复方积雪草组方联合中药结肠透析对CKD4~5期患者的临床疗效及肠道菌群的影响

目的:观察复方积雪草组方联合中药结肠透析治疗CKD4~5期患者的临床疗效及对肠道菌群的影响。方法:将48例CKD4~5期非透析且属肾虚血瘀浊毒证的患者随机分为两组,在基础治疗上,治疗组予复方积雪草组方并联合中药结肠透析;对照组予酪酸梭菌活菌片,治疗12周,观察两组治疗前后的中医证候积分,肾小球滤过率(eGFR),血肌酐(Scr),尿素氮(BUN),血尿酸(UA),血白蛋白(Alb),总胆固醇(TC)等指标,同时粪便标本行细菌16S扩增子测序分析肠道菌群组成及丰度。结果:与治疗前相比,治疗组的Scr及BUN水平未见明显上升(P>0.05);而对照组的Scr及BUN水平均明显升高(P<0.01),两组的eGFR变化率差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组的Alb水平明显升高,TC水平明显下降;UA水平、中医证候积分显著低于治疗前及对照组,差异均有统计学意义(P<0.05~0.01)。治疗组的临床总有效率81.8%;对照组的总有效率42.3%;两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。两组治疗前优势菌门构成有厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门,两组在治疗前后优势菌群组成均有变化,但差异无统计学意义(P>0.05)。但两组间治疗后菌群组成比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过复方积雪草组方联合中药结肠透析干预后,患者的Scr及eGFR水平稳定,Alb上升,UA及TC水平、中医证候积分较治疗前有明显改善,部分有益菌群的丰度增加。

基于网络药理学和分子对接探究复方积雪草治疗慢性肾病的作用机制

目的利用网络药理学筛选复方积雪草的活性成分,探讨复方积雪草酸治疗慢性肾脏病(CKD)的物质基础、作用靶点及信号通路。方法通过中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)和STITCH数据库,收集复方积雪草的活性物质,并鉴定其相应靶点。应用OMIM和TTD平台收集慢性肾病的相关靶点,利用DrugBank数据库搜集已上市药物治疗慢性肾病的作用靶点;利用STRING数据库构建药物疾病交集靶点的PPI网络,并筛选出hub靶基因;随后,运用David数据库进行GO分析和KEGG信号通路富集分析,通过Cytoscape3.10.0软件来构建复方积雪草活性成分与对应的靶点的成分-靶点-信号通路网络图;利用AutoDock软件和Pymol软件进行分子对接并对结果进行可视化分析。结果复方积雪草酸活性成分对应192个靶标基因,与慢性肾病靶点集和药物治疗疾病靶点集进行交集分析后共得到26个关键基因,这些基因涉及的信号通路包括JAK-STAT信号通路、脂质和动脉粥样硬化通路、PI3K-AKT等30条信号通路。分子对接验证结果表明,复方积雪草中的活性成分槲皮素、谷甾醇、洋蓟素(e)与慢性肾脏病相关的疾病靶点,如EGFR、XDH、MMP1、NOS3等蛋白具有强结合力。结论复方积雪草通过多成分、多靶点、多途径发挥对慢性肾脏病的治疗作用。该研究为了解复方积雪草治疗CKD的作用机制提供了坚实的基础和佐证,并为今后的实验验证奠定了基础。

复方积雪草对局灶硬化性肾小球肾炎模型小鼠肾组织内细胞因子表达的调控作用

目的 :了解局灶硬化性肾小球肾炎 (FGS)模型小鼠的细胞因子表达谱 ,以及复方积雪草对其细胞因子网络的表达调控作用。方法 :通过BALB c小鼠尾静脉一次性注射阿霉素 (11mg·kg-1) ,诱导成FGS肾炎模型 ,以复方积雪草制剂灌胃治疗 4wk ,分别取 1、4wk肾组织 ,提取其总RNA ,通过反转录掺入荧光素CY3 dUTP CY5 dUTP ,转录产物与细胞因子基因芯片杂交 ,芯片扫描并进行图像分析。结果 :基因表达谱芯片检测表明 :复方积雪草可抑制PDGF α、PDGF β、PDGF受体、VEGFmRNA的表达 ;能抑制IL 9、IL 7R2、MIP等因子的mRNA的表达 ;经复方积雪草刺激后 ,肾组织中癌基因c Myc ,Jun表达被抑制。结论 :复方积雪草具有抗肾纤维化作用 。

