复方熊胆茵陈颗粒对代谢相关脂肪性肝病大鼠HPA轴相关激素影响的研究

目的 研究复方熊胆茵陈颗粒(ACF)对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠HPA轴相关激素的影响。方法 将51只SD大鼠随机分为模型组11只,正常组、低剂量组、中剂量和高剂量组各10只,正常组给予基础饲料、模型组与各剂量组给予高脂饲料喂养6周。造模成功后,低、中、高剂量组按体质量1 mL/100 g分别予4.73、9.46、18.92 g/L复方熊胆茵陈颗粒药液灌胃,正常组和模型组给予2 mL生理盐水灌胃,共4周。取肝脏行HE染色观察5组大鼠肝组织病理变化,取血清检测5组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)水平,qPCR检测5组大鼠肝组织中CRH、ACTH、CORT mRNA相对表达水平,免疫组化检测5组大鼠肝组织中CRH、ACTH、CORT蛋白相对表达水平。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠肝索排列紊乱,脂肪空泡满视野,累及肝小叶大于50%,符合脂肪性肝病病理+++级;与模型组比较,各剂量组大鼠肝细胞的脂肪空泡减少,肝索排列整齐,肝小叶清晰可见。(2)与正常组比较,模型组血清ALT、AST、CRH、ACTH、CORT均显著升高(P均<0.01);与模型组比较,各剂量组大鼠血清ALT、AST、ACTH、CORT均显著降低(P均<0.01),中、高剂量组大鼠血清CRH均显著降低(P<0.05或P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组大鼠肝脏CRH、ACTH、CORT mRNA相对表达水平均显著升高(P均<0.01);与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠肝脏CRH、ACTH、CORT mRNA相对表达水平均显著降低(P<0.05或0.01)。(4)与正常组比较,模型组大鼠肝脏CRH、ACTH、CORT蛋白相对表达水平均显著升高(P均<0.05);与模型组比较,各剂量组大鼠肝脏CRH、ACTH、CORT蛋白相对表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论ACF能够改善MAFLD大鼠肝组织损伤,减少MAFLD大鼠血清及肝组织中CRH、ACTH、CORT的分泌,提示ACF治疗MAFLD的作用机制可能与改善下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱有关。

复方熊胆茵陈颗粒质量标准研究

目的建立复方熊胆茵陈颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别制剂中的熊胆粉、茵陈、白术、甘草。采用高效液相色谱法测定制剂中牛磺熊去氧胆酸钠的含量。色谱柱:Kromail 100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.03 mol/L磷酸二氢钠溶液(60∶40),pH=4.4;检测波长:210 nm;流速:1 mL/min;柱温:25℃。结果在薄层色谱中可以检出熊胆粉、茵陈、白术、甘草。牛磺熊去氧胆酸钠在进样量0.182 1～1.821 mg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.999 98),平均加样回收率为100.39%,RSD=1.70%(n=6)。结论该方法简便、准确、专属性强,可以有效控制复方熊胆茵陈颗粒的质量。

复方熊胆茵陈颗粒的利尿作用

目的研究复方熊胆茵陈颗粒的利尿作用。方法通过给予正常大鼠及水负荷模型大鼠不同剂量复方熊胆茵陈颗粒,1.8、3.6、7.2 g/(kg·d),观察排尿量及其中Na+、K+、Cl-的浓度,以证明该复方的利尿作用。结果与阴性对照组尿量(7.8±1.2)m L比较,中、高剂量复方熊胆茵陈颗粒可以明显增加正常大鼠24 h尿量(P<0.05,P<0.01),分别达到(10.8±4.4)、(11.8±3.9)m L;与阴性对照组(5.7±1.5)m L比较,中、高剂量复方熊胆茵陈颗粒可以提高水负荷大鼠6 h尿量(7.5±1.3)、(7.6±2.1)m L,P<0.05;高剂量可提高正常大鼠尿液中Na+含量,正常组为(0.04±0.02)mmo I/L,高剂量组为(0.16±0.13)mmo I/L,P<0.01,各剂量均能明显通过水负荷大鼠尿液中Na+含量,正常组为(0.81±0.28)mmo I/L,低剂量组为(2.10±0.59)mmol/L,中剂量组为(2.26±0.50)mmol/L,高剂量组为(2.86±0.98)mmol/L,P<0.05。结论复方熊胆茵陈颗粒具有利尿作用,且呈现剂量依赖关系。

