复方土茯苓颗粒对急性痛风性关节炎兔的抗炎作用

【目的】观察复方土茯苓颗粒对尿酸钠引起的急性痛风性关节炎新西兰兔的抗炎作用。【方法】将56只雄性新西兰兔随机分成7组,即正常组、模型组、秋水仙碱组、痛风舒组及复方土茯苓低、中、高剂量组,每组8只。各给药组按设定要求进行灌胃给药,正常组、模型组给予灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,每日1次,连续9 d。模型组和各给药组兔第9天给药后约1 h给予2.5%尿酸钠溶液0.4 mL和10 U/mL多黏菌素B溶液0.1 m L注入关节腔内进行急性痛风性关节炎造模。造模前(0 h)和造模后2、4、5 h测量膝关节肿胀程度,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测膝关节液中白细胞计数、炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-8的含量,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测膝关节滑膜组织病理损伤程度。【结果】(1)与正常组比较,模型组膝关节出现明显肿胀,造模后2 h肿胀达到高峰(P<0.05);与模型组比较,各给药组肿胀逐渐缓解(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组白细胞计数显著升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组关节液白细胞计数未见显著性差异(P>0.05),但均有降低的趋势,复方土茯苓高剂量组降低作用最明显。(3)与正常组比较,模型组IL-1β、IL-8水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,复方土茯苓高剂量组、秋水仙碱组、痛风舒组IL-1β、IL-8水平明显降低(P<0.05)。(4)与正常组比较,模型组滑膜组织出现明显病理损伤,淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润增多;与模型组比较,各给药组滑膜组织病理损伤减轻,淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润减少,其中,复方土茯苓高剂量组改善效果最明显。【结论】复方土茯苓颗粒可明显减轻急性痛风性关节炎兔关节肿胀,降低关节液白细胞数量及IL-1β、IL-8水平,改善滑膜炎症。

复方土茯苓颗粒对大鼠滑膜细胞炎症因子及mi-RNA的影响

【目的】观察复方土茯苓颗粒含药血清对大鼠滑膜细胞痛风模型的影响以及与白细胞介素-1β/白细胞介素-6(IL-1β/IL-6)、小片段RNA miR-146a的关系。【方法】从SD大鼠身上摘取膝关节滑膜组织进行原代培养并传代,将滑膜细胞分成空白对照组,空白血清组,模型组,中药血清低、中、高剂量组6组;分别制备复方土茯苓颗粒中药血清和尿酸盐晶体混悬液,并进行细胞活性试验后,按组进行相应的干预,然后收集细胞培养液采用酶联免疫吸附反应(ELISA)法检测IL-1β/IL-6水平;提取滑膜细胞总RNA并进行逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-146a表达,并分析它们的关系。【结果】模型组滑膜细胞培养液中IL-1β/IL-6的含量显著升高(P<0.05),滑膜细胞miR-146a表达显著下调(P<0.05);中药血清各剂量组IL-1β/IL-6的含量显著降低(P<0.05),miR-146a则显著上调(P<0.05);IL-1β/IL-6与miR-146a表达呈反比关系。【结论】复方土茯苓颗粒含药血清可能是通过上调大鼠滑膜细胞miR-146a的表达,抑制IL-1β/IL-6,从而缓解炎症反应。

复方土茯苓颗粒提取、醇沉工艺研究

目的:建立复方土茯苓颗粒的提取、纯化工艺。方法:采用正交试验优化复方土茯苓颗粒提取、醇沉工艺;采用HPLC法测定提取物中牛膝含有的蜕皮甾酮。结果:确定提取工艺为第1次用8倍量水煎煮1h,第2次用7倍量水煎煮1h;醇沉工艺为将药液浓缩至0.5g/mL(相当于药材),边搅拌边加适量乙醇至浓度为60%,静置12h,分离上清液。结论:验证试验表明,该提取、醇沉工艺客观可行、稳定合理,可为工业化生产提供理论依据。

复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症患者疗效分析

目的观察复方土茯苓颗粒对高尿酸血症患者的临床疗效。方法将60例高尿酸血症患者分为复方土茯苓颗粒组、苯溴马隆组,每组各30例。复方土茯苓颗粒组给予口服复方土茯苓颗粒,10 g/包,2/d。苯溴马隆组给予口服苯溴马隆,50 mg,1/d。20天一疗程。实验前后抽血检测疗效指标:①血尿酸(uric acid,UA);②安全性指标:血常规、肝脏功能、肾脏功能、尿常规),并进行前后对照及组间比较。结果复方土茯苓颗粒、苯溴马隆组患者治疗后血尿酸水平均显著下降(P<0.01),两组之间无统计学差异(P=0.770>0.05)。复方土茯苓颗粒组治疗前后血常规及肝肾功能各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症疗效确切,且无副作用。