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞Activin A和TGF-β1 mRNA表达的调节作用

目的:探讨复方积雪草对炎症因子刺激下肾小管上皮细胞生物活性改变的干预作用。方法:实验用IL-1β刺激肾小管上皮细胞,用不同剂量复方积雪草含药血清进行干预。用福辛普利(血管紧张素转换酶拮抗剂)含药血清作为对照。TGF-β1、Activin A和Activin A受体ActRⅠ等基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果:IL-1β诱导可使肾小管上皮细胞TGF-β1和Activin A的基因表达较正常对照细胞显著增高。各浓度复方积雪草含药血清干预均可下调Activin A及其受体的基因表达,但仅高浓度复方积雪草含药血清对TGF-β1的基因表达有显著下调作用。结论:复方积雪草对肾小管上皮细胞Activin A及其受体Act RⅠ的基因表达有下调作用,可能是其抑制炎症因子诱导的肾小管上皮细胞发生细胞活性改变,降低肾小管间质进一步炎症损伤的重要机制之一。福辛普利亦有相似作用,但机制可能不完全相同。

复方积雪草苷凝胶贴膏的制备工艺研究

目的:筛选复方积雪草苷凝胶贴膏的处方,确定最佳制备工艺。方法:采用正交设计法,以凝胶贴膏的初黏力、持黏力、综合外观为考察指标,对复方积雪草苷凝胶贴膏进行综合评分,考察不同基质辅料比例对复方积雪草苷凝胶贴膏的影响,优选最佳处方工艺。结果:最佳处方基质配比为甘羟铝:EDTA:甘油:CMC-Na=0.25:0.05:45:1。结论:按照最佳工艺条件制备的复方积雪草苷凝胶贴膏黏附力好,外观涂布均匀,能适应大生产的需要。

复方积雪草加味汤对早期糖尿病肾病尿微量白蛋白干预效应

目的:通过对早期糖尿病肾病患者尿微量白蛋白(MAU)的检测,采用复方积雪草加味汤对MAU阳性患者干预治疗,探讨中医药对早期糖尿病肾病干预作用。方法:随机选择在2010年11月～2011年6月在我院门诊及内科住院治疗的糖尿病患者和健康体检者。对照组健康正常人65例,均为在我院健康体检人员,尿常规定性均为阴性,无高血压、糖尿病以及其他急慢性肾损伤疾病。糖尿病组共68例,均确诊为2型糖尿病患者,且病史≤5年。尿常规蛋白定性均为阴性,排除其他疾病导致急慢性肾损伤。糖尿病组与健康对照组在年龄、性别、体重等身体各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。采用透射比浊法对MAU进行全定量测定;标准参考:MAU≤30mg/L正常,MAU>30mg/L即呈阳性。并对糖尿病组阳性患者行复方积雪草加味汤(积雪草30g、黄芪30g、桃仁6g、当归6g、金樱子10g、芡实10g、制大黄5g)进行干预治疗,共4周。结果:两组MAU检出情况对照组和糖尿病组相比,前者未检出尿MAU阳性,阳性率为0%,糖尿病组中检出尿MAU阳性41例,阳性率为39.8%,两者检测结果差异有统计学意义(P<0.05);对阳性组治疗前MAU(141.45±24.89)mg/L,复方积雪草加味汤治疗后MAU(51.57±15.56)mg/L,两者检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖尿病组与健康人组比较,尿微量白蛋白阳性率明显增高,表明糖尿病与尿微量白蛋白有一定的相关性。阳性组经复方积雪草加味汤治疗后,尿微量白蛋白明显减少,提示复方积雪草加味汤具有减少早期糖尿病尿微量白蛋白作用。

