UPLC-Q-TOF-MS/MS法分析鉴定鸡血藤中药复方提取物的化学成分

应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术定性鉴别鸡血藤中药复方提取物的化学成分。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7µm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正、负离子模式扫描。通过质谱数据库、化合物裂解规律,并结合相关文献进行鉴别。共鉴别出82种化合物,以黄酮类、苯丙素类、萜类化合物为主,包括黄酮类22种、苯丙素类24种、萜类25种、酚酸类4种、甾体类6种、氨基酸类1种,各药材组成复方后首次发现的新化学成分有10种。UPLC-Q-TOF-MS/MS技术为鉴别鸡血藤中药复方中化学成分提供了简便、快速、准确的方法,鉴定得到的各个化学成分涵盖了组方中各味药材的主要成分,可为该复方的质量标准及药效物质研究提供实验依据和理论基础。

鸡血藤复方提取物对C57小鼠Lewis肺癌实体瘤抑制作用

目的探讨鸡血藤复方提取物对C57小鼠Lewis肺癌实体瘤的作用及其机制。方法采用小鼠移植性Lewis肺癌模型,动物分为模型组、阳性药组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。观察治疗前后各组小鼠体质量、瘤重并计算抑瘤率,检测血清干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-4,比较胸腺、脾脏重量并计算脏器指数,苏木素-伊红(HE)染色并在光学显微镜下观察肿瘤组织的病理改变。结果给药7、14 d后高剂量组、阳性药组体质量减轻,瘤重降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论鸡血藤复方对C57小鼠Lewis肺癌实体瘤有抑制作用,一定程度上提高机体的免疫能力,推测可能在肿瘤治疗中作为生物反应调节剂达到治疗效果。

抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊复方提取物对病毒性心肌炎小鼠心肌的保护作用

目的探讨抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊(K-Cox B-JN)复方提取物对于阿霉素(ADM)诱导小鼠心肌损伤模型的保护作用。方法将复方提取物分为不同组别,观察其对心肌组织病理、小鼠心脾指数、小鼠血清肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(c Tn I)的影响。结果 K-Cox B-JN复方总黄酮低、中、高三组、黄酮+皂苷及水提物组能够改善炎性和坏死病理改变,对于CK、CK-MB及c Tn I的活性具有明显抑制作用。结论 K-Cox B-JN复方提取物对病毒性心肌炎小鼠心肌具有保护作用。

中草药及其复方提取物对奶牛乳房炎致病菌的体外抑菌效果

为了筛选出治疗奶牛乳房炎的中草药和方剂,选用蒲公英、紫花地丁和瓜子金等7味中草药及其3个复方提取物,分别采用平板打孔灌药法和试管二倍稀释法对从乳房炎奶牛病例中分离出的4种致病菌进行体外抑菌试验,测定各味中草药及其复方提取物的体外抑菌效果。结果显示,2种体外抑菌测定方法得到的结果一致,复方二对乳房炎奶牛分离的4种病原菌的综合抑制效果较好,可以作为治疗奶牛乳房炎的方剂使用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方提取物对心肌保护作用的实验研究

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方醇提物(K-CoxBJN-C)对阿霉素(ADR)诱导小鼠心肌损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取肢体Ⅱ导联心电图正常的120只昆明小鼠随机分为6组,即正常对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、水提物组(灌胃K-CoxBJN-S,5 g.kg-1)、复方65%醇提物高、中、低剂量治疗组(分别灌胃K-CoxBJN-C 1.22,.4,4.8 g.kg-1),给药1次/d,连续14 d;同时除正常对照组(隔日腹腔注射NS 3mg.kg-1)外,各组小鼠隔日腹腔注射阿霉素3 mg.kg-1,共7次,建立ADR心肌损伤模型。动态观察小鼠症状及体征、体质量变化、死亡率;末次注射ADR 24 h后取血,比色法测定血清中CK、LDH的活性;取心脏、脾、胸腺计算重量指数;取心脏观察心肌病理改变。结果 K-CoxBJN-C能显著降低小鼠血清中CK、LDH的活性(P<0.05),增加心脏、脾、胸腺重量指数,改善小鼠心功能,减少死亡率,其中醇提物高、中剂量组效果好于水煎组。结论 K-CoxBJN-C可明显减轻ADR所致小鼠的心肌损伤,其作用机制可能与减轻免疫炎性反应有关。