复方土茯苓片联合甲磺酸多沙唑嗪缓释片治疗ⅢB型前列腺炎的临床研究

目的:观察前列腺液中卵磷脂腺体数量、前列腺压痛、病程和和NIH-CPSI的疼痛症状评分,排尿症状评分、生活质量评分、总评分及中医症状评分的相关性,观察ⅢB型前列腺炎经复方土茯苓片干预后症状评分与客观指标变化,评价复方土茯苓片联合甲磺酸多沙唑嗪缓释片治疗ⅢB型前列腺炎的临床疗效。方法:本研究是一个前瞻性、随机、双盲、对照的临床试验,将我院泌尿外科门诊120例ⅢB型前列腺炎患者纳入研究,随机分为复方土茯苓片干预组及对照组,对照组给予甲磺酸多沙唑嗪缓释片联合复方土茯苓片安慰剂治疗,治疗组给予甲磺酸多沙唑嗪缓释片联合复方土茯苓片,分别对ⅢB型前列腺炎患者入组前及入组后第2、4周进行随访。结果:干预28d时治疗组中NIH-CPSI和中医症状评分较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。EPS中不同卵磷脂小体水平的NIH-CPSI评分及中医症状评分之间无统计学差异(P>0.05)。不同前列腺压痛程度的NIH-CPSI评分及中医症状评分之间无统计学差异(P>0.05)。NIH-CPSI评分方面,复方土茯苓片组14d有效77.2%,对照组有效(6.9%),差异有统计学意义(P<0.01);复方土茯苓片组28d后,显效者占绝大多数(84.2%),对照组有效(12.1%),差异有统计学意义(P<0.01);中医症状评分方面,复方土茯苓片组14天有效(54.4%),对照组患者有效(8.6%),差异有统计学意义(P<0.001);复方土茯苓片组28天后,显效者占到主要部分(68.4%),对照组有效(13.8%),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:前列腺液中卵磷脂腺体数量、前列腺压痛、病程和NIH-CPI的疼痛症状评分,排尿症状评分、生活质量评分、总评分及中医症状评分均无相关性;复方土茯苓片治疗ⅢB型前列腺炎在症状缓解方面明显优于应用甲磺酸多沙唑嗪缓释片联合安慰剂对照组。

基于模糊层次分析法优选复方土茯苓止痒喷雾最佳提取工艺路线

目的采用模糊层次分析法优选复方土茯苓止痒喷雾的最佳提取工艺路线,优化原处方提取方法。方法以4-氨基吡啶致小鼠瘙痒为瘙痒模型,以小鼠舔体次数、小鼠血清组胺浓度和小鼠背部皮肤病理切片为指标,选取指标性成分和药效学指标作为准则层,方中指标性成分落新妇苷含量、丹皮酚含量、升麻素苷含量、小鼠舔体次数和血清组胺浓度作为方案层,采用模糊层次分析法(fuzzy analytic hierarchy process,FAHP)为指标赋权,得到各工艺路线加权综合得分,考察复方土茯苓止痒喷雾最佳提取工艺路线。结果方案层指标权重(ω)由高到低依次为舔体次数(ω=0.260)、组胺浓度(ω=0.235)、落新妇苷含量(ω=0.185)、丹皮酚含量(ω=0.160)、升麻素苷含量(ω=0.160)。得到评分高低顺序为工艺路线一>工艺路线二,故确定复方土茯苓止痒喷雾的最佳提取工艺路线为工艺路线一,即全方醇提。病理切片结果也证实了醇提优于水提。结论选取化学指标结合药效学指标,通过FAHP赋权,优选复方土茯苓止痒喷雾的提取工艺路线,为临床经验方制剂的工艺优选提供思路与方法。

