复方鳖甲软肝方对肺纤维化大鼠细胞外基质的影响

目的 :研究复方鳖甲软肝方对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞外基质的影响。方法 :SD雄性大鼠 54只 ,分为假手术对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝方高剂量组、中、低剂量组、强的松组 ,每组 9只。除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素 ,假手术对照组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水。 2 8d后给药 ,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组 ,强的松组分别灌服复方鳖甲软肝方 1.4,0 .7,0 .3 5g·kg- 1及强的松 0 .56mg·kg- 1,假手术对照组、模型对照组分别灌服等体积的生理盐水。观察 80d时大鼠肺组织羟脯氨酸和血清中Ⅲ (Ⅲ C) ,Ⅳ (Ⅳ C)胶原及层粘连蛋白 (LN)和透明质酸 (HA)的含量 ,同时取肺组织行HE ,Masson染色。结果 :复方鳖甲软肝方可降低肺纤维化大鼠Ⅰ ,Ⅲ胶原 ,层粘连蛋白及透明质酸含量 ,减轻肺组织纤维性增生。结论

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤作用的实验研究

目的研究复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤的作用和机制。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、强的松(0.56 m g/kg)组、复方鳖甲软肝方高、中、低剂量(1.4、0.7、0.35 g/kg)组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组大鼠气管滴注盐酸博莱霉素制备大鼠肺纤维化模型。造模后第2天,各组分别ig给药,连续给药4周。测定各组大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)、诱导型一氧化氮合酶(iNO S)活性和丙二醛(M DA)水平;采用W estern b lotting实验研究肺组织蛋白中核因子κB(NF-κB)和核因子κB抑制剂(IκBα)的表达。结果复方鳖甲软肝方能提高肺纤维化大鼠体内的G SP-Px和SOD活性,降低M DA水平和iNO S活性,减弱肺纤维化大鼠肺组织核蛋白中NF-κB表达,增强胞浆蛋白中IκBα的表达。结论复方鳖甲软肝方能调节肺纤维化大鼠体内自由基水平,减轻自由基对肺组织结构的氧化损伤,调节肺组织蛋白IκBα的表达,进而抑制NF-κB表达,是该方防治肺纤维化的作用机制。

复方鳖甲软肝方药物血清干预TGF-β_1对HSC增殖的影响

目的 观察复方鳖甲软肝方 (FFBJRGF)药物血清干预TGF β1对离体肝星形细胞 (HSC)增殖的影响作用。方法 采用改进的中药血清药理学方法 ,在HSC的培养体系中添加外源性TGF β1,运用MTT法检测TGF β1对HSC增殖的影响 ,观测不同剂量复方鳖甲软肝方药物血清的干预TGF β1对离体肝星形细胞 (HSC)增殖的作用。结果 添加外源性TGF β1可减低HSC的增殖能力 ,但显效时间较长(72h) ;高、中、低剂量FFBJRGF药物血清组和IFN -γ血清组与正常对照HSC培养组比较 ,均明显HSC的增殖活性 (各组OD值比较 ,分别P <0 0 5 ) ,且显效时间短于添加外源性TGF β1组(2 4h)。结论 FFBJRGF药物血清、IFN γ血清和TGF β1均具有减弱HSC增殖的作用 ,且FFBJRGF药物血清可在TGF

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)转型的影响,以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法:将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48h后,免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)表达,经图像分析系统定量分析。结果:培养24,48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h:高、中、低剂量分别为110.95±45.21,243.82±62.97,417.46±126.72;48h分别为:333.71±57.90,345.08±51.85,675.35±202.20)与模型组(24h:778.93±190.26;48h:1032.69±106.64)比较,差异有显著性意义(P<0.05);模型组、高、中剂量药物血清组与正常组比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:高、中剂量复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-SMA表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。

复方鳖甲软肝方对肝星状细胞细胞周期的影响

目的 探讨复方鳖甲软肝方 (FFBJRGF)药物血清对离体肝星状细胞 (HSC)细胞周期及凋亡的干预作用。方法 运用流式细胞仪技术检测外源性TGF β1对HSC细胞周期及凋亡率的影响 ,进而观察FFBJRGF高、中、低剂量药物血清对HSC细胞周期及凋亡的干预作用 ,并以IFN γ药物血清及正常对照大鼠血清组作对照。结果 FFBJRGF各剂量药物血清组、TGF β1及IFN γ血清均不同程度增加G0 、G1期HSC细胞数量 ,其中FFBJRGF各剂量药物血清组作用尤为明显 ;与正常对照组比较 ,FFBJRGF各剂量药物血清组对HSCG2 、M、S期有一定的干预作用 ;TGF β1组能显著上调HSC凋亡率 ,但FFBJRGF各剂量药物血清组及IFN γ血清组作用不明显。结论 FFB JRGF药物血清具有显著抑制HSC细胞增殖周期作用 ,可能为其抗肝纤维化的机制之一 。