中药复方提取物对免疫抑制雏鸡IBD疫苗的免疫增强效果

为探索中药复方提取物(由黄芪、女贞子、枸杞子、菟丝子按质量比2∶2∶1∶1制备而成)对免疫抑制雏鸡的免疫增强效果,将180羽3日龄SPF雏鸡随机均分为对照组、模型组、阳性药物组、中药复方提取物高、中、低剂量组,试验组雏鸡连续3 d每天肌肉注射环磷酰胺90 mg/kg,建立鸡免疫抑制模型,对照组注射等量的生理盐水,中药复方提取物高、中、低组每天分别在饮水中添加10.0、5.0、2.5g/L的中药复方提取物,阳性药物组每天添加200 mg/L的黄芪多糖粉,连续添加7 d。试验期38 d。结果显示:饮水中添加10.0、5.0 g/L中药复方提取物,免疫抑制雏鸡末体质量、日均增体质量和脾脏指数均显著高于模型组的(P<0.05);添加14 d后,雏鸡血清IgM含量开始高于对照组,并维持在较高水平;21 d后,血清中IgA、IFN–γ和中剂量组的IgG含量显著高于模型组的(P<0.05);在接种传染性法氏囊(IBD)疫苗后7 d,雏鸡传染性法氏囊病毒抗体效价提高,接种14 d后,还能维持较高的抗体效价水平,IBD疫苗的免疫效果增强。可见,在本试验条件下,在饮水中添加10.0、5.0 g/L的中药复方提取物能有效提高免疫抑制雏鸡的生长性能,改善其免疫功能,增强IBD疫苗的免疫保护效果。

黄芪丹参复方提取物对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘血管内皮细胞及滋养细胞血管内皮生长因子mRNA表达影响

目的研究黄芪丹参复方提取物提高胎盘供血的分子机制,为临床有效防治胎盘供血不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离中药黄芪、丹参复方成分,运用一氧化氮合酶(NOS)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)建立一氧化氮合成阻滞大鼠模型,核酸原位杂交技术检测妊娠12日胎盘滋养细胞、始基微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达变化。结果一氧化氮合成阻滞模型VEGFmRNA表达较空白组、中药治疗组及硝酸甘油治疗对照组均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪丹参复方成分可能对妊娠早期胎盘滋养细胞及血管内皮细胞VEGFmRNA表达具有促进作用,从而有利于胎盘血管网络形成及滋养细胞侵入及母胎循环构建,提高胎盘血液供应,达到防治妊娠高血压综合征等胎盘供血不足疾病的目的。

K-CoxB-JN复方提取物对小鼠急性阿霉素心肌损伤的保护作用

目的探讨抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)复方提取物对于阿霉素(ADM)诱导小鼠心肌损伤模型的保护作用。方法将复方提取物分为不同组别,观察其对小鼠心脾指数、小鼠血清肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。结果 K-CoxB-JN复方总黄酮低、中、高三组及黄酮+多糖组对于心肌酶CK、CK-MB及cTnI的活性具有明显抑制作用,K-CoxB-JN复方总黄酮中、高三组及黄酮+多糖组升高SOD活性,K-CoxB-JN复方总黄酮中剂量组及黄酮+多糖组降低MDA的含量。结论K-CoxB-JN复方提取物对心肌损伤小鼠血清CK、CK-MB、cTnI有抑制作用,对SOD和MDA均有改善作用,K-CoxB-JN复方提取物黄酮和多糖对心肌具有保护作用。

中药复方提取物对IBDV感染SPF鸡抗氧化和抗炎能力的影响

将150羽SPF雏鸡随机分为5组,即对照组(CK)、病毒感染模型组(MC)、中药提取物高、中、低剂量组(T1、T2、T3),T1、T2、T3组试验鸡分别按照10.0、5.0、2.5g/L的剂量在饮水中添加中药提取物(由2∶2∶1∶1质量比的女贞子、黄芪、枸杞子、菟丝子组成),连续添加7d,CK和MC不添加任何药物,给药完成后,对照组滴鼻生理盐水,其他各组雏鸡分别通过滴鼻接种IBDV,攻毒后连续观察7 d,检测抗氧化指标(T-SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA)和炎性因子(NO、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6)的分泌量,检测脾淋巴细胞i NOS、NF-κB、MCP-1基因m RNA表达量。结果显示:T1和T2试验鸡抗氧化能力均提高,血清中GSH-Px活力和T-AOC极显著高于MC的(P<0.01),MDA含量显著低于MC的(P<0.05),T2试验鸡血清中T-SOD活力显著高于MC的(P<0.05);T1和T2试验鸡炎症反应明显减少,血清中NO、TNF-ɑ、IL-1β含量均极显著低于MC的(P<0.01),NO和TNF-ɑ含量显著低于T3的(P<0.05),IL-1β含量显著或极显著低于T3的,IL-6含量显著高于T3和MC的(P<0.05);T1和T2试验鸡脾淋巴细胞中i NOS m RNA表达量显著低于MC的(P<0.05),NF-κB和MCP-1 m RNA表达量极显著低于MC的(P<0.01)。表明中药提取物可能通过增强雏鸡的抗氧化能力,促进炎性相关因子的分泌和调节基因表达实现抗炎效果来抵抗IBDV。