复方积雪草防治局灶节段性肾小球硬化模型大鼠足细胞损伤的实验研究

目的:探讨复方积雪草对局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulo sclerosis,FSGS)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白nephrin、podocin表达的影响,阐述其延缓肾小球硬化的部分分子生物学机制。方法:采用左肾摘除+阿霉素重复静脉注射方法建立FSGS模型。复方组分别予高中低剂量复方积雪草膏剂灌胃;对照组予苯那普利混悬液;于第8周末留取24h尿蛋白定量,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和血浆蛋白(Alb);留取右肾标本,光镜标本行HE染色;用免疫组化法观察裂孔膜蛋白nephrin和podocin表达;RT-PCR法检测肾组织nephrin和podocinmRNA表达。结果:各复方组24h尿蛋白定量及血Scr、BUN、TC、TG较模型组有显著改善,且与西药组疗效相似。RT-PCR及免疫组化结果显示模型组足细胞裂孔膜蛋白表达较正常组明显降低(P<0.05)。而各治疗组表达较模型组均有明显增加(P<0.05),且与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方积雪草能通过上调模型大鼠肾小球内nephrin和podocin分子表达,减轻足细胞损伤,延缓肾小球硬化。

复方积雪草合剂对IgA肾病大鼠肾组织炎症因子和ECM表达的影响

目的:探讨复方积雪草合剂对实验性IgA肾病(IgAN)模型大鼠肾脏组织细胞外基质(ECM)和炎症因子表达的干预作用。方法:采用改良口服牛血清白蛋白(BSA)和尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)的免疫复合法建立大鼠实验性IgAN模型,40只大鼠随机分为正常组、模型组及复方积雪草合剂治疗组(设高、中、低3个剂量)。药物干预12周,分别观察实验大鼠尿蛋白、肾功能、血尿及肾病理的变化,并用免疫组化及半定量法检测肾组织中FN、IL-6、TGF-β1的含量。结果:复方积雪草治疗组能显著减少实验大鼠尿红细胞和尿蛋白(P<0.05),同时对实验大鼠肾组织TGF-β1、FN的表达均有明显抑制作用(P<0.05),但对IL-6的表达未见显著作用,且无明显剂量依从性。结论:复方积雪草合剂对IgAN模型鼠具有显著的治疗作用,能有效减少蛋白尿和红细胞,减轻肾组织的免疫损伤。其作用机制可能与其抑制或降低炎症因子的分泌有关,并最终延缓IgA肾病的发展。

复方积雪草2号对IgA肾病大鼠肾组织电镜形态及Nephrin表达的影响

目的:观察复方积雪草2号对IgA肾病(IgAN)大鼠肾组织病理电镜及Nephrin表达的影响。方法:复合免疫法制造IgAN大鼠模型,分设正常对照、模型、模型+缬沙坦、模型+复方积雪草2号高剂量、模型+复方积雪草2号中剂量、模型+复方积雪草2号低剂量6组。观察各组大鼠肾脏病理及肾组织Nephrin表达的变化。结果:(1)造模各组大鼠尿蛋白、镜下红细胞增多;免疫荧光镜下造模各组肾小球系膜区有不同程度IgA荧光,提示造模成功;(2)电镜下模型组系膜细胞增生,基质明显增多、有足突融合;而各治疗组足突融合情况均较模型组明显改善(P<0.05);(3)免疫组化法检测Nephrin显示模型组几乎没有阳性表达;RT-PCR显示模型组NephrinmRNA表达明显弱于正常组和其他各治疗组(P<0.01)。结论:(1)Nephrin的下降可能是IgAN足细胞损伤、产生蛋白尿的病理机制之一;(2)Nephrin可能是复方积雪草2号、缬沙坦发挥肾小球足细胞保护作用的分子靶点之一。

复方积雪草苷乳膏的制备与应用

目的:探讨复方积雪草苷乳膏的制备及临床应用。方法:将积雪草苷、维生素E、尿囊素加乳膏基质制成复方积雪草苷乳膏,以氢醌霜(美B霜)为对照,进行疗效比较。结果:本品质量稳定,保湿性良好,对皮肤无刺激性,疗效不亚于氢醌霜,无不良反应发生。结论:本品对治疗色素沉着有一定疗效。