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)结蛋白、突触素表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48,72h后,免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达,并经图像分析系统作定量分析。结果培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78.93±18.56,396.29±78.56;58.95±5.21,138.92±20.21;63.83±12.97,190.87±52.97;75.46±26.72,284.54±66.72)与模型组(119.69±23.84,528.79±26.84)比较,差异有显著性意义(P<0.05);培养48,72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较,差异也有显著性意义(P<0.05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化细胞凋亡的实验研究

目的通过观察细胞凋亡,探讨复方鳖甲软肝方防治肺纤维化的机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只,随机分为假手术组,模型组,阳性药物对照组,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。博莱霉素常规造模的同时给药,假手术组和模型组每天灌胃生理盐水,其余4组灌药进行防治。各组分别于7,14,28 d随机抽取10只大鼠,8只制成光镜标本,2只麻醉后快速开胸取肺组织,进行电镜标本的制作。免疫组化载玻片用DEPC处理后备用。结果Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞以及成纤维细胞均有凋亡。bax在肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞,肺泡巨嗜细胞胞质和胞膜均表达。假手术组和高、中剂量组呈弱阳性表达,模型组强阳性表达。Bc l-2在核膜和线粒体表达,模型组强阳性表达,药物组弱表达。结论复方鳖甲软肝方通过调节细胞凋亡,上调Bax活性,抑制Bc l-2的活性,抑制Ⅱ型上皮细胞凋亡,减少纤维积聚和纤维化形成,对肺纤维化起到防治作用。

复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠肝星形细胞内TβR Ⅰ和Smad_3蛋白表达的影响实验研究

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠肝星形细胞(HSCs)内TβRⅠ和Smad3蛋白表达的影响,从信号转导上游受体水平和受体后信号转导水平探讨药物血清抗肝纤维化的作用机制。方法运用免疫细胞化学和图像分析技术,在离体对不同时相,不同浓度复方鳖甲软肝方药物血清干预状态下,HSC内TβRⅠ和Smad3蛋白的表达进行半定量分析。结果复方鳖甲软肝方药物血清可明显下调HSC表达TβRⅠ及抑制HSC表达Smad3蛋白。结论复方鳖甲软肝方药物血清通过下调TβRⅠ的表达,进而干预Smad3介导的TGF-β1在HSC内的信号转导,最终抑制胶原蛋白、纤黏连蛋白的合成,从而达到抑制HSC活化的抗肝纤维化作用,这可能是复方鳖甲软肝方药物血清抗肝纤维化作用机制之一。

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响,酶标仪波长为450nm。结果:培养24h,各组HSC增殖比较,差异无显著性意义(P>0.05);培养48,72h,高、中、低剂量药物组HSCA值(0.47±0.02,0.55±0.07;0.46±0.02,0.58±0.08;0.51±0.03,0.69±0.07)与模型组(0.66±0.05和0.96±0.05)比较,差异有显著性意义(P<0.05);高、中剂量组药物组与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48,72h后均能降低或抑制HSC的增殖,尤以高、中剂量作用明显。

