系统性红斑狼疮患者外周血共刺激分子OX40/OX40L表达及其意义

目的:探讨外周血共刺激分子OX40和OX40L在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T、B细胞上的表达及其意义。方法:采用流式细胞仪检测技术对62例SLE患者和40例健康志愿者外周血T细胞上OX40和B细胞上OX40L的表达水平进行分析。结果:与健康对照组比,SLE患者组外周血CD4^+T细胞OX40表达水平显著高于健康对照组,而CD8^+T细胞OX40表达水平较对照组无明显变化;SL正患者组外周血B细胞上OX40L表达率较健康对照组显著升高(P<0.05);SLE活动期患者组外周血CD4^+T细胞上OX40及B细胞上OX40L的表达率明显高于非活动组;SLE患者组治疗后OX40和OX40L表达率随病情好转而下降。结论:SLE患者外周血CD4^+T细胞上OX40及B细胞OX40L表达水平明显上调,随着病情的好转,CD4^+T细胞上OX40及B细胞OX40L表达水平明显下调,提示OX40/OX40L信号在T细胞与B细胞相互作用过程中可能有助于T细胞的持续活化,从而参与SLE的发生发展。

OX40/OX40L共刺激信号分子在慢性乙肝病毒感染者外周血中的表达研究

目的:探讨OX40/OX40L共刺激信号分子在慢性乙肝病毒(HBV)感染者外周血中的表达情况。方法:选取2019年6月—2020年6月本院收治的慢性HBV感染患者82例为观察组,同期选取健康体检者80例为对照组。观察组分为免疫耐受组、免疫清除组、低复制组、再活动组4个亚组,比较各亚组白蛋白/球蛋白(A/G)、总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)等肝功能指标,以及肝功能与OX40/OX40L表达水平的相关性。结果:观察组外周血T细胞亚群CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(3)^(+)较对照组低,CD_(8)^(+)较对照组高(P<0.05)。观察组外周血CD_(4)^(+)、CD_(14)^(+)、CD_(19)^(+)T细胞表面的OX40/OX40L较对照组表达水平高(P<0.05)。4个亚组外周血CD_(4)^(+)T细胞表面的OX40表达水平比较,再活动组最高,其次是免疫清除组、低复制组,免疫耐受组最低(P<0.05);4个亚组CD _(14)^(+)、CD_(19)^(+)T细胞表面的OX40L表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4个亚组肝功能指标A/G水平依次降低,ALT、TBIL水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。OX40/OX40L表达水平与肝功能指标ALT、A/G呈正相关(P<0.05),与TBIL不具相关性(P>0.05)。结论:慢性乙肝患者外周血OX40/OX40L分子表达水平与病例发展阶段、肝功能指标具有相关性,活动性越高,表达水平越高,肝功能受损越严重,借助于检测OX40/OX40L表达,可反映患者免疫功能。

滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L免疫调节作用的影响

目的:研究滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用的影响。方法:随机抽取2016年1月—2017年3月本院收治的90例2型糖尿病患者,依据治疗措施差异分作两组,各45例,对照组施予甘精胰岛素治疗,于此基础,观察组施予滋水清肝饮加减方治疗,比较两组正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L。结果:治疗后,(1)在B细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.71±0.04)%,OX40/OX40L(6.05±0.83)%,分别比对照组的(2.11±0.37)%及(11.58±2.10)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在CD4+T细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.61±0.01)%,OX40/OX40L(0.30±0.03)%,分别比对照组的(1.60±0.17)%及(1.13±0.20)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)对于合并大血管病变者,观察组B细胞、CD4+T细胞上的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L表达均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);(4)观察组血糖及总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、糖化血清蛋白(Glucosylated serum protein,GSP)水平均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:于2型糖尿病患者中施予滋水清肝饮加减方治疗有助于改善正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用,促进合并大血管病变者转归,值得推广。

OX40和OX40L在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后OX40和OX40L表达水平变化,分析其临床意义。结果与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面OX40表达显著增高(8.65%±3.51%vs 5.68%±1.68%,P<0.01),而CD8+T细胞表面OX40的表达无统计学差异。pSS患者表面OX40L的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76%±3.60%vs 3.15%±1.89%,P<0.01)和CD19+B细胞(4.69%±2.40%vs 2.76%±1.33%,P<0.01)中均高于健康志愿者。活动期的pSS患者外周血OX40和OX40L的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血OX40和OX40L分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者。治疗后CD4+T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L的表达显著下降。结论 pSS患者外周血单个核细胞表面OX40和OX40L异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关。

共刺激分子CD40/CD40L及B7/CD28与动脉粥样硬化

共刺激分子CD40/CD40L及B7/CD28是T细胞活化的两条重要辅助刺激通路,不仅在调节T细胞免疫反应中起关键作用,而且也在B细胞的活化、增殖、分化、抗体的分泌起重要作用。近年来它们在动脉粥样硬化方面的研究成为国内外学者研究的热点。对共刺激分子和动脉粥样硬化关系的深入了解,将有助于阐明动脉粥样硬化发生的炎症和免疫机制,并为临床治疗开辟新途径。本文综述了共刺激分子的免疫学特征及功能以及在动脉粥样硬化中发挥的作用与免疫学治疗的前景。

