夏桑菊防治干眼症的网络药理学机制及实验验证

采用网络药理学、分子对接及细胞实验探究了夏桑菊防治干眼症的作用机制。通过超快速高效液相色谱串联三重四极杆飞行时间质谱(UFLC-Triple-TOF-MS/MS)分析夏桑菊的化学成分,借助网络药理学相关数据库与分析平台预测夏桑菊有效成分靶点及检索疾病相关靶点,并利用cytoscape软件及STRING平台构建网络。采用DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析,将关键靶点前4位与其对应活性成分进行分子对接。体外构建干眼症高渗模型验证核心靶点。共鉴定出61种化学成分,筛选得到24种有效成分可能与干眼症相关的315个潜在的靶点蛋白具有相互作用;筛选出夏桑菊作用的关键活性成分迷迭香酸、蒙花苷及绿原酸等和关键靶点为TNF-α、Caspase1、IL-6以及IL-1β;富集结果表明,夏桑菊治疗干眼症靶点主要集中在AGE-RAGE、TNF等多个信号通路。3种有效成分在细胞实验中不仅显著抑制人角膜上皮细胞活性降低,提升高渗下细胞的移行能力,而且有效抑制高渗诱导下人角膜上皮细胞中Caspase1、IL-1β基因的表达及TNF-α蛋白分泌水平。结果表明夏桑菊中的迷迭香酸、蒙花苷及绿原酸3种主要的活性成分,发挥了高渗诱导下对人角膜上皮细胞保护及修复作用,降低了细胞TNF-α蛋白水平及Caspase1、IL-1βmRNA的相对表达。

夏桑菊中药渣发酵菌种筛选及其发酵条件优化

该研究以总生物碱含量为评价指标,从长期堆积的夏桑菊中药渣中分离筛选提高夏桑菊中药渣生料发酵中总生物碱含量的菌株,通过形态学特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,并通过单因素试验及响应面法对菌株发酵条件进行优化。结果表明,共分离纯化出6株可提高夏桑菊中药渣中总生物碱的菌株(L-1~L-6),其中菌株L-1发酵物料中总生物碱含量最高(24.89 mg/g),其被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。最优发酵条件为:物料(夏桑菊中药渣80 g+麦麸10 g+豆饼粉10 g)与水的固水比1∶1(g∶mL),装料量50 g/250 mL,接种量6.7%,发酵时间6 d,初始pH值6.5。在此优化条件下,总生物碱含量达31.15 mg/g。

基于GEO芯片及网络药理学探讨夏桑菊颗粒治疗高血压病的机制研究

[目的]基于基因表达汇编(GEO)芯片、网络药理学及分子对接技术探讨夏桑菊颗粒治疗高血压病的作用机制。[方法]利用TCMSP数据库获取和筛选夏桑菊颗粒的活性成分及成分靶点构建“中药-化合物-靶点”网络;利用GEO芯片技术、GeneCards、OMIM、TTD数据库获取并筛选高血压病的疾病靶点;将成分靶点与疾病靶点取交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,两次处理筛选关键靶点;对交集靶点进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;将关键靶点前4位与其对应活性成分进行分子对接分析。[结果]获得成分靶点194个、疾病靶点2168个、交集靶点126个、关键靶点6个;GO和KEGG富集分析显示夏桑菊颗粒主要与对激素、无机物、氮化合物、脂多糖、细胞外刺激等的反应等生物过程有关,主要富集通路涉及脂质与动脉粥样硬化、晚期糖基化产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、磷酸酰肌醇3-激酶-丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、肿瘤坏死因子(TNF)等信号通路;分子对接结果显示关键靶点与活性成分结合良好。[结论]夏桑菊颗粒可通过多成分-多靶点-多途径发挥作用,为其防治高血压病临床使用提供了一定的参考依据。

