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基于外切酶驱动策略构建荧光减弱式T4 PNK免标记传感器
1
作者
刘业玲
袁珲
+4 位作者
刘炳鑫
黄圣荣
周冰倩
李霞
薛庆旺
《聊城大学学报(自然科学版)》
2022年第2期82-88,共7页
T4多核苷酸激酶(T4 polynucleotide kinase,T4 PNK)是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化。核酸中5′-羟基末端的磷酸化...
T4多核苷酸激酶(T4 polynucleotide kinase,T4 PNK)是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化。核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关。因此构建一种灵敏的T4 PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义。本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4 PNK活性的策略,拟利用T4 PNK可将DNA的5′端由羟基化变为磷酸化的特点,磷酸化DNA能被λ核酸外切酶(λ-exonuclease)特异性识别和切割的特点降解底物双链DNA,导致与荧光染料SGΙ键合位点急剧减少,荧光信号输出由“on”模式切换到“off”模式,荧光强度大大减少。因此,可利用荧光减弱的程度来实现对T4 PNK的免标记荧光定量检测。
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关键词
T4多核苷酸激
酶
外切酶驱动
免标记荧光
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职称材料
题名
基于外切酶驱动策略构建荧光减弱式T4 PNK免标记传感器
1
作者
刘业玲
袁珲
刘炳鑫
黄圣荣
周冰倩
李霞
薛庆旺
机构
聊城大学化学化工学院
出处
《聊城大学学报(自然科学版)》
2022年第2期82-88,共7页
基金
国家自然科学基金项目(21675072)资助。
文摘
T4多核苷酸激酶(T4 polynucleotide kinase,T4 PNK)是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化。核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关。因此构建一种灵敏的T4 PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义。本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4 PNK活性的策略,拟利用T4 PNK可将DNA的5′端由羟基化变为磷酸化的特点,磷酸化DNA能被λ核酸外切酶(λ-exonuclease)特异性识别和切割的特点降解底物双链DNA,导致与荧光染料SGΙ键合位点急剧减少,荧光信号输出由“on”模式切换到“off”模式,荧光强度大大减少。因此,可利用荧光减弱的程度来实现对T4 PNK的免标记荧光定量检测。
关键词
T4多核苷酸激
酶
外切酶驱动
免标记荧光
Keywords
T4 polynucleotide kinase
exonuclease driven
labeling-free fluorescence
分类号
O656 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于外切酶驱动策略构建荧光减弱式T4 PNK免标记传感器
刘业玲
袁珲
刘炳鑫
黄圣荣
周冰倩
李霞
薛庆旺
《聊城大学学报(自然科学版)》
2022
0
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