黄蜀葵花乌梅复方提取物对TNBS诱导克罗恩病小鼠的治疗作用及其机制研究

目的:探讨黄蜀葵花乌梅复方提取物对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病(CD)实验小鼠的治疗作用及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)等炎症因子的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶组和黄葵乌梅复方组,后3组应用TNBS诱导建立小鼠CD模型。造模开始时,柳氮磺吡啶组和黄葵乌梅复方组分别给予0.5g/kg柳氮磺吡啶和6g/kg黄蜀葵花乌梅复方提取物灌胃,每日1次,连续28d。实验终点时分析实验动物的存活率、结肠长度/重量比值、结肠组织病理,以及结肠组织中炎症因子TNF-α和IFN-γ含量。结果:与模型组相比,黄蜀葵花复方组小鼠存活率明显增高,结肠重量/长度比值明显降低,结肠组织炎症和隐窝损害明显减轻,结肠病理评分和结肠组织TNF-α、IFN-γ含量明显降低。结论:黄蜀葵花和乌梅复方提取物可用于CD的治疗,其作用机制可能与显著降低炎症因子TNF-α和IFN-γ含量有关。

中药复方提取物对猴免疫缺陷病毒感染恒河猴外周CD4＋T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨中药复方提取物湘A1号（HNA-1）对猴免疫缺陷病毒（SIV）感染恒河猴外周血CD4＋T淋巴细胞亚群的影响。方法利用HNA-1治疗SIV感染恒河猴，同时对不同时间点的冻存外周血单核细胞（PBMC）进行幼稚型细胞、中央型记忆细胞和效应型记忆细胞的分类和计数，并检测血浆病毒载量，对各组数据进行统计分析。结果高、低剂量治疗组CD4＋T淋巴细胞绝对数治疗8周后较治疗前和对照组出现了较为明显的上升（P〈0．05），且停药后较快回落。高剂量组治疗8周和16周后幼稚型CD4＋T淋巴细胞比例均较治疗前明显增长（P〈0．05），低剂量组治疗8周和16周后也出现了明显增长（P〈0．05）。转换成细胞绝对数后，高、低剂量组幼稚型CD4＋T淋巴细胞分别从治疗前的（364±342）个／μl、（309±216）个/μl，增至治疗8周后的（699±319）个／μl、（639±337）个／μl，差异有统计学意义（P〈0．05）。而血浆病毒载量改变不明显。结论中药能有效增加SIV感染恒河猴的外周幼稚型CD4＋T淋巴细胞，HNA-1可能会延缓获得性免疫缺陷综合征的发生，有望作为高效抗逆转录病毒疗法的辅助药物加快免疫重建，值得更长期、全面地对其进行深入研究。

中药复方提取物的抗兔球虫效果

将100只新西兰白兔随机分为5组,即对照组,模型组及中药提取物高、中、低剂量组,除对照组外,试验兔感染1×10^5个肠艾美耳球虫卵囊,再分别每天灌服0、0.500、0.250、0.125 g/kg的中药提取药物(白头翁、柴胡、半夏、黄芩、槟榔、甘草等组成),每天灌服1次,连续使用3 d,给药后连续观察21 d,每天记录试验兔的死亡和血便情况,隔7d测量试验兔体质量,采集粪便计数粪便卵囊数(OPG);试验结束后剖杀动物,观察其盲肠病变情况。结果显示:经中药提取物高剂量和中剂量治疗的试验兔存活率分别达90%和85%,感染球虫的程度逐渐由严重转为轻度,模型组和低剂量组试验兔的存活率分别为25%和50%,且存活试验兔大部分感染严重;在给药后7、14、21 d,高剂量组和中剂量组试验兔的体质量显著高于模型组的(P<0.05),OPG极显著低于模型组的(P<0.01),血便记分显著低于模型组的(P<0.05);给药后7、14 d,低剂量组试验兔的OPG极显著低于模型组的(P<0.01);给药后14 d,低剂量组试验兔的体质量显著高于模型组的(P<0.05);给药后21 d,高剂量组和中剂量组试验兔的增质量极显著高于模型组的(P<0.01),显著高于低剂量组的(P<0.05),相对增质量极显著高于模型组和低剂量组的(P<0.01),OPG极显著低于低剂量组的(P<0.01),血便消失。高、中、低剂量的中药提取物组试验兔的抗球虫指数极显著高于模型组的(P<0.01),治疗效果分别为高效、中效、无效。可见,在本研究剂量范围内,治疗效果存在一定的量效关系,高剂量治疗效果最佳。