夏桑菊浸膏对高渗诱导干眼模型人角膜上皮细胞保护机制研究

目的研究夏桑菊浸膏对高渗诱导下人角膜上皮细胞的保护作用及机制。方法采用NaCl构建高渗模型,通过MTS法检测细胞活力;利用RT-qPCR及酶联免疫吸附测定法检测相关炎症因子IL^(-1)β、IL-6、IL^(-1)8的表达;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针法检测细胞内活性氧水平。结果对比对照组,模型组600 mOsm·L^(-1)中细胞活力明显下降,经夏桑菊浸膏处理后,细胞活力明显上升;在炎症指标中,与对照组相比,模型组450 mOsm·L^(-1)细胞中IL^(-1)β、IL-6及IL^(-1)8的分泌水平与IL^(-1)β表达水平明显升高。夏桑菊浸膏处理细胞后,以上指标较450 mOsm·L^(-1)模型组明显下降;抗氧化研究中,模型组450 mOsm·L^(-1)中的细胞活性氧水平明显上升,夏桑菊浸膏处理后,细胞活性氧水平明显降低。结论夏桑菊浸膏对高渗诱导下的人角膜上皮细胞活力下降起到抑制作用,在高渗环境下具有保护人角膜上皮细胞的能力,保护作用通过抑制炎症因子产生和活性氧水平升高实现。

夏桑菊颗粒体外抗人冠状病毒研究

目的:研究夏桑菊颗粒对人冠状病毒-229E(HCoV-229E)的抑制作用。方法:采用细胞病变(CPE)法检测夏桑菊颗粒对A549细胞的安全剂量,采用CPE法检测夏桑菊颗粒对HCoV-229E引起A549细胞病变的影响,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测夏桑菊颗粒对HCoV-229E于A549细胞中的复制作用;采用噻唑蓝(MTT)法检测夏桑菊颗粒对Huh-7细胞的安全剂量;采用RT-PCR法检测夏桑菊颗粒对HCoV-229E感染引起Huh-7细胞炎症介质表达的影响。结果:夏桑菊颗粒对于HCoV-229E感染A549细胞引起CPE的半数抑制浓度为23.78 mg生药/mL,选择指数为2.0,夏桑菊颗粒能够剂量依赖性地抑制A549细胞内HCoV-229E病毒载量,夏桑菊颗粒可以抑制HCoV-229E诱导Huh7细胞内炎症介质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的mRNA过度表达。结论:夏桑菊颗粒具有明显的抗HCoV-229E体外感染作用。

夏桑菊低聚糖对益生菌增殖作用及其酶解工艺优化研究

目的:利用酶解法制备夏桑菊低聚糖,考察其对益生菌的增殖作用,并优化酶解工艺。方法:分别考察8种不同生物酶制备的夏桑菊低聚糖对5种不同益生菌生长活性,选出增殖率最高的酶与益生菌组合,用于酶解工艺优化;采用单因素设计方法,考察酶添加量、酶解温度、酶解时间工艺参数对益生菌增殖率的影响。结果:利用葡聚糖酶制备的夏桑菊低聚糖对鼠李糖乳杆菌的促增殖率最高,增殖率为(265±14.5)%。酶添加量为1500 U/mL时,鼠李糖乳杆菌的增殖率最高,达到了(320±17.2)%;酶解温度50℃时,鼠李糖乳杆菌增殖效果最高,增殖率为(329±15.6)%;酶解时间为4 h时,鼠李糖乳杆菌的增殖率最高,增殖率为(364±16.4)%。结论:8种不同生物酶酶解制备的夏桑菊低聚糖对5种益生菌都具有较好的促增殖作用,其中利用葡聚糖酶制备的夏桑菊低聚糖对鼠李糖乳杆菌的增殖效果最好,从益生活性考虑,选取葡聚糖酶添加量1500 U/mL、酶解温度50℃和酶解时间4 h为较优酶解方案。

RP-HPLC法同时测定夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷

目的建立RP—HPLC法同时测定夏桑菊颗粒（夏枯草、桑叶、野菊花）中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷4种活性成分的方法。方法采用AgilentEclipseXDB—C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-1．0％醋酸水溶液，采用梯度洗脱，检测波长为320nm，体积流量1．0mL／min，柱温30℃，进样体积10μL。结果绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷的线性范围分别为0．0389～0．7771μg、0．0067～4．200μg、0．0480～0．9600Ixg和0．0386～0．7714μg（0．9992〈r〈0．9999），平均回收率在98．35％和98．62％之间。结论该法检测效率高，专属性强，重复性好，可用于夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷的定量测定，可作为该制剂的质量控制方法之一。