复方土茯苓颗粒对大鼠肝细胞XDH-mRNA表达和XO活性的影响

目的观察复方土茯苓颗粒含药血清对大鼠肝细胞高尿酸血症(HUA)模型尿酸(UA)、黄嘌呤氧化酶(XO)活性及肝脏中黄嘌呤氢化酶(XDH)mRNA转录水平的抑制作用。方法体外培养大鼠BRL 3A肝细胞,制备复方土茯苓颗粒中药血清,将细胞分成6组,即空白对照组、转染对照组、空白大鼠血清组、中药血清低、中、高剂量组(体积分数为5%、10%、20%),将pENTER-XDH重组质粒转染到空白组以外的BRL细胞,复制成肝细胞HUA模型,并将中药血清加入至相应组别。用qRT-PCR方法检测XDH-mRNA的转录水平,并进行UA分泌水平及XO活性检测。结果与空白对照组相比,转染对照组的XDH-mRNA转录水平明显升高,差异有统计学意义;与空白大鼠血清组相比,中药高剂量组XDH-mRNA的转录水平显著降低,并具有统计学意义;空白大鼠血清组的尿酸水平明显高于空白对照组和转染对照组,差异有统计学意义;各中药血清组与空白大鼠血清组相比,中药血清中剂量组与高剂量组的UA及XO活性要相对更低,差异有统计学意义。结论复方土茯苓颗粒可能通过降低XDH-mRNA和XO的活性来达到降尿酸的作用。

基因多态性分型对复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症患者的降尿酸疗效影响研究

【目的】观察基因多态性分型对复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症患者的降尿酸疗效影响。【方法】将80例高尿酸血症患者随机分为试验组和对照组,每组各40例。试验组给予复方土茯苓颗粒治疗,对照组给予西药别嘌醇片治疗,疗程为8周。观察2组患者治疗前后血尿酸水平的变化情况,评价2组患者的中西医疗效及安全性,并采用Logistic回归分析方法评价基因多态性分型对2组患者降尿酸疗效的影响。【结果】(1)研究过程中,治疗组脱落1例,对照组无脱落病例,最终治疗组39例、对照组40例患者完成试验。(2)试验组的血尿酸达标率和中医证候疗效总有效率均为82.05%(32/39),对照组均为87.50%(35/40),组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)治疗后,2组患者血尿酸水平均治疗前明显降低(P<0.05),但治疗后组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)Logistic回归分析结果表明,各基因分型对2组疗效的影响差异均无统计学意义(P>0.05)。(5)试验组的肝肾功能副作用发生率均低于对照组,但组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】复方土茯苓颗粒可明显降低高尿酸血症患者的血尿酸水平,且其安全性高于别嘌醇片,而基因多态性分型对疗效无明显影响。

复方土茯苓胶囊微生物限度检查方法验证

目的:为提高制剂质控标准,建立复方土茯苓胶囊的微生物限度检查方法。方法:按《中国药典》2015年版四部通则微生物限度检查法中的微生物计数法和控制菌检查法进行验证。结果:对3个批次的样品用常规法检测五种菌回收率,范围均在50%~200%内,采用常规法即可检出大肠埃希菌。结论:建立满足《中国药典》2015年版要求的复方土茯苓胶囊的微生物限度检查方法,需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数及控制菌检查均采用常规法。

复方土茯苓颗粒治疗痰瘀痹阻型痛风患者51例临床观察

目的:观察复方土茯苓颗粒降低痰瘀痹阻型痛风患者血尿酸的临床疗效和安全性。方法:将104例痰瘀痹阻型痛风间歇期血尿酸升高患者随机分为治疗组和对照组,每组52例。治疗组给予复方土茯苓颗粒治疗,对照组给予苯溴马隆治疗。2组疗程均为12周。观察2组中西医疗效和安全性。结果:治疗组51例、对照组50例完成试验。治疗4周后,2组血尿酸水平较治疗前均降低(P<0.05);治疗8周后,2组血尿酸水平均低于治疗4周(P<0.05);治疗12周后,2组血尿酸水平与治疗8周比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗4,8,12周后,2组血尿酸水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗4,8,12周,治疗组、对照组血尿酸<300μmol·L-1患者的比例分别为31.37%、36.00%,50.98%、54.00%,64.71%、68.00%,组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗12周后,治疗组显效12例,有效34例,无效5例,总有效率为90.20%;对照组显效10例,有效35例,无效5例,总有效率为90.00%。2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗过程中,2组均无不良事件发生;治疗组急性痛风性关节炎发作患者比例低于对照组(P<0.05)。结论:复方土茯苓颗粒降低痰瘀痹阻型痛风患者血尿酸有效、安全,可为临床治疗提供药物选择和依据。

复方土茯苓胶囊的薄层色谱研究

目的:建立复方土茯苓胶囊的薄层色谱鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对复方土茯苓胶囊中制何首乌、山豆根、当归进行定性鉴别。结果:制何首乌、山豆根、当归的薄层色谱图均斑点清晰,阴性无干扰。结论:本方法简便、可靠,可用于复方土茯苓胶囊的质量控制。

