基于气相色谱-质谱联用技术的复方蜘蛛香药味配伍前后挥发性成分比较研究

目的:研究复方蜘蛛香药味配伍前后挥发性成分及相对含量的变化。方法:提取挥发油并采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对复方蜘蛛香药味配伍前后挥发性成分进行分析,进而运用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)研究复方蜘蛛香药味配伍前后差异性化学成分。结果:蜘蛛香、木香、草果、蜘蛛香-木香、蜘蛛香-草果、木香-草果、复方蜘蛛香分别鉴定出23、17、19、22、29、25、35种成分。去重后共得到42种成分,包括烯类、醇类、醛类、酯类、酮类、芳烃类及其他类成分。复方蜘蛛香三味药配伍后新增(+)-柠檬烯、4-蒈烯2种成分,减少2-茨醇、α-香柠檬烯、β-紫罗酮、α-姜黄烯4种成分,水芹烯、邻伞花烃、罗勒烯、γ-萜品烯、芳樟醇5种成分含量增加,香叶醇、4-萜烯醇、(Z)-柠檬醛、茴香脑、乙酸香叶酯等28种成分含量降低;蜘蛛香-木香配伍后新增香橙烯1种成分,减少芳樟醇、异戊酸异戊酯、2-茨醇、4-萜烯醇、(Z)-柠檬醛、香叶醇、茴香脑7种成分,广藿香醇含量增加,乙酸香叶酯、塞瑟尔烯、α-布藜烯、β-榄香烯、环葵烯等20种成分含量降低;蜘蛛香-草果配伍后新增β-月桂烯1种成分,减少2-茨醇、β-榄香烯、α-香柠檬烯、α-古芸烯、石竹素5种成分,茴香脑、芳樟醇2种成分含量增加,乙酸香叶酯、β-丁香烯、α-布藜烯、1,8-桉叶素、香叶醇等26种成分含量降低;木香-草果配伍后新增茚满-4-甲醛1种成分,减少反-2-癸烯醛、α-香柠檬烯、蛇麻烯、α-姜黄烯4种成分,邻伞花烃、芳樟醇、γ-摩勒烯3种成分含量增加,乙酸香叶酯、环葵烯、β-榄香烯、β-紫罗酮、1,8-桉叶素等21种成分含量降低。结论:复方蜘蛛香药味配伍前后挥发性成分种类和含量发生变化,可为深入研究复方蜘蛛香挥发油药理作用和制剂提供依据。

D-最优混料设计制备复方蜘蛛香凝胶贴膏及初步药效学考察

目的以剂型改造为出发点优选复方蜘蛛香凝胶贴膏(Compound Zhizhuxiang Gel Plaster,CZGP)处方,考察单一促渗剂与二元复合促渗剂的促渗作用,并初步考察CZGP与原处方香果健消片(Xiangguo Jianxiao Tablets,XJT)的镇痛作用。方法以初黏力、持黏力、剥离强度和感官评分为评价指标,采用D-最优混料设计优化凝胶贴膏处方;选择3种常用透皮促渗剂氮酮、丙二醇、薄荷醇,以木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷为指标,通过干加热透皮系统评价单一促渗剂和二元复合促渗剂的促渗作用,筛选最优促渗剂;通过小鼠(幼鼠)醋酸扭体实验初步评价CZGP与XJT的镇痛作用。结果CZGP的最佳处方为酒石酸1.000 g、PVP K906.000 g、NP70011.000 g、甘羟铝0.800 g、甘油35.000 g、水21.200 g;不同的一元促渗剂及二元促渗剂中,以3%丙二醇促渗作用最好,木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷的渗透速率分别为45.744、49.903、14.898μg/(cm^(2)·h),增渗倍数分别为1.523、1.602、2.636;CZGP对小鼠(幼鼠)醋酸扭体具有镇痛作用,且镇痛率高于XJT。结论CZGP具有良好的体外经皮渗透性及镇痛作用,为中药复方口服制剂改造为经皮给药制剂提供思路。

