复方龙脉宁滴丸水提液有效部位的纯化工艺研究

目的为复方龙脉宁滴丸制备过程中杂质的去除选择一种科学合理的方法,增加滴丸载药量,从而减少服药量。方法采用HPLC法测定葛根素含量,对AB-8大孔吸附树脂纯化复方龙脉宁滴丸水提药液有效部位进行实验研究。结果通过动态洗脱、树脂床径高比、洗脱液的pH值、洗脱条件的实验研究,得出树脂与药材比为1∶1,树脂床径高比为1∶5,药液以2BV/h流速上样,用4BV、pH 7的90%乙醇以3 BV/h的流速进行洗脱,具有较好洗脱效果。结论AB-8大孔吸附树脂能够较好除去水提取药液中的杂质,对该复方水提药液中有效部位的纯化具有良好的作用。

复方龙脉宁提取液对小鼠急性心肌缺血缺氧损伤的保护作用

目的研究复方龙脉宁水提液和醇提液对小鼠耐缺氧以及对小鼠急性心肌缺血损伤的保护作用。方法取昆明种小鼠随机分为9组,每组8只,分别为正常组,模型组,地奥心血康组(0.166 g·kg-1),复方龙脉宁水提液高、中、低剂量组(24,16,8 g·kg-1),复方龙脉宁醇提液高、中、低剂量组(24,16,8 g·kg-1),连续灌胃给药7 d,每天1次,正常组与模型组给予等量生理盐水。除正常组外,其余各组于末次灌胃30 min后,皮下注射异丙肾上腺素(ISO,20 mg·kg-1)诱发小鼠心肌缺氧实验以及建立小鼠急性心肌缺血模型,观察复方龙脉宁水提液和醇提液对小鼠密闭缺氧存活时间的影响,以及对心脏质量指数、乳酸脱氢酶(LDH)活力、肌酸激酶(CK)活力、丙二醛(MDA)含量以及心肌组织病理形态学的影响。结果复方龙脉宁水提液和醇提液的高、中剂量组小鼠存活时间均不同程度高于模型组(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,复方龙脉宁水提液和醇提液中剂量组可降低血清LDH、CK活力(P<0.05,P<0.01),减少MDA含量(P<0.05),复方龙脉宁醇提液的高剂量组可降低小鼠缺血心肌的心脏质量指数(P<0.05),改善缺血性心肌肥厚;复方龙脉宁两种提取液的高、中剂量组均对心肌组织病理损伤有不同程度的改善作用。结论复方龙脉宁不同提取液的适宜剂量能提高小鼠耐缺氧能力以及对小鼠急性心肌缺血损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与减少心肌耗氧、保护心肌细胞膜、抗氧自由基等有关。

星点设计-效应面法优化复方龙脉宁滴丸提取工艺

目的优化复方龙脉宁滴丸提取工艺。方法采用乙醇回流提取,以葛根素、薯蓣皂苷和总生物碱含量为评价指标,采用星点设计-效应面法对醇倍数、乙醇浓度、提取时间和提取次数等影响因素进行优选。结果优化的最佳工艺条件为以8倍量70%乙醇,提取3次,每次2 h。结论优化的工艺可使各项指标均达到比较高的水平,工艺参数合理,重复性好,为进一步研究奠定了良好的基础。

复方龙脉宁滴丸质量标准研究

目的:建立复方龙脉宁滴丸的质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别复方龙脉宁滴丸中葛根、穿山龙、川芎、蜂胶药材;采用高效液相色谱法对葛根素进行含量测定,以甲醇-水(25∶75)为流动相;检测波长:250 nm,流速:1 mL/min。结果:葛根、穿山龙、蜂胶有良好的鉴别特征,阴性未见干扰;各检查指标均符合规定;葛根素在0.16μg～0.80μg范围内其色谱峰面积呈良好的线性关系,r为1.000 0,平均加样回收率为99.33%。结论:本鉴别和含量测定方法简单、快速、准确,可作为本品定性和定量的检测方法。