复方积雪草胶囊对肾小球硬化症大鼠肾组织细胞外基质的影响

目的探讨复方积雪草胶囊对局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)大鼠肾组织细胞外基质(ECM)的影响。方法建立单侧肾切除合并阿霉素静脉双次注射大鼠FSGS模型,采用半定量病理分析法观察复方积雪草胶囊对肾组织ECM的影响,并生化检测尿蛋白、血脂、肾功能的变化。结果FSGS大鼠经复方积雪草胶囊治疗8周后,肾组织ECM积聚减少(P<0.01),血脂、肌酐、尿素氮和尿蛋白较模型组明显降低(P<0.05～0.01),疗效优于尿毒清组。结论复方积雪草胶囊可以抑制肾组织ECM积聚,改善肾功能,防治肾纤维化。

复方积雪草合剂对IgA_1诱导的大鼠系膜细胞增殖及IL-6与TGF-β_1表达的影响

目的:探讨复方积雪草合剂对IgA1诱导的大鼠系膜细胞(MsC)的增殖及分泌白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:用体外实验的方法,将MsC经培养及传代,分成正常组、模型组,复方积雪草合剂高、中、低组,泼尼松组及代文组;经IgA1诱导后分别予以上述各药含药血清;用计数板对MsC进行计数、用RT-PCR及ELISA法分别检测IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质的表达。结果:实验显示,复方积雪草合剂能抑制IgA1诱导的MsC增殖(与模型组比较P<0.05),且高、中剂量组明显优于其他治疗组;同时复方积雪草合剂能使MsC分泌IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质下降(与模型组比较P<0.05),并呈一定的量效关系,尤其对IL-6的抑制作用更明显。结论:复方积雪草合剂可抑制IgA1诱导的MsC增殖,并减少IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质的表达。

复方积雪草对人肾系膜细胞清道夫受体表达的影响

目的:探讨复方积雪草对人肾小球系膜细胞(HMC)表达清道夫受体(SR)水平的影响。方法:应用流式细胞仪和逆转录—聚合酶链反应(RT -PCR)检测体外培养人肾系膜细胞在佛波酯(PMA)刺激后复方积雪草对HMCSR的mRNA的表达。结果:体外培养的人肾系膜细胞在PMA刺激下能大量表达SR及其mRNA ,且随着剂量的增加而增强,其基因序列测定结果与巨噬细胞所表达的SR完全相同。复方积雪草能抑制PMA诱导的人肾小球系膜细胞SR表达,且随着浓度和时间的增加而增强。结论:人肾系膜细胞具有表达SR的潜力,复方积雪草能明显抑制人肾系膜细胞SR在PMA诱导下的表达,这可能是其发挥治疗作用的机理之一。

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞表型保护作用的研究

目的:探讨复方积雪草含药血清对炎症介质诱导的肾小管上皮细胞表型转化的干预作用。方法:用IL-1β(10ng/ml)刺激原代小鼠肾小管上皮细胞,并用低、中、高浓度复方积雪草含药血清进行干预。应用MTT法测定复方积雪草含药血清的细胞毒性;Western-blottlng和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白和基因表达。结果:IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin蛋白质合成增加,基因表达亦显著上调;各个浓度的复方积雪草含药血清干预均可显著降低α-SMA、Vimentin蛋白质、基因的表达。结论:复方积雪草含药血清可抑制免疫炎症因子诱导的肾小管上皮细胞表型转化,从而在防治肾小管间质纤维化中发挥其作用。

复方积雪草颗粒提取工艺研究

目的 研究复方积雪草颗粒最佳提取工艺。方法 采用正交试验法进行优选 ,HPL C法测定积雪草苷、黄芪甲苷的含量。结果 乙醇浓度、溶媒量、提取时间、提取次数对积雪草苷、黄芪甲苷提取率均有显著影响。结论 最佳提取工艺为药材 10倍量 5 0 %乙醇 ,提取 2次 ,每次