复方熊胆茵陈颗粒对高脂模型大鼠肝脂肪含量及脂酶活性的影响

目的观察复方熊胆茵陈颗粒对高脂模型大鼠肝脂肪含量及脂酶活性的影响。方法高脂饮食饲养大鼠6周,并设正常组、模型对照组、复方熊胆茵陈颗粒高、低剂量组,药物干预4周后,采用索氏提取法检测肝脂肪含量,Elisa法测定肝脂酶浓度,比色法检测肝脂酶活性。结果复方熊胆茵陈颗粒可降低肝脂肪含量(P<0.05),提高肝脂酶活性(P<0.01)。结论复方熊胆茵陈颗粒可通过增强肝脂酶活性调节脂质代谢。

复方熊胆茵陈颗粒毒理学实验研究

目的:检测复方熊胆茵陈颗粒对SD大鼠的毒性作用,为其应用提供毒理学安全依据。方法:采用大鼠经口急性毒性及长期毒性实验,测定熊胆茵陈颗粒毒性作用。结果:复方熊胆茵陈颗粒急性经口服LD_(50)>36 g/(kg体质量)。动物在3个月毒理试验期间均未见异常反应,体质量正常增长。动物解剖后,各器官组织经病理检查,肉眼及组织形态学观察未见病变。结论:复方熊胆茵陈颗粒在本实验条件下毒性低微,长期给药无明显毒性。

复方熊胆茵陈颗粒祛痰化瘀作用药效学研究

目的:研究复方熊胆茵陈颗粒的祛痰化瘀作用。方法:小鼠连续灌胃给药5天,末次给药30min后采用酚红法检测复方熊胆茵陈颗粒的祛痰作用;同时,SD大鼠连续灌胃给药5天,末次给药1h后测定大鼠排痰量,研究复方熊胆茵陈颗粒的祛痰作用;SD大鼠连续灌胃给药14天,末次给药后采用肾上腺素+冷水刺激制造急性血瘀大鼠模型,检测大鼠血液流变学指标,研究复方熊胆茵陈颗粒的化瘀作用。结果:复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组可增加小鼠酚红排泌量,高剂量组可增加大鼠排痰量;复方熊胆茵陈颗粒高剂量可改善肾上腺素+冷水刺激诱导的急性血瘀大鼠全血还原中切黏度和红细胞刚性指数。结论:复方熊胆茵陈颗粒具有一定的祛痰化瘀作用。

复方熊胆茵陈颗粒微生物限度检查及控制菌检查方法验证

目的建立复方熊胆茵陈颗粒的微生物限度检查方法,保证检验结果的准确可靠。方法按中国药典方法进行菌回收率试验及控制菌检查方法验证。结果 5种试验回收率试验均为70%以上,其中细菌以培养基稀释法进行检查,酵母菌、霉菌以常规法即可。控制菌检查中,大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌3者试验组均可检出试验菌,阴性组均无菌生长,阴性菌对照组亦无菌生长。结论本试验建立的方法可作为复方熊胆茵陈颗粒的微生物限度检查方法学验证的依据。

复方熊胆茵陈颗粒对非酒精性脂肪性肝炎大鼠TNF-α的影响

目的研究复方熊胆茵陈颗粒对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织中TNF-α表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西利宾安组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,除空白组外予以高脂饲料喂养6周,每周1次后肢皮下注射40%CCL4花生油溶液制备脂肪性肝炎大鼠模型。空白组、模型组予以生理盐水灌胃,西利宾安组予西利宾安灌胃,低剂量组、中剂量组、高剂量组予复方熊胆茵陈颗粒按相应剂量灌胃。干预4周后取材,HE染色观察大鼠肝组织病理变化,PCR法和免疫组化法检测肝脏TNF-α的表达。结果复方熊胆茵陈颗粒能减少肝细胞的脂肪变性及炎细胞浸润,显著抑制TNF-α的表达(P<0.01)。结论复方熊胆茵陈颗粒可降低TNF-α的表达,这可能是其治疗NASH的作用机制之一。

复方熊胆茵陈颗粒的制备工艺研究

目的:制备复方熊胆茵陈颗粒,优选复方熊胆茵陈颗粒剂成型工艺。方法:以颗粒的成型率、休止角、堆密度、溶化性为指标筛选合适的辅料,以口感、成形性为指标筛选最佳矫味剂,并以水分控制确定干燥时间,以绿原酸有无被破坏来确定干燥温度。并了解颗粒的吸湿性及相对临界湿度,控制颗粒的贮藏条件,确保颗粒的质量。结果:复方熊胆茵陈颗粒的最佳配方为复方熊胆茵陈浸膏,加入与熊胆粉混匀的辅料(蔗糖:糊精)以1:1.5:1.5混合,制软材,12目过筛,干燥温度为65℃,10目整粒。结论:筛选得到的复方熊胆茵陈颗粒剂制备方法简便可行,成型工艺稳定可控,建议密闭、置干燥阴凉处保存。