复方龙脉宁HPLC指纹图谱的研究

目的:通过L9(34)的正交试验设计对复方龙脉宁处方中各味药材提取物进行不同配比,用高效液相色谱法建立复方龙脉宁的指纹图谱分析方法,并对各配比组进行指纹图谱分析比较。方法:以葛根素,阿魏酸,薯蓣皂苷为对照品,色谱柱:Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱,柱温:25℃,检测波长:203 nm,流速:1.0 m L·min-1的色谱条件,标示出复方龙脉宁的24个共有峰。结果:采用高效液相色谱法,建立了复方龙脉宁的指纹图谱分析方法,标示出复方龙脉宁特征色谱峰,对其色谱峰进行归属,其中6号峰为葛根素峰,12号峰为阿魏酸峰,24号峰为薯蓣皂苷峰,共有峰4、6、7、8、9、10、11、14、15、20、22来源于葛根,共有峰5、12来源于川芎,共有峰2、24来源于穿山龙,共有峰1、3、12、13、21、22、23来源于蜂胶。结论:所建立的复方龙脉宁的指纹图谱分析方法,具有较好的分离效果和良好的精密度,为复方龙脉宁的质量控制提供了科学依据。

复方龙脉宁滴丸纯化工艺实验研究

目的通过实验研究进一步完善复方龙脉宁滴丸纯化工艺参数,为该制剂实现工业化生产奠定基础。方法以葛根素含量为指标,采用薄层色谱法和高效液相色谱法测定其含量,对AB-8大孔吸附树脂纯化该制剂处方进行纯化实验研究。结果采用静态吸附-动态洗脱的纯化方法较为合理,需3BV的70%乙醇即可洗脱完全。结论该纯化工艺参数合理,方便可行,重复性好。AB-8型大孔吸附树脂具有较好的纯化效果,可有效除杂,从而降低服用量,同时保证药物制剂疗效。

复方龙脉宁不同配比药效学实验研究

目的:通过L9(34)的正交试验设计对复方龙脉宁处方中各味药材提取物进行不同配比,探讨复方龙脉宁对大鼠心肌缺血模型心电图的影响;对寒凝血瘀大鼠模型血液流变学指标的影响。方法:采用尾静脉注射垂体后叶素造大鼠急性心肌缺血模型,用心电图机记录大鼠心电图,比较各组大鼠给垂体后叶素前后心电图T波高度变化情况;另建立寒凝血瘀大鼠模型,肝素抗凝测血液流变学指标。结果:复方龙脉宁配比组3能明显抑制垂体后叶素致心肌缺血大鼠心电图T波高度变化以及显著降低寒凝血瘀大鼠的全血黏度、血浆黏度、全血还原黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞变形指数。结论:复方龙脉宁配比组3对急性心肌缺血大鼠可能具有预防性及治疗性保护作用;对大鼠寒凝血瘀模型能明显改善血液流变学指标。

复方龙脉宁不同提取液对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用

采用不同浓度H_2O_2处理H9c2心肌细胞,MTT法检测复方龙脉宁(Compound Longmaining,CLMN)水提液和醇提液含药血清(5%、10%、20%组)对氧化损伤的H9c2心肌细胞活性的影响,研究CLMN提取液对H_2O_2导致H9c2心肌细胞氧化损伤的修复作用。结果显示,当H_2O_2浓度为100μM,作用时间24 h,可建立稳定的H9c2心肌细胞氧化损伤模型;与对照组相比,经H_2O_2处理后的细胞活性明显下降,SOD活性显著降低,而LDH活性、MDA含量则显著增加,而用CLMN水提液和醇提液含药血清(10%、20%组)处理氧化损伤的H9c2心肌细胞,可显著提高细胞存活率及SOD活性,降低LDH活性和MDA含量。说明CLMN水提液和醇提液均对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化损伤具有很好的保护作用。

高效液相色谱法同时测定复方龙脉宁中7种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定复方龙脉宁中葛根素、大豆苷、阿魏酸、芦丁、洋川芎内酯Ⅰ、大豆苷元、高良姜素的含量。方法采用Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长270 nm。结果7种成分在各自浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.9990,精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率在95.3%~104.0%。结论HPLC法快速、准确、简便、重复性较好,可作为复方龙脉宁的质量控制方法。

复方龙脉宁磷脂复合物制备工艺及初步吸收评价

目的制备复方龙脉宁磷脂复合物并进行口服十二指肠体外吸收评价。方法以复合率为评价指标,结合前期试验结果,采用正交法优选复方龙脉宁磷脂复合物的影响因素,包括药物浓度、复合时间、复合温度和药脂比;分别制备复方龙脉宁提取物与磷脂复合物,对二者采取外翻肠囊法测定改性前后在十二指肠段的吸收情况。结果确定了以乙醇作为反应溶剂,提取物与大豆卵磷脂比例为1∶3,提取物的投料浓度为80 mg/mL,在40℃条件下复合12 h为最佳复合条件;采用磷脂复合物技术制备的复方龙脉宁磷脂复合物肠吸收较提取物显著增加。结论磷脂复合物技术对于复方龙脉宁口服生物利用度的提高具有一定的适用性。