复方积雪草对高IgA血清诱导小鼠肾足细胞表达VEGF的影响

目的:探讨复方积雪草对IgA肾病患者的高IgA血清诱导小鼠肾损伤的保护作用及其机理。方法:用IgA肾病患者的高IgA血清刺激小鼠足细胞,用复方积雪草含药血清进行干预,并以强的松龙作为阳性对照,运用RT-PCR方法检测足细胞VEGFmRNA表达的变化。结果:高IgA血清刺激可以使小鼠足细胞VEGFmRNA表达明显升高(P<0·001),强的松龙和复方积雪草的干预均能明显降低小鼠足细胞VEGFmRNA的高表达(与空白对照组相比,分别P<0·01,P<0·05)。结论:复方积雪草可能通过抑制VEGF的表达而减轻IgA肾病患者的高IgA血清造成的肾损伤。

IgA_1对肾足细胞分泌VEGF、Col-Ⅳ的影响及复方积雪草2号的干预作用

目的:探讨复方积雪草2号对IgA1诱导的小鼠肾足细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)、IV型胶原(Col-IV)的影响。方法:用体外实验的方法,将小鼠肾足细胞经培养及传代,分成正常组、模型组、复方积雪草2号高、中、低剂量组、泼尼松龙组及缬沙坦7组,用IgA1诱导并分别予以上述各药进行干预24小时,用RT-PCR及ELISA法分别检测VEGF、Col-IV的mRNA及其蛋白质的表达。结果:IgA1刺激可以使小鼠足细胞VEGF与Col-IV表达明显升高(P<0.05),泼尼松龙、缬沙坦和复方积雪草2号的干预均能明显降低小鼠足细胞VEGF的高表达,与模型组相比,P均<0.05;而且泼尼松龙和复方积雪草2号还能明显降低足细胞Col-IV的高表达,与模型组相比,P均<0.05。结论:复方积雪草2号可抑制肾足细胞由IgA1诱导造成的VEGF、Col-IV的高表达。

正交设计法优选复方积雪草苷凝胶剂的基质

目的优选复方积雪草苷凝胶剂基质处方。方法采用正交设计法,以卡波姆-940、聚乙烯吡咯烷酮、氮酮、薄荷醇、丙二醇、甘油的用量为因素,以凝胶剂的粒径、黏度、稳定性和保湿性作为考查指标,通过直观分析法和综合分析法对复方积雪草苷凝胶剂基质处方进行优选。结果优选复方积雪草苷凝胶主要基质的最佳处方为0.8%卡波姆940、2%聚乙烯吡咯烷酮、1%氮酮、10%甘油、15%丙二醇。结论按此基质处方制备的凝胶剂符合《中国药典》凝胶剂的相关规定。

复方积雪草对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响

目的观察复方积雪草对阿尔茨海默病大鼠学习、记忆的影响。方法雄性SD大鼠,随机分为5组:对照组、模型组、低剂量、中剂量、高剂量治疗组。采用IBO损毁大鼠双侧迈尼特基底核(NBM),建立AD动物模型,并用复方积雪草连续灌胃30 d,做跳台实验和Y迷宫实验以测学习、记忆能力。结果模型组较对照组的学习记忆能力均显著下降;与模型组比较,积雪草治疗组的学习记忆能力显著升高。结论复方积雪草能够提高AD模型大鼠的学习记忆能力。

复方积雪草对局灶节段性硬化大鼠E-钙粘素表达的影响

目的:观察复方积雪草对局灶节段硬化性(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)模型大鼠E-钙粘素(E-Cadherin,E-cad)表达的影响,探讨其防治肾纤维化的作用及机制。方法:建立局灶节段硬化性FSGS大鼠模型,分为正常组、模型组、复方积雪草组和苯那普利对照组。采用定量PCR和免疫组化法分别测定肾组织E-cad的基因和蛋白的表达。结果:模型组大鼠出现局灶节段性肾小球硬化,肾间质纤维化程度也较为明显,肾组织中的E-cad基因表达和肾小球足细胞、肾小管上皮细胞E-cad蛋白表达均明显降低,经复方积雪草干预后肾组织病变程度减轻,肾小球足细胞、肾小管上皮细胞E-cad基因和蛋白表达均有所升高,疗效与苯那普利相似。结论:复方积雪草可上调FSGS大鼠肾组织E-cad基因和蛋白表达,从而保护肾小球足细胞及抑制肾小管上皮细胞转分化,可能是防治肾纤维化程度的重要机制之一。