复方土茯苓汤治疗复发性口疮38例

报告了应用自拟复方土茯苓汤（Ⅰ、Ⅱ号）治疗３８例复发性口疮的临床观察结果，治愈１４例，好转２４例，提示复方土茯苓汤治疗复发性口疮有一定疗效。

土茯苓复方治疗口腔鳞状细胞癌的作用机制研究

目的基于网络药理学研究土茯苓复方治疗口腔鳞状细胞癌(OSCC)的活性成分及其潜在靶点和可能的作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台和通用蛋白质资源数据库检索并筛选得到土茯苓复方的主要活性成分及其作用靶标。通过癌症基因组图谱数据库获得OSCC表达谱和临床资料,分析OSCC与正常组织间的差异表达基因,并通过Genecards和OMIM数据库收集OSCC相关基因,对药物作用靶标和疾病相关基因取交集获得潜在治疗靶点。利用STRING数据库和Cytoscape 3.9.1软件构建蛋白质互作网络图和“OSCC靶点-药物活性成分”网络模型。对潜在治疗靶点进行基因本体分析和京都基因与基因组百科全书通路富集分析,并评估关键作用靶点与OSCC患者预后的关系。最后用Autodock_vina和Pymol软件进行最关键作用靶点和有效成分的分子对接。结果共获得土茯苓复方治疗OSCC的潜在治疗靶点141个。土茯苓复方主要通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、丝苏氨酸特异性蛋白激酶(AKT)1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、血管内皮生长因子A基因(VEGFA)、IL-1β、表皮生长因子受体(EGFR)等多个靶标,涉及包括TNF、IL-17、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、NF-κB在内的多条信号通路发挥治疗作用。大多数治疗靶标与OSCC患者预后显著相关,其中与总生存期显著相关的靶标有9个,与无进展生存期显著相关的靶标有7个。分子对接结果显示柚皮素与MAPK3,β-胡萝卜素、山奈酚与CASP3结合能力较强。结论土茯苓复方中包括柚皮素、β-胡萝卜素和山奈酚在内的8个主要活性成分,可通过MAPK3、AKT1和CASP3等多条信号通路作用于OSCC的141个靶点,有助于OSCC治疗药物的研发。

复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症40例随机对照临床观察

目的观察复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症的临床疗效及安全性。方法将60例高尿酸血症患者随机分成对照组、短疗程组、长疗程组各20例。对照组仅给予健康教育、低嘌呤饮食等治疗措施12个月;短疗程组在对照组基础上口服复方土茯苓颗粒每次10 g,每日2次,20天为1个疗程,2个疗程间间隔10天,共治疗3个月,之后继续基础治疗9个月;长疗程组在短疗程组基础上,从第4个月开始10天为1个疗程,2个疗程间间隔20天,再口服9个疗程,共治疗12个月。于治疗前及治疗后3、12个月分别采集患者中医临床四诊资料进行中医症状评分,并检测患者血尿酸水平以及血常规、尿常规、肝功能、肾功能等安全性指标。结果 3组患者治疗3、12个月时血尿酸水平均较治疗前下降(P<0.01);短、长疗程组血尿酸下降程度均优于对照组(P<0.05或P<0.01),且治疗12个月时长疗程组优于短疗程组(P<0.05)。治疗3个月短、长疗程组患者痰涎、神疲乏力、四肢沉重、小便颜色积分均降低,小便量积分均增加(P<0.05或P<0.01),治疗12个月后长疗程组仍可继续改善上述症状。3组患者治疗3、12个月时血常规、尿常规、肝功能、肾功能各指标与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方土茯苓颗粒可有效降低高尿酸血症患者血尿酸水平,对与痰湿阻滞相关的中医临床症状有改善作用,远期疗效及安全性好。