复方龙脉宁对寒凝血瘀大鼠的实验研究

目的:通过对复方龙脉宁方中各位药材提取物进行不同配比,探讨复方龙脉宁对寒凝血瘀大鼠体外血栓形成及凝血时间的影响。方法:采用正交设计对大鼠灌胃给药,皮下注射肾上腺素加冰水浴法建立寒凝血瘀大鼠模型,用玻片法测凝血时间,用体外血栓仪测血栓长度、血栓湿重、血栓干重。结果:复方龙脉宁各配比组均可显著延长模型大鼠的凝血时间,减少体外血栓长度、血栓湿重、血栓干重,从而减少体外血栓的形成;复方龙脉宁配比组8能明显抑制寒凝血瘀大鼠体外血栓形成及凝血时间,效果优于其他配比组。结论:复方龙脉宁配比组8具有明显的抗血栓作用。

复方龙脉宁滴丸抗血栓形成及改善微循环的实验研究

目的通过对凝血酶原时间及小鼠耳廓微循环两个药理指标考察,观察复方龙脉宁滴丸的药效学作用。方法选取SD大鼠,随机分为空白对照组,模型对照组,阳性对照组,复方龙脉宁滴丸大、中、小剂量组,建立血瘀模型。另取ICR小鼠,随机分为空白对照组、阳性对照组、复方龙脉宁滴丸大、中、小剂量组。观察复方龙脉宁滴丸对血瘀证模型大鼠体外血栓以及对小鼠耳廓微循环的改善作用。结果该药物对血瘀模型大鼠凝血时间有明显改善作用,毛细血管开放数量增多,血流速度加快,血管输入及输出口径增大。结论复方龙脉宁滴丸有扩张血管和改善微循环的作用。

血栓抽吸联合复方龙脉宁汤治疗急性心肌梗死效果及机制

目的:探讨与研究血栓抽吸联合复方龙脉宁汤治疗急性心肌梗死效果及机制。方法:选择诊治的急性心肌梗死患者122例,按照随机双盲法将其分为联合组与对照组各61例。所有患者都给予经皮冠状动脉介入(PCI)治疗,对照组给予血栓抽吸治疗,联合组在对照组治疗的基础上给予复方龙脉宁汤治疗,记录与随访患者的预后。结果:两组治疗后的左室舒张末期容积(LVEDV)与左室收缩末期容积(LVESV)低于治疗前,且联合组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后联合组的病变血管血流分级好于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后的血清C反应蛋白(CRP)与脑钠肽(BNP)水平低于治疗前,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后随访1年,联合组治疗期间的心源性死亡、再发心肌梗死、严重心律失常、靶血管重建等主要心脏不良事件(MACE)发生率为3.3%,低于对照组的19.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血栓抽吸联合复方龙脉宁汤治疗急性心肌梗死患者能有效抑制CRP与BNP的表达,促进恢复病变血管血流与心功能,从而降低MACE的发生率。

正交设计优选复方龙脉宁抗血栓作用的最佳配比

目的通过对复方龙脉宁各有效组分组成进行不同配比,探讨复方龙脉宁对寒凝血瘀大鼠体外血栓形成的影响。方法采用皮下注射肾上腺素加冰水浴法建立寒凝血瘀大鼠模型,用正交试验设计筛选各有效组分的配比组,对大鼠颈总动脉取血,用体外血栓仪测血栓长度、血栓干重。结果优选组合为A3B1C1D3能明显抑制寒凝血瘀大鼠体外血栓形成。结论正交试验设计与药效学实验相结合,可作为有效的研究复方药最佳组合与配比的方法。

复方龙脉宁滴丸中葛根素和薯蓣皂苷纯化工艺研究

目的:筛选复方龙脉宁滴丸中葛根素和薯蓣皂苷的纯化工艺。方法:采用HPLC分析方法,以葛根素和薯蓣皂苷含量为评价指标,分别对树脂类型、洗脱乙醇浓度、上样量、洗脱速度和洗脱体积影响因素进行优选。结果:优化的最佳工艺条件为用AB-8大孔树脂进行纯化,上样量与树脂比为1mL:1g,以0.5BV/h的速度80%乙醇洗脱,4BV可洗脱完全,葛根素回收率为96.62%,薯蓣皂苷回收率为97.79%。结论:此纯化工艺参数合理,重复性好,为复方龙脉宁滴丸进一步研究奠定了良好的基础。