正交设计优选复方熊胆茵陈颗粒水提醇沉工艺研究

目的:优选复方熊胆茵陈颗粒的水提醇沉工艺条件。方法:以绿原酸、柴胡皂苷a的含量和浸膏得率为考察指标,正交试验法优选水提醇沉最佳工艺条件。结果:最佳水提醇沉条件为加8倍量水提取2次,每次1.5 h;醇沉药液相对密度1.2(50℃),醇沉乙醇浓度为70%,醇沉时间24 h。结论:该优选工艺方法简便、稳定可行,可作为复方熊胆茵陈颗粒的提取纯化工艺。

复方熊胆茵陈颗粒的保肝、降血脂、抗脂肪肝药效学研究

目的:研究复方熊胆茵陈颗粒的护肝、降血脂及抗脂肪肝的作用。方法:以皮下注射四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤模型及腹腔注射D-氨基半乳糖致肝损伤模型研究复方熊胆茵陈颗粒的护肝作用;给予高脂饲料诱导高脂血症大鼠模型研究复方熊胆茵陈颗粒的降血脂作用;以乙硫氨酸诱导致脂肪肝大鼠模型研究复方熊胆茵陈颗粒的抗脂肪肝作用。结果:复方熊胆茵陈颗粒可以降低四氯化碳诱导急性肝损伤大鼠模型及D-氨基半乳糖致肝损伤大鼠模型的血清AST、ALT含量。复方熊胆茵陈颗粒可以降低高脂饲料诱导的高脂血症大鼠模型的TG、LDLC含量,可以降低乙硫氨酸诱导的脂质紊乱大鼠模型的TG含量。结论:复方熊胆茵陈颗粒具有护肝、降血脂及抗脂肪肝作用。

复方熊胆茵陈颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠结肠及肠道微生物影响的研究

目的研究复方熊胆茵陈颗粒对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠结肠及肠道微生物组成和丰度的影响。方法SD大鼠50只随机的分为正常对照组、模型对照组、复方熊胆茵陈颗粒低剂量组、中剂量和高剂量组,正常对照组饲给予基础饲料喂养、模型对照组与中药组以高脂饲料喂养,为期6周。造模成功后复方熊胆茵陈颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组予以复方熊胆茵陈颗粒(按原药材计4.73 g、9.46 g、18.92 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,正常和模型组给予2ml生理盐水灌胃,共4周。灌胃4周后取材,检测大鼠血清谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平,HE染色观察大鼠结肠组织病理变化,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)示踪法检测结肠肠道通透性,16S多样性测序检测肠道微生物组成和丰度变化。结果复方熊胆茵陈颗粒能减少NAFLD大鼠结肠组织的炎症细胞浸润、减轻黏膜萎缩、充血,肠道黏膜通透性降低;16S多样性测序分析显示,各组大鼠在门水平相对丰度前5的物种为:厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、疣微菌门、放线菌门,与正常对照组比较,模型对照组大鼠疣微菌门显著增多(P<0.01);与模型对照比较,复方熊胆茵陈颗粒各剂量组疣微菌门均显著降低(P<0.01);其余各菌门的组成和丰度无显著性差异。与正常对照组比较,模型对照组在属水平上梭菌属、乳酸杆菌属、毛螺菌属显著、拟杆菌属、瘤胃球菌属减少(P<0.01),考拉杆菌属、布劳特氏菌属、别样棒菌属显著增多(P<0.01);与模型对照比较,复方熊胆茵陈颗粒低、中、高剂量组梭菌属、乳杆菌属均显著升高(P<0.01),复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组拟杆菌属显著升高(P<0.01),复方熊胆茵陈颗粒高剂量组考拉杆菌属显著降低(P<0.01)、复方熊胆茵陈颗粒中、高剂量组布劳特氏菌属减少(P<0.05)。结论复方熊胆茵陈颗粒能够改善NAFLD大鼠结肠组织损伤,给予复方熊胆茵陈颗粒治疗后肠道微生物的组成和丰度发生改变,提示复方熊胆茵陈颗粒可以改善NAFLD大鼠肠道菌群紊乱。