复方土茯苓颗粒治疗高尿酸血症患者的3个月随访观察

目的观察复方土茯苓颗粒的远期治疗作用及安全性。方法随机将77例高尿酸血症患者分成对照组(28例)、复方土茯苓颗粒1组(26例)、复方土茯苓颗粒2组(23例)。在相同健康教育基础上,复方土茯苓颗粒1组口服复方土茯苓颗粒10 g,2次/d,连续20 d;复方土茯苓颗粒2组口服复方土茯苓颗粒(剂量同1组)3疗程,20 d为1疗程,2个疗程间隔10d。于基线点、终末点、随访点采集患者中医临床四诊资料进行中医症状评分,检测患者血尿酸、血常规、肝肾功能、尿常规。结果 3组患者终末点、随访点血尿酸均较基线点下降(P<0.01),经复方土茯苓颗粒治疗后血尿酸下降较对照组明显(P<0.05或P<0.01),至随访点时2组血尿酸较1组低(P<0.05);复方土茯苓颗粒可降低患者痰涎、神疲乏力、四肢沉重、小便黄赤积分(P<0.05或P<0.01),增加小便清长积分(P<0.01),至随访点时2组可继续改善身热及上述症状(P<0.05或P<0.01);各观察时点3组患者血、尿常规、肝肾功能的各项指标均未见明显变化(P>0.05)。结论复方土茯苓颗粒具有良好的降尿酸效果,远期疗效良好,并可改善高尿酸血症患者与痰湿阻滞相关的临床症状,安全性高。

复方土茯苓颗粒定性定量方法研究

目的：建立复方土茯苓颗粒的定性定量方法。方法：采用TLC法对方中君药土茯苓、臣药牛膝进行定性鉴别;采用HPLC法测定方中牛膝的蜕皮甾酮,色谱柱为Agilent TC-18（250 mm×4.6 mm,5μm）柱,以水（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长243 nm。结果：在TLC色谱中可检出土茯苓、牛膝;在HPLC色谱中,蜕皮甾酮可与其他成分分离,且在0.176~1.232μg范围内其峰面积与进样量呈良好的线性关系（r=0.9999,n=7）,平均回收率为93.94%（RSD=1.1%,n=6）。结论：所建立的方法对方中的药材可准确、快速地进行定性、定量检测,可用于复方土茯苓颗粒的质量控制。

复方土茯苓颗粒对高尿酸血症肾病模型小鼠肾功能及IL-1β,IL-6表达的影响

目的:观察复方土茯苓颗粒对高尿酸血症肾病模型小鼠血尿酸、肾功能的影响及肾脏组织中白细胞介素1(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:采用腺嘌呤(100 mg.kg-1)联合97%氧嗪酸钾(1 g.kg-1)ig法建立小鼠高尿酸血症肾病动物模型,设立正常对照组、造模组、阳性药物组苯溴马隆组20 mg.kg-1、复方土茯苓颗粒高、中、低剂量组(6,3,1.5 g.kg-1)。实验第21天小鼠眼球采血后处死,检测血清中尿酸、肌酐、尿素氮及肾组织中IL-1β,IL-6水平。结果:复方土茯苓颗粒高、中、低剂量组尿酸(110.22±28.07),(128.10±54.79)(144.10±51.73)μmol.L-1;肌酐(39.11±8.55),(60.90±21.29),(87.50±16.18)μmol.L-1;尿素氮(25.15±3.17),(29.65±2.17),(35.01±3.63)mmol.L-1;IL-1β(3.13±0.53),(4.26±1.44),(5.10±1.86)μg.L-1;IL-6(14.90±4.93),(22.87±6.71),(35.83±22.19)μg.L-1;与模型组血尿酸(259.22±31.05)μmol.L-1、肌酐(103.00±22.34)μmol.L-1,尿素氮(50.76±9.93)mmol.L-1,IL-1β(10.74±4.0)μg.L-1,IL-6(62.87±15.42)μg.L-1相比明显降低(P<0.05),复方土茯苓颗粒高、中剂量组与苯溴马隆组相比,组间比较无统计学差异。结论:复方土茯苓颗粒能够有效降低高尿酸血症肾病模型小鼠尿酸、肌酐、尿素氮水平,保护尿酸造成的肾脏损伤,可能机制为降低IL-1β,IL-6等炎症因子的表达。

Box-Behnken效应面法优化复方土茯苓颗粒提取工艺

目的:优选复方土茯苓颗粒的提取工艺条件。方法:以落新妇苷、总黄酮提取量和出膏率的总评"归一值"(OD)为因变量,通过对提取次数、提取时间、溶媒比各水平进行多元线性回归及二项式拟合,采用Box-Behnken效应面法优选提取工艺。采用HPLC测定落新妇苷含量,流动相乙腈-0.1%磷酸水(20∶80),检测波长290 nm。结果:最佳提取工艺为加9.8倍量水提取3次,每次1.4 h;落新妇苷提取量1.991 mg·g-1,总黄酮提取量54.436 mg·g-1,干膏得率8.558%,OD实测值与预测值相对偏差1.54%。结论:Box-Behnken效应面法用于复方土茯苓颗粒提取工艺的优选是可行的。