复方龙脉宁磷脂复合物的基本性质及初步吸收评价

目的:对复方龙脉宁磷脂复合物进行表征,并对其进行离体肠吸收评价。方法:对复方龙脉宁提取物、提取物与磷脂的物理混合物和磷脂复合物的表观溶解性、表观油水分配系数进行考察,采用UV技术对复合物结构进行分析,采用外翻肠囊法制备离体小肠吸收模型对提取物、物理混合物及磷脂复合物的肠吸收作用进行研究。结果:形成复合物后对复方龙脉宁提取物的溶解性改善明显,油水分配系数有所提升,透膜累积渗透量显著增强。结论:形成复合物过程中没有发生化学变化,但复合物并非是提取物与磷脂的物理混合,复合后复方龙脉宁的理化性质和生物学特性有明显改善。

基于网络药理学复方龙脉宁方治疗脑卒中的分子机制研究

脑卒中作为一种常见的疾病,其临床表现复杂多样。复方龙脉宁方治疗脑卒中有着特别明显的疗效,但其治疗脑卒中的分子机制尚不明确。本研究旨在运用网络药理学方法,研究复方龙脉宁方治疗脑卒中的活性成分、作用靶点和分子通路,揭示复方龙脉宁方治疗缺血性脑卒中的分子机制。通过查询TCMSP数据库获取复方龙脉宁方治疗脑卒中的潜在活性成分,利用CNKI数据库来进行文献的验证,通过PharmMapper、UniProt数据库来进行靶点的预测和筛选,利用收集结果通过TTD数据库来进行靶蛋白群的收集,运用Cytoscape软件分别构建'成分-靶点'网络图、'成分-靶点-疾病'网络图、'靶蛋白相互作用'网络图。利用EAGLE算法进行聚类分析, KEGG数据库进行通路分析、SYBYL软件进行分子对接。最终收集得到与脑卒中相关的39个潜在活性成分与17个潜在有效靶点,其代表性活性成分分别是川芎嗪、薯蓣皂苷、葛根异黄酮类等,与之相关的靶点分别是MMP9、NOS3、NOS2、KDR、ALB、IL2、TGFB2、CPB等。研究发现碳代谢和HIF-1信号通路为复方龙脉宁方治疗脑卒中的主要分子通路。阐明复方龙脉宁方治疗缺血性脑卒中可能是通过减少炎症反应、增强血管通透性、抑制脑缺血-再灌注损伤的作用途径,为临床用药提供理论依据。

单向灌流法评价复方龙脉宁汤剂配伍对葛根素肠吸收的影响

建立大鼠在体单向肠灌流模型,采用高效液相色谱法测定灌流液中葛根素的浓度,考察葛根、葛根-穿山龙、葛根-川芎和复方龙脉宁4种汤剂在十二指肠、空肠、回肠和结肠中葛根素的吸收情况。结果显示在十二指肠和回肠中,葛根-穿山龙组与复方龙脉宁组葛根素的吸收参数无显著性差异,但均显著高于葛根和葛根-川芎组的吸收(P<0.05);在空肠和结肠中,3个配伍组中葛根素的吸收参数与葛根单药组相比,存在显著性差异(P<0.05),而复方龙脉宁组中葛根素的吸收参数与葛根-穿山龙和葛根-川芎组相比也存在显著性差异(P<0.05)。表明在大鼠全肠段中,复方龙脉宁汤剂对葛根素的吸收有明显的促进作用。在十二指肠和回肠中,复方中穿山龙对葛根素的吸收有明显的促进作用;在空肠和结肠中,穿山龙和川芎能协同促进葛根素的吸收。

复方龙脉宁对急性心肌梗死模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响

目的:探讨复方龙脉宁汤对盐酸异丙肾上腺素诱导的心肌梗死大鼠模型的保护作用及其对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:取雄性SD大鼠48只,随机分成6组:正常组,模型组,复方丹参滴丸组(0.072 9 g·kg^(-1)),复方龙脉宁低、中、高剂量组(0.36,0.71,1.43 g·kg^(-1))。采用背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素的方法建立急性心肌梗死动物模型。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),一氧化氮(NO)的含量;免疫组化法测定大鼠心肌组织中NF-κB激酶β抑制蛋白(IKKβ),NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌损伤明显,血清中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,NO含量明显升高(P<0.05),心肌组织中IκBα蛋白表达水平明显降低(P<0.05),心肌组织中IKKβ,TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,复方龙脉宁低、中、高剂量组能明显改善大鼠心肌损伤,明显升高IκBα蛋白的表达(P<0.05),明显降低血清中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,NO的活性及心肌组织中IKKβ,TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。结论:复方龙脉宁对心肌梗死的保护作用,可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路相关因子的表达有关。