基于质量源于设计理念的复方蜘蛛香醇提工艺研究

目的:运用质量源于设计(quality by design,QbD)理念,优化复方蜘蛛香醇提工艺。方法:以复方蜘蛛香为模型药,木香烃内酯(costunolide,CL)、去氢木香内酯(dehydrocostus lactone,DCL)、橙皮苷(hesperidin,HSP)和出膏率为关键质量属性(critical quality attributes,CQAs),采用危害及可操作性分析法对复方蜘蛛香醇提工艺进行风险评估,采用单因素实验设计确定各因素的高低水平,Plackett-Burman实验设计筛选出关键工艺参数(critical process parameters,CPPs),采用Box-Behnken优化醇提工艺,建立多个指标重叠的设计空间,选取较优操作空间进行工艺验证。结果:筛选的关键工艺参数为料液比、乙醇体积分数和提取次数,为方便实验操作,最终选择的提取工艺为:料液比1∶10,乙醇体积分数60%,提取次数2次,在该工艺条件下,复方蜘蛛香提取液能够达到木香烃内酯≥18.0 mg·g^(-1),去氢木香内酯≥15.0 mg·g^(-1),橙皮苷≥2.5 mg·g^(-1),出膏率≥30.0%。结论:通过QbD理念开发的复方蜘蛛香醇提工艺有助于提高产品质量,为其制剂的工艺开发及质量控制提供实验基础。

复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱的建立及多组分定量分析

目的建立复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱及其10个指标成分的定量分析方法,为其质量控制及评价提供参考。方法提取15批复方蜘蛛香挥发油,采用GC-MS技术建立指纹图谱,使用中南大学“中药指纹图谱计算软件”计算相似度,并对共有峰进行归属。采用聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)对指纹图谱进行评价。利用GC法测定挥发油中10个指标成分的含量。结果15批挥发油得量在4.4~6.8 mL;GC-MS指纹图谱有31个共有峰,其中峰1、11归属于蜘蛛香挥发油;峰31归属于木香挥发油;峰6~9、15、21归属于草果挥发油;峰2~5、10、18为蜘蛛香、草果挥发油共有;峰23、25、27、29、30为蜘蛛香、木香挥发油共有;峰12~14、16、17、19、20、22、24、26、28为蜘蛛香、木香、草果3者挥发油共有;15批样品指纹图谱与中位数法生成的指纹图谱共有模式的相似度在0.798~0.998;聚类分析可以将样品分为2类,其中S1、S2、S5、S6、S11、S14、S15为第1类;S3、S4、S7~S10、S12、S13为第2类;PCA及OPLS-DA可将样品分为4类,其中S1、S2、S5、S6为第1类,S3、S4、S7~S9为第2类,S10、S12、S13为第3类,S11、S14、S15为第4类。异戊酸(峰1)、α-蒎烯(峰2)、β-蒎烯(峰3)、1,8-桉叶素(峰7)、α-松油醇(峰13)、香叶醇(峰15)、β-榄香烯(峰23)、β-丁香烯(峰25)、反式-橙花叔醇(峰28)、石竹素(峰29)的质量浓度在19.49~43.24、2.90~13.15、7.47~17.19、182.94~248.19、12.83~20.48、21.82~57.63、1.54~2.83、3.07~6.50、12.06~19.02、2.94~5.43 mg/mL。结论建立的复方蜘蛛香挥发油指纹图谱及定量分析方法分离度好、准确性高,可为复方蜘蛛香挥发油质量控制及评价提供参考。

蜘蛛香抗焦虑复方的抗焦虑作用及其机制

目的研究蜘蛛香抗焦虑复方的药效及其与γ-氨基丁酸受体(GABA-R)作用的关系。方法采用高架十字迷宫、明暗箱、自主活动、尼可刹米致小鼠惊厥试验,观察了蜘蛛香抗焦虑复方低、中、高剂量(1.2、2.4、4.8 g/kg)ig给药10 d对小鼠行为的影响;另设对照组(给予生理盐水)和地西泮(2 mg/kg)阳性对照组。结果高架十字迷宫和明暗箱试验结果显示,蜘蛛香抗焦虑复方中、高剂量具显著的抗焦虑作用(P<0.05),并呈量效关系,这种抗焦虑作用可被氟马西尼所拮抗,小鼠自主活动试验结果显示,蜘蛛香抗焦虑复方各剂量对小鼠自主活动的次数无显著影响(P>0.05),提示无镇静作用,蜘蛛香抗焦虑复方各剂量对尼可刹米致小鼠惊厥的潜伏期及死亡率无显著影响(P>0.05)。结论蜘蛛香抗焦虑复方有显著抗焦虑作用,并可能是通过GABA-R发挥抗焦虑作用的,且该复方无镇静及抗惊厥作用。