砷中毒对哮喘患儿外周血分离T细胞凋亡的影响研究

目的探讨砷中毒对哮喘患儿外周血分离T细胞凋亡的影响。方法选取38例哮喘患儿为观察组,38例健康儿童为对照组。采集两组的外周血,对T细胞进行分离,分别采用地塞米松或三氧化二砷(As2O3)进行24h的培养,观察T细胞凋亡情况。结果不加地塞米松和As2O3,观察组的细胞凋亡率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);加入As2O3后,两组的细胞凋亡率与不加地塞米松和As2O3相比,均明显上升,差异有统计学意义(P<0.05);加入地塞米松后,两组的细胞凋亡率与不加地塞米松和As2O3相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3可显著提高哮喘患儿外周血T细胞凋亡率,降低IL-4水平,减弱Bcl-2的表达。

重症肌无力患者外周血单个核细胞中线粒体自噬和凋亡相关基因表达及其诊断价值

目的:探讨重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中线粒体自噬和凋亡相关基因的表达水平,阐明其对MG诊断的指导价值。方法:收集并提取50名健康对照者(对照组)和50例MG患者(MG组)的PBMCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测线粒体自噬因子磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)诱导激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶PARK2(Parkin)、泛素结合蛋白62(p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)及凋亡因子细胞色素C(Cyt-C)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)的mRNA以及蛋白表达水平,根据mRNA检测结果设定多个不同临界值,在每个临界值处计算出相应的灵敏度和特异度,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果:与对照组比较,MG组患者PBMCs中的自噬因子PINK1、Parkin和LC3Ⅱ的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p62 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01);凋亡因子Cyt-C、Bax、caspase 3和caspase 9 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Cyt-C mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。ROC曲线检测,PINK1、Parkin、p62和LC3Ⅱ的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.9696(95%CI:0.9435~0.9957)、0.9440(95%CI:0.9047~0.9833)、0.8556(95%CI:0.7767~0.9345)及0.9088(95%CI:0.8526~0.9650)(P<0.01),灵敏度分别为92%、92%、78%和84%,特异度分别为88%、82%、92%和82%;而Cyt-C、Bax、Bcl-2、caspase 3和caspase 9的AUC均为1.000(P<0.01),灵敏度和特异度均达到100%。结论:MG患者PBMCs中存在线粒体自噬障碍和凋亡增加现象,其对临床诊断MG具有较高的指导价值。

参地颗粒对慢性肾炎患者外周血单个核细胞凋亡及MCP-1和TGF-β1的干预作用

目的:观察参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡、血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血清转化生长因子-β1(TGF-β1)的干预作用。方法:采用前瞻性随机对照研究方法,收集符合慢性肾炎脾肾亏虚证纳入标准的患者,1∶1入组随机分入治疗组和对照组各30例,对照组服用缬沙坦胶囊,治疗组服用参地颗粒,疗程12周。另收集正常体检者全血及血清标本作为正常组。观察两组患者治疗前后的血肌酐(Scr)、评估肾小球滤过率(eGFR)、24 h尿蛋白定量及PBMC凋亡率、血清MCP-1和TGF-β1水平的变化情况。结果:中医症候疗效比较治疗组总有效率为93.10%,对照组为67.85%,治疗组优于对照组(P<0.05)。在治疗第8周及第12周,两组患者24小时尿蛋白定量水平均下降,且治疗组低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗前后Scr、eGFR水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。CGN患者PBMC凋亡率及Fas表达和血清MCP-1、TGF-β1的表达较正常人群高(P<0.05);治疗后较治疗前低(P<0.05),且治疗组低于对照组(P<0.05)。CGN患者PBMC中的Bcl-2表达较正常人群减少(P<0.01);治疗后其表达增加(P<0.05);且治疗组升高水平更高,优于对照组(P<0.05)。结论:参地颗粒可改善CGN脾肾亏虚证患者的临床症状,消减尿蛋白。同时上调,Bcl-2蛋白的表达,下调Fas蛋白的表达,降低PBMC凋亡率,下调患者血清MCP-1、TGF-β1的水平。

苯烯莫德对人外周血单个核细胞增殖、凋亡作用及对T细胞NF-κB的调节

目的探讨苯烯莫德对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖凋亡及T细胞核因子NF-κB的调节作用。方法提取健康志愿者外周血,密度梯度离心法分离单个核细胞,用CCK-8法测定苯烯莫德对人PBMC增殖的影响;用流式细胞法测定苯烯莫德对人PBMC凋亡的影响;用Western blot法检测活化的人T细胞核因子NF-κB p65,p-NF-κb p65,IKK,p-IKK,IκBα,p-IκBα蛋白表达的经时变化。结果苯烯莫德抑制人PBMC增殖的IC50为9.67μmol/L;苯烯莫德可诱导人PBMC的早期凋亡和晚期凋亡;苯烯莫德作用于活化的T细胞后,随着时间的延长,NF-κB通路中活化性因子p-NF-κB p65和p-IKK表达逐渐降低,而抑制性因子p-IκBα表达却逐渐升高,提示苯烯莫德对NF-κB通路为负向调节。结论苯烯莫德抑制人PBMC增殖,诱导其凋亡。苯烯莫德对T细胞NF-κB通路为负向调节。