夏桑菊颗粒指纹图谱的建立及其在质量控制中的应用

目的:建立夏桑菊颗粒(夏枯草、桑叶、野菊花)HPLC指纹图谱,为中成药产品及生产工艺过程质量控制提供有效的方法。方法:Sunfrie C18,分析柱150 mm×4.6 mm,5μm;A相为1%醋酸,B相为甲醇组成的梯度洗脱液;检测波长为290 nm;柱温:30°C;流速1.0 mL/min;分析时间:65 min。对生产工艺中水煎液(A)、醇沉液(B)、浓缩液(C)、成品分别进行指纹图谱测定,进行比较。结果:10批夏桑菊颗粒指纹图谱相似度≥0.970。夏桑菊颗粒的水煎液(A)、醇沉液(B)、浓缩液(C)、成品进行指纹图谱有明显差异。结论:该方法稳定可靠,可以有效地用于夏桑菊颗粒生产过程的质量控制和产品的质量评价。

夏桑菊颗粒UPLC指纹图谱研究

目的:建立不同批次夏桑菊颗粒的指纹图谱。方法:采用UPLC,建立12批夏桑菊颗粒的指纹图谱。ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.5%醋酸溶液,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.4 mL/min,检测波长320 nm,标定了16个色谱峰,分别采用相似度软件、聚类分析和主成分分析等方法,对12批样品进行系统的比较与归类。结果:建立了夏桑菊颗粒专属性的UPLC指纹图谱,将不同批次的样品分为6大类。结论:该方法重复性好,简便可靠,可用于夏桑菊颗粒的快速鉴别,可为夏桑菊颗粒的质量控制提供依据。

夏桑菊颗粒质量标准研究

目的建立夏桑菊颗粒(夏枯草、桑叶、野菊花)的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对夏桑菊颗粒中的迷迭香酸和蒙花苷进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对迷迭香酸和蒙花苷分别进行定量测定,色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,进样体积10μL,检测波长329 nm,流动相分别为20%乙腈-80%水(含1.0%醋酸)和25%乙腈-75%水(0.5%磷酸)等度洗脱。结果薄层鉴别均斑点清晰,阴性对照无干扰;定量测定中迷迭香酸进样在0.22～8.80μg范围内,与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为101.08%,RSD为1.75%。蒙花苷在0.101～2.02μg范围内,与峰面积线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为102.01%,RSD为0.48%。结论所建立方法操作简单、专属性和重复性良好,可作为该制剂的质量控制方法之一。

夏桑菊抗呼吸道合胞病毒的实验研究

目的评价夏桑菊抗呼吸道合胞病毒(RSV)的疗效。方法以病毒唑为对照,通过体外观察病毒致细胞病变效应(CPE)、病毒滴度、抗病毒指数;在体内观察其对染毒小鼠的死亡保护作用以及对小鼠心、脑、肺内病毒增殖的影响,从而判定夏桑菊抗RSV作用。结果夏桑菊能抑制RSV的增殖,其有效浓度为544.59μg/ml,并显示出病毒的感染性滴度随药物浓度的增加而下降;治疗RSV感染鼠结果发现夏桑菊对RSV感染鼠有保护作用,10g/(kg·d)时,RSV感染鼠的存活率为50%,平均存活天数为(10.9±2.3)d,随着药物剂量增加,疗效增强,该药物还能降低组织内病毒滴度,阻止体内病毒复制,抗RSV作用类似于同剂量的病毒唑。结论夏桑菊是一种抗呼吸道合胞病毒的有效药物。

夏桑菊泡腾颗粒质量标准研究

目的制定夏桑菊泡腾颗粒的质量标准,对其中的夏枯草、野菊花建立质量控制方法。方法用薄层色谱法对夏枯草中熊果酸进行鉴别;用HPLC法对野菊花中的蒙花苷进行含量测定。色谱柱：Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：甲醇-水-冰醋酸（体积比50∶48∶2）,流速：1.0mL.min-1,检测波长：334 nm。结果夏枯草的薄层鉴别方法快速、灵敏,阴性无干扰;蒙花苷在0.044 8-0.448μg范围内呈良好线性（r=0.999 9,n=5）,平均回收率为99.7%（n=6）,RSD为1.2%。结论建立的质量标准可较好地用于夏桑菊泡腾颗粒的质量控制。

