题。

水曲柳复幼——微繁技术研究

采用截干、喷施激素、掩埋锯末三种处理方式对水曲柳2年生幼苗进行复幼处理,并以萌生枝条的顶芽及腋芽作为外植体,探讨最佳复幼——微繁体系,结果表明：（1）截干＋喷施激素处理的幼苗产生的穗条数量、长度及直径均优于其它处理,每株幼苗当年可产出6~7条可供嫁接的穗条和20个左右茎节外植体（水曲柳对照平均为4~5个）。（2）复幼处理获得的萌条茎节进行组织培养时,新芽启动率和增殖系数均超出对照,其中截干＋喷施BA组合最为突出,启动率超出对照的132%,而截干＋喷施激素＋掩埋锯末初代增殖系数最高,超出对照65.2%。（3）经隶属函数评分排序,选出附加ZT 1.0 mg/L和2%蔗糖的WPM培养基最有利于新芽分化,增殖系数达到9.61,与其它处理差异显著。

组培复幼对珠美海棠生理及组织结构的影响

珠美海棠是重要的绿化树种,也是苹果的重要砧木,并且耐盐性强。本试验以成龄珠美海棠为试材,通过组培使其复幼,探讨复幼过程珠美海棠的生理生化及组织结构变化。分别取0代、复幼后1、3、5、7代的健康叶片,进行可溶性糖含量、可溶性蛋白含量的测定,取茎段及叶片进行组织结构的分析。研究结果表明:随着复幼处理代数的增加,叶片中可溶性糖含量呈现下降趋势,且复幼至第5代时与初代中的含量相比具有极显著性差异;但叶片中可溶性蛋白的含量则无太大的变化,0代与1、3、5代无显著性差异,直至复幼处理到第7代时可溶性蛋白与0代相比呈显著性差异。珠美海棠叶片随继代次数的增加,栅栏组织逐渐减少,上下表皮细胞增大,表皮细胞壁变薄,茎的木质部逐渐减少变薄。本试验表明,组培可以使珠美海棠复幼,继代次数的增加有利于复幼。

杜仲扦插与母树复幼

运用复幼技术使成年植株恢复幼龄期，是大幅度提高杜仲扦插成活率的关键。采取用母株根穗萌条恢复枝条幼龄期、用萌条扦插苗恢复根系幼龄期的方法，可使枝插成活率由2％提高到79．7％～93．1％，繁殖系数达15．3。在此基础上，通过母树根穗→幼龄期萌条→萌条扦插苗→余根繁殖（连续2～3a）→萌条扦插苗→余根繁殖的育苗程序，每ha可产无性繁殖苗5万株以上，当年平均苗高50cm左右。

复幼合剂对乳房早发育患儿减重效果队列研究

目的探讨中药复幼合剂对乳房早发育患儿的减重效果。方法回顾性收集规律随访时间超过6个月的乳房早发育的女童202例,根据有无应用复幼合剂分治疗组114例(用药超过6个月),对照组88例(未用药)。观察两组患儿治疗前后体格[包括体重、体重标准差评分(SDS)、身高、体重指数(BMI)、BMI SDS]及性发育指标[包括黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_(2))、子宫长径及卵巢容积]情况。结果与本组治疗前比较,治疗组治疗3、6个月时,患儿体重SDS、BMI SDS均降低(P<0.05);用药3~6个月期间治疗组患儿体重、BMI控制程度,较用药前3个月减缓(P<0.05);治疗3个月时,对照组患儿LH、FSH、子宫长径逐渐升高(P<0.05);治疗6个月时,治疗组患儿FSH、E_(2)、卵巢容积降低(P<0.05),对照组患儿LH、FSH、E_(2)、子宫长径、卵巢容积逐渐升高(P<0.05)。与对照组同期比较,治疗组患儿体重、体重SDS、BMI、BMI SDS增长程度均降低(P<0.05);治疗3个月时,治疗组患儿子宫长径、卵巢容积较低(P<0.05),治疗6个月时,治疗组患儿FSH、E_(2)、子宫长径、卵巢容积较低(P<0.05)。治疗组6个月期间,仅2例患儿出现轻微腹部不适,所有患儿均无皮疹、纳差、腹泻等表现,肝肾功能检查未见异常。结论治疗性早熟的药物复幼合剂,有减重效果,尤其是在用药前3个月更明显。