复方鳖甲软肝方对阿霉素肾病大鼠肾组织内皮素-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨复方鳖甲软肝方对阿霉素肾病大鼠肾组织的保护作用机制。方法:将45只大鼠随机分为3组,正常对照组(9只)、假手术组(9只)及手术组(27只)。切除大鼠右侧肾脏并腹腔注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型。于术后1周,手术组按体重再次随机均分为模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方组。从开始注射阿霉素后,苯那普利组(25 m g/kg)和复方鳖甲软肝方组(14 g/kg)开始灌胃治疗,假手术组给予等量生理盐水灌胃。观察并记录实验2、4、6、8和10周大鼠体重、24 h尿蛋白;于10周末处死大鼠,取大鼠颈动脉血检测尿素氮、血肌酐、胆固醇、甘油三酯、总蛋白和白蛋白;观察肾组织病理形态学改变,采用免疫组化及原位杂交方法分析肾组织ET 1蛋白及其mRNA表达。结果:除正常对照组和假手术组外,其余3组大鼠均有不同程度的摄食减少、精神不振、活动迟缓、尿量减少、体重减轻、24 h尿蛋白定量增高、血生化指标异常等,而苯那普利组和复方鳖甲软肝方组均有不同程度改善,且复方鳖甲软肝方组优于苯那普利组,但两者差异无显著性。模型组大鼠肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞以及肾小球脏层上皮细胞胞浆中ET 1蛋白及mRNA表达呈强阳性;复方鳖甲软肝方组与苯那普利组大鼠肾组织ET 1蛋白及mRNA表达均较模型组显著减少,但两者比较差异无显著性。结论:复方鳖甲软肝方能够减少阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞以及肾小球脏层上皮细胞胞浆中ET 1蛋白及其mRNA表达,降低肾组织ET 1含量,从而起到保护肾功能,延缓肾功能衰竭的作用。

复方鳖甲软肝方对单侧输尿管结扎大鼠肾组织MMP-9/TIMP-1表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶组织抑制剂(1MMP-9/TIMP-1)在肾间质纤维化中的表达情况及其复方鳖甲软肝方的调节作用。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)动物模型。将大鼠随机分为7组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。术后4周处死大鼠,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织MMP-9/TIMP-1的表达。结果模型组肾组织表现为纤维化病理改变,正常组及假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度MMP-9/TIMP-1表达;模型组MMP-9表达明显减少而TIMP-1则呈强阳性表达。复方鳖甲软肝方小、中、大剂量组与模型组比MMP-9强阳性表达(P!0.05),TIMP-1的表达较模型组明显减少(P!0.05)。结论复方鳖甲软肝方可通过对肾组织MMP-9/TIMP-1平衡的调节而发挥抗纤维化的作用。

复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠心室重构及左室功能的影响

目的 :观察复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠 (SHR)心室重构及左室功能各项指标的影响。方法 :12周龄SHR 5 0只随机分为 5组 ,即空白对照组 (SHR- C组 )、依那普利组 (SHR- Y组 )及复方鳖甲小剂量组 (SHR- B1组 )、中剂量组 (SHR- B2组 )、大剂量组 (SHR- B3组 ) ,每组 10只。并以正常 SD大鼠 10只作对照 ,称为 SD组。治疗 10周后测定各组大鼠收缩压 (SBP)、左室舒张末压 (L VEDP)、左室压力微分值最大 (± dp/ dtmax)、心脏质量指数 (HMI)、左室质量指数 (L VMI)以及胶原蛋白含量等指标。结果 :治疗 10周后 ,SHR- Y组的 SBP、HMI、 L VMI较对照组显著降低 (P<0 .0 1) ,而 SHR- B各组无显著改变 ;SHR- Y组 ,SHR- B2组及 SHR- B3组的 L VEDP较对照组显著降低(P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。SHR- Y组的 +dp/ dtmax较对照组显著增大 (P<0 .0 5 ) ,SHR- B各组无显著改变。 SHR- Y组及 SHR- B各组的 - dp/ dtmax较对照组显著增大 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。 SHR- Y组、SHR- B2组及 SHR- B3组胶原蛋白含量较对照组均显著降低 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。结论 :复方鳖甲软肝方无明显降压功能 ,但可通过抑制心肌纤维化 ,有效影响 SHR的心室重构 ,改善左室功能。

复方鳖甲软肝方防治特发性肺间质纤维化的MMPs表达

目的研究复方鳖甲软肝方对特发性肺间质纤维化防治的MMPs表达,探讨其机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只。随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组及复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。各组分别于7,14,28d随机抽取10只大鼠,麻醉后取肺组织,MMP-2采用原位杂交及RT-PCR的方法测定。MMP-1和MMP-9采用免疫组化的方法。结果复方鳖甲软肝方组在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调,在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调,说明两者均有抑制纤维合成的作用。MMP-2的原位杂交和RT-PCR结果一致,在模型组过度表达,在药物组表达被抑制,表明药物对IPF的形成有抑制作用,以中、小剂量组为好。结论复方鳖甲软肝方在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调,在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调,达到抗纤维化作用;复方鳖甲软肝方通过抑制MMP-2表达发挥抗纤维化的作用。

