基于GEO芯片及网络药理学探讨夏桑菊颗粒治疗高血压病的机制研究

[目的]基于基因表达汇编(GEO)芯片、网络药理学及分子对接技术探讨夏桑菊颗粒治疗高血压病的作用机制。[方法]利用TCMSP数据库获取和筛选夏桑菊颗粒的活性成分及成分靶点构建“中药-化合物-靶点”网络;利用GEO芯片技术、GeneCards、OMIM、TTD数据库获取并筛选高血压病的疾病靶点;将成分靶点与疾病靶点取交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,两次处理筛选关键靶点;对交集靶点进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;将关键靶点前4位与其对应活性成分进行分子对接分析。[结果]获得成分靶点194个、疾病靶点2168个、交集靶点126个、关键靶点6个;GO和KEGG富集分析显示夏桑菊颗粒主要与对激素、无机物、氮化合物、脂多糖、细胞外刺激等的反应等生物过程有关,主要富集通路涉及脂质与动脉粥样硬化、晚期糖基化产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、磷酸酰肌醇3-激酶-丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、肿瘤坏死因子(TNF)等信号通路;分子对接结果显示关键靶点与活性成分结合良好。[结论]夏桑菊颗粒可通过多成分-多靶点-多途径发挥作用,为其防治高血压病临床使用提供了一定的参考依据。

夏桑菊颗粒体外抗人冠状病毒研究

目的:研究夏桑菊颗粒对人冠状病毒-229E(HCoV-229E)的抑制作用。方法:采用细胞病变(CPE)法检测夏桑菊颗粒对A549细胞的安全剂量,采用CPE法检测夏桑菊颗粒对HCoV-229E引起A549细胞病变的影响,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测夏桑菊颗粒对HCoV-229E于A549细胞中的复制作用;采用噻唑蓝(MTT)法检测夏桑菊颗粒对Huh-7细胞的安全剂量;采用RT-PCR法检测夏桑菊颗粒对HCoV-229E感染引起Huh-7细胞炎症介质表达的影响。结果:夏桑菊颗粒对于HCoV-229E感染A549细胞引起CPE的半数抑制浓度为23.78 mg生药/mL,选择指数为2.0,夏桑菊颗粒能够剂量依赖性地抑制A549细胞内HCoV-229E病毒载量,夏桑菊颗粒可以抑制HCoV-229E诱导Huh7细胞内炎症介质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的mRNA过度表达。结论:夏桑菊颗粒具有明显的抗HCoV-229E体外感染作用。

RP-HPLC法同时测定夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷

目的建立RP—HPLC法同时测定夏桑菊颗粒（夏枯草、桑叶、野菊花）中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷4种活性成分的方法。方法采用AgilentEclipseXDB—C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-1．0％醋酸水溶液，采用梯度洗脱，检测波长为320nm，体积流量1．0mL／min，柱温30℃，进样体积10μL。结果绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷的线性范围分别为0．0389～0．7771μg、0．0067～4．200μg、0．0480～0．9600Ixg和0．0386～0．7714μg（0．9992〈r〈0．9999），平均回收率在98．35％和98．62％之间。结论该法检测效率高，专属性强，重复性好，可用于夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷的定量测定，可作为该制剂的质量控制方法之一。

夏桑菊颗粒指纹图谱的建立及其在质量控制中的应用

目的:建立夏桑菊颗粒(夏枯草、桑叶、野菊花)HPLC指纹图谱,为中成药产品及生产工艺过程质量控制提供有效的方法。方法:Sunfrie C18,分析柱150 mm×4.6 mm,5μm;A相为1%醋酸,B相为甲醇组成的梯度洗脱液;检测波长为290 nm;柱温:30°C;流速1.0 mL/min;分析时间:65 min。对生产工艺中水煎液(A)、醇沉液(B)、浓缩液(C)、成品分别进行指纹图谱测定,进行比较。结果:10批夏桑菊颗粒指纹图谱相似度≥0.970。夏桑菊颗粒的水煎液(A)、醇沉液(B)、浓缩液(C)、成品进行指纹图谱有明显差异。结论:该方法稳定可靠,可以有效地用于夏桑菊颗粒生产过程的质量控制和产品的质量评价。

夏桑菊颗粒UPLC指纹图谱研究

目的:建立不同批次夏桑菊颗粒的指纹图谱。方法:采用UPLC,建立12批夏桑菊颗粒的指纹图谱。ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.5%醋酸溶液,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.4 mL/min,检测波长320 nm,标定了16个色谱峰,分别采用相似度软件、聚类分析和主成分分析等方法,对12批样品进行系统的比较与归类。结果:建立了夏桑菊颗粒专属性的UPLC指纹图谱,将不同批次的样品分为6大类。结论:该方法重复性好,简便可靠,可用于夏桑菊颗粒的快速鉴别,可为夏桑菊颗粒的质量控制提供依据。