共刺激分子CD28:CTLA4/B7及CD40/CD40L和SLE

共刺激分子CD2 8:CTLA 4/B7和CD40 /CD40L对B细胞的增殖、分化、抗体的分泌和T细胞的活化、细胞因子的分泌具有重要作用 ,其对系统性红斑狼疮的发生、发展具有重要的促进作用。本文综述了CD2 8:CTLA 4/B7和CD40 /CD40L生物学特性、功能及在系统性红斑狼疮发生、发展中的作用 ,以及免疫学治疗的临床应用前景。

CD40-CD40L共刺激分子与自身免疫性疾病

大量研究证实CD4 0分子与其配体CD4 0L结合所产生的共刺激信号在B细胞的增殖、分化、抗体的分泌和类型转换以及T细胞活化、效应性细胞因子分泌中起重要作用。近年来发现 ,CD4 0、CD4 0L异常表达与一些疾病的免疫病理密切相关。本文仅就CD4 0 CD4 0L的生物学特性。

自身反应性T细胞及共刺激分子CD28／CTLA-4／B7、CD40／CD40L和ITP

血小板抗原特异性自身反应性T细胞的活化在特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制中起着关键性作用,T细胞的活化除需要抗原递呈细胞表面MHCⅡ抗原复合物外还需要共刺激分子(第二信号),主要包括CD28／CTLA-4／B7和CD40／CD40L。本文就自身反应性T细胞和共刺激分子CD28／ CTLA-4／B7、CD40／CD40L在ITP中的作用机制及潜在的治疗价值作一综述。

人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究

目的 构建人OX4 0 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人OX4 0 Fc融合蛋白。方法 从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增OX4 0膜外区cDNA编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,进行酶切并与人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,采用脂质体法稳定转染COS 7细胞 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与Westernblotting进行鉴定。检测其对活化后Jurkat细胞增殖的抑制活性。结果 测序证实构建的OX4 0膜外区与OX4 0 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实OX4 0 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与Westernblotting证实其为OX4 0 Fc蛋白。增殖实验证明其对活化后的Jurkat细胞有抑制增殖作用。结论 成功构建了人OX4 0 Fc真核表达载体 ,并使有生物学活性的OX4 0 Fc融合蛋白在COS 7细胞上获得了稳定表达。

两株新的鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究

目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法和MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人OX40LmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4D6和5C2。对mAb生物学功能的研究结果表明,2株mAb均能识别成熟DC细胞以及Jurkat、SHI-1、U937等白血病细胞株表面的OX40L分子。对其中SHI-1白血病细胞株增殖影响的实验显示,这2株抗体对SHI-1的增殖都具有一定的抑制作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人OX40L功能性mAb杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别人OX40L分子,并影响表达OX40白血病细胞株的体外增殖,为进一步研究OX40/OX40L的生物学功能奠定了基础。

OX40/OX40L与T细胞

OX40(CD134)及其配体OX40L(CD252)属于肿瘤坏死因子超家族成员,是机体免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,对维持T细胞的活化、增殖以及存活都起到关键性作用。作者就OX40与T细胞的关系进行综述。

人可溶性OX40L蛋白ELISA检测试剂盒的研制及其在自身免疫性疾病诊断中的应用

目的研制特异性检测人可溶性OX40L蛋白(sOX40L)的ELISA试剂盒,探讨其在自身免疫性疾病临床诊断中的应用。方法利用两株识别不同抗原表位的鼠抗人OX40L单克隆抗体1G1和4C12分别作为包被抗体和检测抗体,采用双抗体酶联免疫夹心法研制特异性检测人sOX40L的ELISA方法,并对其稳定性、精确性和特异性进行分析。结果①建立的检测人sOX40L酶联免疫试剂盒在抗原浓度为3.91～250ng/ml范围内有良好的线性关系,并具有良好的稳定性、较高的准确性和特异性。②利用该ELISA方法检测到sOX40L蛋白在肾病综合征和Graves’病患者血清中表达水平均显著高于健康对照组。结论成功建立了检测人sOX40L蛋白的ELISA试剂盒,应用该方法检测到sOX40L在多种自身免疫病患者血清中异常高表达。该试剂盒在OX40L分子基础研究以及自身免疫病的临床诊断方面具有潜在的应用价值。