复幼颗粒剂对大鼠的单次给药毒性及幼龄动物重复给药毒性试验研究

目的 评价复幼颗粒对SD大鼠的非临床安全性。方法 单次给药毒性试验:20只SD大鼠(6~7周龄),随机分为溶媒对照组(去离子水)和复幼颗粒组(18 g·kg^(-1)),按每次30 mL·kg^(-1)灌胃给药,24 h给药2次(上、下午),给药后观察14 d;检查项目包括临床观察、体质量、大体解剖等。重复给药毒性试验:将192只幼龄SD大鼠(出生后4 d)按体质量随机分为溶媒对照组(去离子水),低、中、高剂量复幼颗粒组(1.2,2.5,5 g·kg^(-1)),按每次10 mL·kg^(-1)灌胃给药,每天2次,连续给药13周,恢复期4周;检查项目包括一般生理指标、眼科检查、发育指标、血液生化指标、免疫学指标、激素指标、生殖功能指标、组织病理学观察等。结果 单次给药毒性试验:SD大鼠灌胃给予复幼颗粒按18 g·kg^(-1)(生药:82 g·kg^(-1)),无明显急性毒性。重复给药毒性试验:幼龄SD大鼠灌胃给予2.5 g·kg^(-1)(生药:11.33 g·kg^(-1))复幼颗粒连续给药13周,未见明显毒性反应。恢复期高剂量组雌鼠孕酮水平显著降低。结论 复幼颗粒对受试动物在临床拟用剂量范围内未见明显的单次给药毒性和重复给药毒性反应。

湿加松个体老化模式与平茬复幼的机理

松树是我国重要的针叶树造林树种.在早期的生产实践中,通过树木复幼等技术,可以有效提升多种针叶树树种的无性繁育,但缺乏从分子水平上对其进行评价和测算.本研究以实生湿加松和平茬复幼的湿加松(Pinus elliottii×P.caribaea)为研究对象,结合转录组测序、加权基因共表达网络分析、荧光实时定量PCR等多种技术,鉴定到Pt6G14330,Pt6G55590,Pt9G03170,Pt3G66280(AP2L3),PtJG21230,Pt4G16540,Pt2G41770(DAL10),Pt1G04760(MADS28)等年龄标记基因,同时借助这些基因阐明了湿加松个体发育老化的空间模式,并揭示了平茬复幼的分子机制.本研究还发现,平茬后湿加松嫩枝中茉莉素、水杨酸、生长素等含量显著上升,脱落酸含量显著下降,暗示树木的平茬复幼与激素变化密切相关.这一研究不仅从分子水平厘清了针叶树的组织年龄变化规律,也为树木高效规模化繁育过程中复合生长调节剂的研发提供了理论指导.

基于外植体生理复幼的马尾松茎段芽无菌离体培养

以不同生理年龄马尾松优株茎段芽为外植体,开展了马尾松茎段芽无菌离体再生培养。结果显示,植株生理年龄显著影响了马尾松茎段芽离体培养效果,外植体来源树龄越大,离体培养效果越差。十五年生马尾松茎段芽离体培养困难,通过诱导复幼处理,来源于十五年生马尾松茎段芽的茎叶形态、显微解剖构造与内源激素均发生了幼化,茎段芽离体培养效果显著提升,始芽诱导率和继代增殖系数分别提升了70%和390%,生根、成苗率均增加了200%以上。这说明,外植体幼化对实现马尾松成年植株茎段芽离体培养尤为重要。

成年黑荆树复幼扦插繁殖技术研究

通过对5年生的黑荆成年母树进行冬季、春季不同高度的截干复幼处理试验,结果表明:冬季60cm处截干对黑荆萌芽效果最好,存活率为85%。用复幼后的萌芽枝和不同年龄未复幼处理枝条作扦插对比试验,结果表明:5年生复幼后的半木质化萌芽枝在合适的扦插条件下,具备一定的生根能力,本试验中1 000mg/L CPD处理30s的扦插成活率为41.3%;而5年生未经复幼处理的黑荆母树半木质化枝条没有生根能力,扦插成活率为0%;1年生未经复幼处理的半木质化枝条,本身比较幼态,生根率可达83.3%。截干复幼处理使5年生黑荆母树实现了部分幼态性状。