夏桑菊颗粒质量标准研究

目的建立夏桑菊颗粒(夏枯草、桑叶、野菊花)的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对夏桑菊颗粒中的迷迭香酸和蒙花苷进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对迷迭香酸和蒙花苷分别进行定量测定,色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,进样体积10μL,检测波长329 nm,流动相分别为20%乙腈-80%水(含1.0%醋酸)和25%乙腈-75%水(0.5%磷酸)等度洗脱。结果薄层鉴别均斑点清晰,阴性对照无干扰;定量测定中迷迭香酸进样在0.22～8.80μg范围内,与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为101.08%,RSD为1.75%。蒙花苷在0.101～2.02μg范围内,与峰面积线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为102.01%,RSD为0.48%。结论所建立方法操作简单、专属性和重复性良好,可作为该制剂的质量控制方法之一。

夏桑菊颗粒氨基酸类成分指纹图谱的研究

目的:建立夏桑菊颗粒(夏枯草、野菊花、桑叶)氨基酸类成分HPLC指纹图谱。方法:采用AQC(6-氨基酸喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯)柱前衍生化HPLC法。色谱柱为SYMMETRY C18分析柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:(A)pH为5.05的醋酸钠缓冲液、(B)60乙腈(梯度洗脱);柱温:30℃;流速:1.0mL/min。荧光检测:激发波长(Ex)为250nm,发射波长(Em)为395nm,分析时间50min。结果:确定12个色谱峰作为共有峰,利用夹角余弦系数,相关系数及指纹图谱相似度评价系统软件,测得10批夏桑菊颗粒指纹图谱相似度0.95～1.00之间。结论:本实验建立的夏桑菊颗粒氨基酸类成分HPLC指纹图谱方法准确可靠,可控性强,重复性好,为有效控制夏桑菊颗粒质量提供可靠依据。

HPLC研究夏桑菊颗粒配伍成分变化规律

目的:应用HPLC建立夏桑菊颗粒的特征图谱,研究配伍对夏桑菊颗粒中夏枯草、桑叶和野菊花特征图谱的影响。方法:Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-1.0%冰乙酸溶液(B),梯度洗脱,流速为0.8 m L/min;检测波长为320 nm;柱温为35℃。结果:确定夏桑菊颗粒中的14个特征峰,且对特征峰进行了相应归属:其中6个来源于夏枯草,5个来源于野菊花,3个共同来源于桑叶和野菊花;同时利用对照品指认了夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸、蒙花苷4个成分,明确了配伍对这4个成分有较为显著的影响。结论:该方法稳定可靠,可用于夏桑菊颗粒中各单味药夏枯草、桑叶和野菊花特征成分在配伍后变化规律的研究。

RP-HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

目的:测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量。方法:采用反相高效液相色谱法。C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水-冰醋酸(26:73:1)为流动相;流速为0.7 mL·min^(-1);检测波长为326 nm。结果:进样量在20.6～206.0 ng 之间,进样量与峰面积呈良好的线性关系;回收率为98.5%。结论:样品分离效果好,测定结果准确,可靠,重复性好。

HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

目的建立夏桑菊颗粒中蒙花苷的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：Diamonsil^TM C18柱（250mm×4．6mm，5μm，迪马公司）；流动相为甲醇-四氢呋哺-水（43：5：52），检测波长334nm，流速1．0mL·min^-1，柱温30℃。结果蒙花苷在0．048～0．959μg范围内线形关系良好，r=0．9999，平均加样回收率为100．7％，RSD为0．86％（n=6）。结论所建立的方法准确，重现性好，灵敏度高，可用于该制剂的质量控制。

RP-HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量

目的建立夏桑菊颗粒中主要成分迷迭香酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对迷迭香酸进行含量测定,色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：0.8 ml/min,检测波长329 nm,柱温27℃,进样体积10μl,流动相为甲醇-0.5%乙酸水系统梯度洗脱。结果含量测定中迷迭香酸进样在0.22～8.80μg范围内,线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率和RSD均符合要求。结论所建立方法操作简单、专属性和重现性良好,可作为该制剂的质量控制方法之一。

HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

目的研究高效液相色谱(HPLC)法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量的方法。方法采用AgilentZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸溶液(70∶30)为流动相;检测波长为334nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃。结果蒙花苷含量在0.0476～0.9520μg范围内具有良好线性关系,r=0.9999,平均加样回收率为99.73%,RSD=0.76%(n=6)。结论以HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量,方法简便快捷,精密度高,重现性好,可用于药品质量的控制。