复方鳖甲软肝方对家兔心室肌细胞钙通道的影响

目的:研究复方鳖甲软肝方对家兔单个心室肌细胞L-型钙通道(ICa-L)的电生理作用。方法:采用改良的中药血清药理学方法及全细胞膜片钳技术观察不同浓度的复方鳖甲软肝方药物血清干预心肌细胞后对心肌细胞ICa-L电流的影响。结果:含0.7 g/L和1.4 g/L的复方鳖甲软肝方药物血清使兔心室肌细胞ICa-L峰值电流密度(ICa-L m ax)由(6.90±0.52)pA/pF分别下降至(3.40±0.28)pA/pF和(2.30±0.18)pA/pF(P<0.01)。复方鳖甲软肝方使ICa-L的电流-电压曲线上移,但不改变其激活电位、电位峰值和反转电位,同时还抑制ICa-L的激活过程。结论:复方鳖甲软肝方对ICa-L具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其抗心肌纤维化的部分机制。

复方鳖甲软肝方防治大鼠肾间质纤维化作用机理的实验研究

目的:采用单侧输尿管结扎(UUO)肾间质纤维化模型,探讨复方鳖甲软肝方对肾间质纤维化大鼠血生化及肾组织病理形态学的影响。方法:将大鼠随机分为7组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。UUO术后4周处死大鼠,并应用HE、六胺银染色及Mallory染色,观察肾组织病理学改变。结果:模型组肾小管结构严重破坏,管腔塌陷,上皮细胞大量坏死;有些部位肾小管和间质的结构基本消失,间质中出现弥漫性细胞增殖,并广泛间质纤维化。复片鳖甲软肝方组和苯那普利组纤维化病理改变明显减轻,其中以复片鳖甲软肝方中剂量组作用明显。结论:复方鳖甲软肝方可减少炎细胞的浸润、减轻肾小管的损伤,进而延缓肾间质纤维化的病程进展。

复方鳖甲软肝方对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响

目的:探讨复方鳖甲软肝方对LPS诱导的人近端肾小管上皮细胞增殖的影响。方法:由 UUO大鼠制备含药血清作为药源加入离体反应系统,MTT比色法检测各组血清对LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响。结果:于24h、48h及60h,阳性药物组及复方鳖甲软肝方各组OD值均低于模型组,而阳性药物组OD值与复方鳖甲软肝方各组相比无显著差异。结论:复方鳖甲软肝方可抑制 LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖,从而延缓肾间质纤维化进程。

复方鳖甲软肝方防治阿霉素肾病模型大鼠作用机制的实验研究

目的:探讨复方鳖甲软肝方防治阿霉素肾病模型大鼠肾小球硬化的作用机制。方法:将45只Wistar雄性大鼠,适应性喂养1周,测尿蛋白阴性后,随机分为正常组、假手术组、模型组、苯钠普利组、复方鳖甲软肝方组,每周测大鼠体重,每2周1次收集大鼠24h尿量,测24h尿蛋白定量,10周后处死大鼠,分离血清观察血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胆固醇(Cho)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)和清蛋白(Alb),应用HE、六胺银染色及Mallory染色,观察肾组织病理学改变,数据用SPSS11.0进行统计学处理。结果:复方鳖甲软肝方能够减轻阿霉素肾病模型大鼠肾组织病理损害,增加阿霉素肾病模型大鼠体重,减少尿蛋白排泄,提高血TP和Alb水平,降低BUN和SCr,改善肾功能。结论:复方鳖甲软肝方能减轻阿霉素肾病模型大鼠的肾脏病理损害,对阿霉素肾病模型大鼠肾小球硬化有一定的保护作用。

复方鳖甲软肝方对LPS刺激肾小管上皮细胞MMP9／TIMP1表达的影响

目的:研究复方鳖甲软肝方对肾小管上皮细胞LPS刺激不同时段表达MMP9、TIMP1的影响。方法:制备含药血清,将5％含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激 24 h及48 h采用免疫组化及Western blot方法检测各组MMP9、TIMP1的表达。结果:LPS刺激肾小管上皮细胞12 h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24 h逐渐增强,48 h达到高峰上。复方鳖甲软肝方降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达。结论:复方鳖甲软肝方含药血清能抑制细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解,其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一。