Nogo-66蛋白对视网膜小胶质细胞OX40L表达的影响

目的研究免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,探讨Nogo-66蛋白刺激小鼠视网膜小胶质细胞株N9表达细胞膜黏附分子OX40L的可能性。方法根据不同浓度(250μg·L-1、500μg·L-1、1000μg·L-1、2000μg·L-1)的Nogo-66蛋白细胞培养液将实验组分为1、2、3、4组。应用免疫细胞化学方法,鉴定小胶质细胞在不同浓度的Nogo-66蛋白细胞培养溶液(实验组)中的表达情况,并与无刺激因子的细胞培养液(对照组)中小胶质细胞OX40L表达对比,Image-Pro Plus Version6.0图像分析软件处理,比较激活后小胶质细胞OX40L表达差异。结果Nogo-66蛋白质作为刺激因子处理后的小胶质细胞表现激活状态下的典型形态,细胞突起减少,体积明显增大,相同倍率拍照后图像分析可知,对照组细胞相对平均体积为(93.0020±17.0101)pixel,实验1、2、3、4组相对平均体积分别为(134.2258±23.5828)pixel、(242.7430±72·9439)pixel、(228.1760±37.1582)pixel、(204.7210±43.4950)pixel,与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P均<0.001),实验1组与2、3、4组相比差异亦有显著统计学意义(P均<0.01)。对照组OX40L表达的细胞体积比为0.12%,实验1、2、3、4组分别为34.30%、58.91%、60.25%、59.71%,与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P均<0·01)。结论Nogo-66蛋白能够刺激小胶质细胞处于激活状态,表达OX40L,从而可能进一步影响中枢神经系统疾病治疗的临床前研究。

OX40/OX40L轴介导T细胞免疫参与口腔扁平苔藓病程的研究进展

口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种发病机制尚不明确的、常见的口腔黏膜慢性疾病。T细胞的局部浸润在其病理过程中起关键作用。越来越多的研究支持辅助性T细胞(helper T cell,Th)如Th1/Th2、Th17/调节T细胞(regulatory T cells,Treg)及其相关细胞因子的失衡与OLP的发病进展密切相关。近年来研究显示,共刺激分子OX40(CD134)及其配体OX40L(CD252)在T细胞免疫应答过程中具有重要意义而受到关注,参与Th1/Th2、Th17/Treg的平衡调控,介导促炎和抗炎的失衡,影响多种自身免疫性疾病的发生发展。但目前缺乏OX40/OX40L轴介导OLP发病过程中T细胞亚群失衡作用机制的研究。因此,未来仍需要针对OX40/OX40L轴调控OLP中T细胞亚群平衡机制开展大样本的临床和体内外实验研究。

CD40/CD40L分子与自身免疫性甲状腺疾病及糖尿病

CD40/CD40配体(CD40L)作为T细胞活化的共刺激信号之一,在Graves病(GD)和1型糖尿病的发生、发展中起重要作用。目前研究认为CD40基因是GD的一个新的易感基因,高加索人和韩国人中CD40基因5’非翻译区C/T多态性与GD有关,CC基因型倾向发病;糖尿病患者CD40L、游离CD40L水平与糖化血红蛋白A1c、晚期糖基化终末产物的浓度正相关,提示CD40L有可能作为病情发展变化的一项监测指标,并可能参与糖尿病炎性血管并发症的发生、发展。CD40在非肥胖糖尿病(NOD)鼠胰岛的浸润性T细胞高表达,引发胰岛自身免疫反应,早期应用CD40L单克隆抗体阻断CD40/CD40L途径,可有效阻止胰岛炎的发生,在诱导胰岛移植免疫耐受方面也有一定作用,但其有效性、安全性尚需作更多的研究。

共刺激分子OX40在急性脑梗死患者外周血调节性T细胞上的表达及其临床意义

目的探讨急性脑梗死患者外周血调节性T细胞(Treg)上共刺激分子OX40的表达情况及其临床意义。方法选择苏州大学附属第一医院神经内科自2019年4月至l2月收治的75例首次发病的急性脑梗死患者纳入病例组,选择同期招募的年龄、性别与病例组相匹配的36例健康志愿者纳入对照组。采用免疫荧光标记和流式细胞技术检测2组受试者肘静脉血中CD4+CD25+CD127^low Treg细胞上OX40的表达,并分析病例组的OX40^+Treg细胞比例与其美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、缺血半暗带体积、核心梗死灶体积、梗死灶体积的相关性,同时比较病例组的OX40^+Treg细胞比例在血管内治疗或静脉溶栓前后的变化。结果与对照组比较,病例组的外周血Treg细胞比例明显降低,OX40^+Treg细胞比例明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。病例组的外周血OX40^+Treg细胞比例与其NIHSS评分呈正相关关系(rs=0.271,P=0.018),与其缺血半暗带体积、核心梗死灶体积、梗死灶体积亦均呈正相关关系(rs=0.435,P=0.000;rs=0.343,P=0.003;rs=0.245,P=0.034)。病例组中血管内治疗患者的术后第7天外周血OX40^+Treg细胞比例较术前明显降低,静脉溶栓患者的术后第3、7天外周血OX40^+Treg细胞比例较术前明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论OX40在急性脑梗死患者外周血Treg细胞上异常表达,并与神经功能缺损、影像学表现及再灌注治疗密切相关。

OX40/OX40L共刺激信号分子在支气管哮喘中的应用前景

支气管哮喘（简称哮喘）是一种由嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等多种炎症细胞及细胞因子参与的一种慢性气道炎症性疾患[1]。其中T细胞在哮喘的发病过程中具有重要的作用。T细胞的活化需要两个不可或缺的信号：第一信号由T细胞受体（TCR）识别抗原递呈细胞（APC）表面的抗原肽-MHC复合物所启动;第二信号由T细胞和APC表面的共刺激信号分子的相互作用所启动。