对夏桑菊颗粒含量测定方法的商榷

本文主要对夏桑菊含量测定方法进行讨论。经试验发现。对照品采用熊果酸较妥；提取熊果酸的溶剂宜用水饱和正丁醇或乙醚，并以薄层层析实验结果予以确证。

夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量测定

目的:夏枯草为夏桑菊颗粒的君药,研究检测夏枯草主要药效成分迷迭香酸来建立夏桑菊的质控指标。方法:采用HPLC方法对夏桑菊中迷迭香酸含量进行测定,检测条件为色谱柱:Zorbax Eclipse XDB-C_(18);流动相:乙腈-1%醋酸(19∶81)洗脱;流速:1.0ml/min;柱温:40℃;检测波长:329nm;进样量:10μl。结果:检测得到迷迭香酸含量平均值为0.33mg/g,该方法的平均回收率为101.01%,线性方程为Y=2376737X-3261。结论:为提高夏桑菊颗粒质量标准,对处方中夏枯草以迷迭香酸计的含量进行研究,为更好的监控和评价夏桑菊颗粒的质量提供实验依据。

HPLC法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量

目的 建立夏桑菊颗粒中熊果酸的含量测定方法。方法 高效液相色谱法。结果 采用 DiamonsilC1 8柱 ,流动相为 :甲醇 -水 -冰乙酸 -三乙胺 (95∶ 5∶ 0 .3∶ 0 .0 2 ) ,流速为 0 .8m L· min- 1 ,检测波长为 2 15 nm,理论塔板数按熊果酸色谱峰计不低于 6 0 0 0。熊果酸在 16 .8～ 5 0 .4μg· m L- 1 范围内呈良好的线性关系 ,r =0 .9998,平均回收率为 97.5 8% ,RSD为 1.5 8% (n=5 )。结论 该方法简单易行 ,结果准确。

夏桑菊颗粒有效成分测定中薄层色谱鉴别法的改进

目的 :改进中药成方制剂记载的鉴别方法。方法 :选夏桑菊颗粒为测试药品 ,用改进后的薄层色谱鉴别法测析。结果 :改进后的方法增强了色谱的分离度、灵敏度、重复性和可鉴别性。结论 :改进后的方法缩短了检验周期 ,能及时。

夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒的作用

目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预处理后感染能力;荧光定量PCR法检测夏桑菊颗粒和利巴韦林对DENV-1拷贝数的影响,采用方差分析比较不同稀释度药物对病毒的影响。结果MTT结果显示夏桑菊颗粒和利巴韦林的最大无毒剂量分别为7. 81 mg/m L和3. 13 mg/m L;经过夏桑菊颗粒溶液处理后,感染病毒的细胞存活率增加(21. 9±4. 3)%和(15. 7±4. 1)%,同时,经过利巴韦林处理后,细胞存活率分别增加(39. 2±1. 9)%和(24. 2±3. 1)%,两者均能明显减弱病毒引起细胞病变的效应(P <0. 05);荧光实验结果显示夏桑菊颗粒可使病毒相对感染率下降(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林可使病毒相对感染率下降(51. 1±2. 3)%和(49. 3±2. 9)%,两者对病毒的感染具有明显的抑制作用(P <0. 05); q PCR实验结果表明夏桑菊颗粒对病毒拷贝数的抑制率达到(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林对病毒拷贝数抑制率达到(51. 1±2. 3)%和(39. 3±2. 9)%,两者对病毒的RNA复制产生了明显的抑制作用(P <0. 05)。结论夏桑菊颗粒通过体外预给药的方式会产生明显的抗DENV-1的作用,其作用效果与利巴韦林相近。

夏桑菊颗粒快速检验方法探讨

目的：建立夏桑菊颗粒的快速检验方法。方法：对4批不同厂家、批号的夏桑菊颗粒进行实验，在卫生部中药成方制剂收载的检验标准的基础上对鉴别项化学反应及薄层色谱提取方法、溶剂和展开系统进行了改进。结果：改进后的检验方法简便、快速，经济、环保，结果更加明显。结论：该方法适合于夏桑菊颗粒的快速筛查。

HPLC法测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量分析

目的:对HPLC法测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸含量的效果进行分析探讨,为今后的化学研究工作提供可靠的参考依据。方法:选用Agi-lent ZORBAX SB C18柱,流动相选用乙腈-浓度为0.1%磷酸=20:80,检测波长选用330nm,对夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量进行测定。结果:经统计发现,迷迭香酸进样量在0.071～1.362ug之间时线性关系良好,r=0.9999,加样回收率为99.32%,RSD值为1.3%。结论:经高效液相色谱法对夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量进行测定时具有操作简单、结果准确、重现性良好、灵敏度较高等诸多优势,值得关注。