K-CoxB-JN复方提取物对CVB3感染小鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)复方提取物总黄酮和总皂苷对于CVB3病毒感染小鼠心肌损伤模型的保护作用。方法将复方提取物分为不同组别,观察其对小鼠心脾指数、小鼠血清肌酸激酶(CK);乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶同工酶(CKMB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。结果 K-CoxB-JN复方总黄酮低、中、高三组、黄酮+皂苷中剂量组及水提物组对于心肌酶CK、CK-MB及cTnI的活性具有明显抑制作用,K-CoxB-JN复方总黄酮中、高三组及黄酮+皂苷组升高SOD活性,K-CoxB-JN复方总黄酮中剂量组、黄酮+皂苷中剂量组及水提物组降低MDA的含量。结论 K-CoxB-JN复方提取物对心肌损伤小鼠血清CK、LDH、CK-MB、cTnI有抑制作用,对SOD和MDA均有改善作用,K-CoxB-JN复方提取物对心肌具有保护作用。

小儿抗感颗粒复方提取物镇咳镇痛解热作用

目的研究小儿抗感颗粒复方提取物的镇咳镇痛解热作用。方法以小儿抗感颗粒复方提取物引起半数小鼠氨水引咳所需刺激的时间EDT50、冰乙酸所致小鼠扭体次数以及干酵母所致大鼠发热的体温变化为指标,观察小儿抗感颗粒复方提取物的镇咳、镇痛及解热作用。结果小儿抗感颗粒复方提取物具有显著的镇咳作用,给药后3 h镇咳作用最强;小儿抗感颗粒复方提取物各剂量均可显著减少小鼠扭体次数,提示具有显著的镇痛作用;小儿抗感颗粒复方提取物高剂量组在给药后3 h,各剂量组在给药后4 h可显著降低干酵母所致大鼠体温上升幅度,且呈剂量相关性。结论小儿抗感颗粒复方提取物具有良好的镇咳镇痛解热作用。

马黄酊复方提取物凝胶的制备与抗炎活性

目的:制备马黄酊复方提取物凝胶并研究其抗炎活性。方法:利用减压干燥法制备马黄酊复方提取物;分别取0.5%、1.0%、1.5%用量的卡波姆来制备凝胶基质,以确定具有最佳涂布性能的凝胶基质中卡波姆的用量;将马黄酊复方提取物、尼泊金甲酯等加入空白凝胶基质中,搅拌均匀,制备复方凝胶剂;以耳肿胀和足跖肿胀试验初步测定马黄酊凝胶的抗炎活性。结果:通过观察凝胶均匀性、细腻度、黏稠度、舒适度等,发现质量百分比浓度1%卡波姆空白凝胶较为适宜作为凝胶基质,制备的马黄酊复方提取物凝胶外观颜色均匀,涂布性能良好;5%与10%马黄酊复方提取物凝胶显示出较好的抗炎活性。结论:马黄酊复方提取物凝胶处方和制备工艺可行,质量稳定,具有较好的抗炎活性。

丹参饮复方提取物-A对心肌缺血大鼠的保护作用研究

目的:研究丹参饮复方提取物-A对冠脉结扎心肌缺血大鼠的保护作用。方法:采用大鼠冠脉结扎手术制备心肌缺血大鼠模型,观察不同剂量丹参饮复方提取物-A对心肌缺血大鼠血清心肌酶学、心肌组织形态学及心肌超微结构的影响,评价其对缺血心肌的保护作用。结果:丹参饮复方提取物-A能显著降低心肌缺血大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,升高心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量;改善心肌病理形态及心肌细胞超微结构的损伤。结论:丹参饮复方提取物-A可降低心肌缺血大鼠血清心肌酶学水平,抑制机体氧化应激反应,保护受损心肌细胞,进而发挥对缺血心肌的保护作用。