夏桑菊颗粒氨基酸类成分指纹图谱的研究

目的:建立夏桑菊颗粒(夏枯草、野菊花、桑叶)氨基酸类成分HPLC指纹图谱。方法:采用AQC(6-氨基酸喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯)柱前衍生化HPLC法。色谱柱为SYMMETRY C18分析柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:(A)pH为5.05的醋酸钠缓冲液、(B)60乙腈(梯度洗脱);柱温:30℃;流速:1.0mL/min。荧光检测:激发波长(Ex)为250nm,发射波长(Em)为395nm,分析时间50min。结果:确定12个色谱峰作为共有峰,利用夹角余弦系数,相关系数及指纹图谱相似度评价系统软件,测得10批夏桑菊颗粒指纹图谱相似度0.95～1.00之间。结论:本实验建立的夏桑菊颗粒氨基酸类成分HPLC指纹图谱方法准确可靠,可控性强,重复性好,为有效控制夏桑菊颗粒质量提供可靠依据。

HPLC研究夏桑菊颗粒配伍成分变化规律

目的:应用HPLC建立夏桑菊颗粒的特征图谱,研究配伍对夏桑菊颗粒中夏枯草、桑叶和野菊花特征图谱的影响。方法:Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-1.0%冰乙酸溶液(B),梯度洗脱,流速为0.8 m L/min;检测波长为320 nm;柱温为35℃。结果:确定夏桑菊颗粒中的14个特征峰,且对特征峰进行了相应归属:其中6个来源于夏枯草,5个来源于野菊花,3个共同来源于桑叶和野菊花;同时利用对照品指认了夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸、蒙花苷4个成分,明确了配伍对这4个成分有较为显著的影响。结论:该方法稳定可靠,可用于夏桑菊颗粒中各单味药夏枯草、桑叶和野菊花特征成分在配伍后变化规律的研究。

RP-HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

目的:测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量。方法:采用反相高效液相色谱法。C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水-冰醋酸(26:73:1)为流动相;流速为0.7 mL·min^(-1);检测波长为326 nm。结果:进样量在20.6～206.0 ng 之间,进样量与峰面积呈良好的线性关系;回收率为98.5%。结论:样品分离效果好,测定结果准确,可靠,重复性好。

HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

目的建立夏桑菊颗粒中蒙花苷的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：Diamonsil^TM C18柱（250mm×4．6mm，5μm，迪马公司）；流动相为甲醇-四氢呋哺-水（43：5：52），检测波长334nm，流速1．0mL·min^-1，柱温30℃。结果蒙花苷在0．048～0．959μg范围内线形关系良好，r=0．9999，平均加样回收率为100．7％，RSD为0．86％（n=6）。结论所建立的方法准确，重现性好，灵敏度高，可用于该制剂的质量控制。

夏桑菊的质量控制和保健功能研究

随着中国消费者健康意识不断增强,夏桑菊制剂和草本保健茶正受到消费者的欢迎。通过查阅了近年来有关夏桑菊的文献资料,对质量控制进行了总结,并阐述了夏桑菊在药理作用和保健功能等方面的生物活性,为夏桑菊制剂和保健产品在临床应用和生活保健方面的的进一步深度利用开发提供了参考依据。

RP-HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量

目的建立夏桑菊颗粒中主要成分迷迭香酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对迷迭香酸进行含量测定,色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：0.8 ml/min,检测波长329 nm,柱温27℃,进样体积10μl,流动相为甲醇-0.5%乙酸水系统梯度洗脱。结果含量测定中迷迭香酸进样在0.22～8.80μg范围内,线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率和RSD均符合要求。结论所建立方法操作简单、专属性和重现性良好,可作为该制剂的质量控制方法之一。

薄层扫描法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量

采用薄层扫描法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量.以环己烷—氯仿—醋酸乙酯—冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)为展开剂,检测波长为520 nm,参比波长为700 nm,SX=3,标准曲线Y=1291.28X+34.12,R=0.998 2,熊果酸在1.017-2.373μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,平均回收率100.82%,RSD=1.94%.