宁心复方提取物抗焦虑作用实验研究

目的探讨宁心复方提取物(简称宁心)的抗焦虑作用及作用机制,为临床提供依据。方法通过悬尾实验、强迫游泳实验、高台十字迷宫实验评价宁心的抗焦虑活性,并通过宁心对外源性升压物质的影响作用实验探讨宁心的抗焦虑作用机制。结果宁心416 mg/kg、208 mg/kg、104 mg/kg灌胃给药均有明显的抗焦虑作用;宁心在实验剂量下(288 mg/kg)能抑制外源酪胺引起的升压作用。结论宁心具有抗焦虑作用,其作用机制可能与抑制血压的升高有关。

中药复方提取物对细胞抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染能力的影响

中药复方提取物经临床验证对预防猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型等引起的疾病有效。本试验测定细胞安全浓度范围内中药复方提取物对细胞抗PRRSV感染能力的影响。试验用中药主要成分为虎杖、女贞子、杠板归等。提取方法为水浸,旋转蒸发干燥。制成生药原液浓度为25mg/mL,稀释成2500、1250、625.0、312.5、156.25、78.13、39.06、19.53、9.77、4.88μg/mL。培养细胞选用Marc-145。试验方法:1)细胞培养液中加入0.1mL中药提取物培养2h后加入PRRSV病毒液0.1mL,培养72h;2)细胞培养液中加入病毒液0.1mL培养2h后加入中药提取物0.1mL,培养72h;3)同时将各浓度中药提取物0.1mL和病毒液0.1mL加入细胞培养液中;3种加药方式均设细胞对照和病毒对照,每个浓度设4～6个重复。结果表明,第1种加药方式下,19.53～2500μg/mL效果显著,其中39.06μg/mL效果最好;第2种加药方式下,156.25～2500μg/mL效果显著,1250μg/mL效果最佳;第3种方式下,19.53～2500μg/mL效果显著,2500μg/mL效果最好。这可能是中药复方提取物预防PRRSV感染的作用机制之一。

玛卡复方提取物对游泳力竭小鼠抗疲劳的影响

目的:研究玛卡复方提取物对小鼠抗疲劳的影响。方法:将小鼠随机分为空白组、玛卡复方提取物低、中、高剂量组(玛卡复方提取物0.25、0.50、1.00 g/kg),全部小鼠连续灌胃30 d。在给药的最后一天灌胃30 min后,测试小鼠负重游泳时间以及血清尿素氮、血乳酸、肝糖原、肌糖原水平以评价小鼠疲劳状态;对小鼠的肝脏和肾脏组织进行苏木精-伊红(HE)染色,评价玛卡复方提取物对小鼠主要代谢器官的影响。结果:与空白组比较,玛卡复方提取物各剂量组小鼠负重游泳时间延长(P<0.05),其中中剂量小鼠表现得最明显;玛卡复方提取物各剂量组小鼠运动后血乳酸和血清尿素氮水平下降(P<0.01),高剂量组小鼠肝、肌糖原水平升高(P<0.05)。组织学观察发现持续用药后小鼠的肝肾两部位的组织正常。结论:玛卡复方提取物不损伤小鼠的肝肾组织且对游泳力竭小鼠具有抗疲劳作用。

中药复方提取物及其配合抗生素对猪繁殖与呼吸综合征的疗效观察

挑选自然感染猪繁殖与呼吸综合征的猪130头,分为中药复方提取物配合抗生素(头孢噻肟钠)组、中药复方提取物组、干扰素组、抗生素(头孢噻肟钠)组和空白对照组。中药复方提取物配合抗生素组用中药复方提取物灌服给药和头孢噻肟钠肌肉注射,中药复方提取物组用中药复方提取物灌服给药,干扰素组用干扰素肌肉注射,抗生素组肌肉注射头孢噻肟钠,空白对照组不给药,于处理后1周统计疗效。治疗结果表明:中药复方提取物配合抗生素组的治愈率和总有效率显著高于中药复方提取物组、干扰素组、空白对照组和抗生素组(P<0.05);A中药复方提取物组与西药对照组和空白对照组相比差异显著(P<0.05),但和干扰素相比差异不显著(P>0.05)。结论,中草药提取物及其配合抗生素对猪繁殖与呼吸综合征有很好的疗效,且中草药提取物配合抗生素的效果优于单独使用中草药提取物。