中药“增免散”对鸡腔上囊细胞凋亡和外周血T细胞亚群的影响

将300只1日龄雏鸡随机分成正常对照组、中药“增免散”组、环磷酰胺组、环磷酰胺组+左旋咪唑组、环磷酰胺+“增免散”组,6日龄用鸡新城疫(ND)La Sota疫苗免疫点眼滴鼻,14、21、28、35日龄测定鸡血液ND抗体效价、外周血液CD4+、CD8+T淋巴细胞浓度、腔上囊器官指数、腔上囊细胞凋亡率,探索中药“增免散”的免疫增强机理。结果表明:中药“增免散”不但能提高外周血液中CD4+/CD8+T淋巴细胞百分比,促进鸡腔上囊的生长发育,降低腔上囊细胞凋亡率,而且对环磷酰胺的免疫抑制有部分拮抗作用。

猪瘟病毒感染猪外周血白细胞凋亡及CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化

为了解猪瘟病毒(CSFV)石门株强毒感染对免疫细胞的影响以及免疫细胞的变化动力学,用流式细胞仪对人工感染猪的白细胞凋亡以及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行了检测。结果表明,攻毒后CD4+和CD8+T淋巴细胞比例急剧下降,CD4+T淋巴细胞比例在攻毒后第4 d和第7 d分别由攻毒前的26.87%下降到8.83%和13.86%,CD8+T淋巴细胞比例由攻毒前的28.17%分别下降到14.19%和17.55%。外周血白细胞凋亡的检测结果显示,发病初期感染组凋亡细胞和早期凋亡细胞均显著高于对照组,表明CSFV诱导细胞凋亡是导致免疫细胞减少和免疫抑制的主要原因。

三氧化二砷对哮喘患者及正常人外周血T细胞凋亡的影响

目的研究三氧化二砷对哮喘患者及正常人外周血T细胞凋亡的影响。方法收集哮喘患者和健康对照者外周血,分离T细胞,每位受试者T细胞分别加入或不加三氧化二砷和地塞米松进行体外培养,24h后收集细胞,用荧光显微镜、流式细胞术和细胞色素cELISA试剂盒检测细胞凋亡。结果与健康对照者比较,哮喘患者T细胞自发凋亡减慢。加入地塞米松一起培养,哮喘患者和健康对照者T细胞凋亡均显著增加,两者增加幅度无明显差异;加入三氧化二砷一起培养,哮喘患者T细胞凋亡显著增加,但健康对照者T细胞只受轻微影响。结论哮喘患者T细胞自发凋亡减慢。对三氧化二砷诱导的T细胞凋亡,哮喘患者的敏感性明显高于正常人;对地塞米松诱导的T细胞凋亡,哮喘患者和正常人敏感性一样。

T细胞疫苗诱导免疫耐受与外周血T细胞凋亡的关系探讨

目的 探讨T细胞疫苗诱导特异性免疫耐受与外周血T细胞凋亡的关系。方法 制备针对Wistar大鼠的SD大鼠T细胞疫苗 ,然后用该疫苗免疫健康SD大鼠 ,每周 1次 ,连续 3周 ,作为实验组 (n =6)。对照组 (n =6)用RPMI 164 0培养液替代T细胞疫苗。以被免疫的SD大鼠的脾细胞作为反应细胞 ,以Wistar大鼠的脾细胞作为刺激细胞 (经丝裂霉素处理 ) ,于接种前和每次接种后第 5天进行单向混合淋巴细胞反应 (3 H TDR掺入法 ) ,测定其cpm值 ;用流式细胞仪对外周血T细胞凋亡情况进行检测。结果 混合淋巴细胞反应结果显示 ,实验组SD大鼠脾细胞免疫应答能力于接种后受到显著抑制 ,其cpm值较接种前显著降低 (P<0 .0 1) ;对照组接种前后各时点比较 ,其差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;接种后相同时点的cpm值组间比较 ,实验组显著低于对照组 (P <0 .0 1) ;与接种前比较 ,接种后实验组外周血T细胞凋亡率显著增高 (P<0 .0 1) ,且随着疫苗接种次数的增加而升高 ,而对照组接种后各时点T细胞凋亡率与接种前比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 T细胞疫苗可以诱导同种特异性免疫耐受 ,其机理可能是通过诱导外周血T细胞凋亡 ,清除抗原特异性反应性T细胞克隆来实现的。

养胃抗瘤冲剂对胃癌患者外周血T淋巴细胞rDNA的转录活性和凋亡相关蛋白影响的研究

目的 :观察养胃抗瘤冲剂对胃癌患者外周血T淋巴细胞rDNA转录活性和凋亡相关蛋白变化的影响及在肿瘤转移中的意义。 方法 :采用KL型肿瘤免疫图像分析系统和流式细胞仪测定正常人和胃癌患者养胃抗瘤冲剂治疗前后外周血T淋巴细胞rDNA的转录活性和调亡相关蛋白 (Fas/FasL)的表达变化。 结果 :胃癌患者外周血T淋巴细胞rDNA转录活性明显降低 ,凋亡相关蛋白Fas表达升高 ,与健康人相比 ,差异显著 (P <0 0 1) ,随着病情的进展 ,这种趋势更为明显。养胃抗瘤冲剂治疗后外周血T淋巴细胞的Ag -NORs升高、Fas表达降低 ,与治疗前比较差异显著 (P <0 0 1)。 结论 :养胃抗瘤冲剂可以降低外周血T淋巴细胞的凋亡能力 ,对增殖能力则有增强作用 ,从而提高机体的细胞免疫功能。外周血T淋巴细胞rDNA转录活性和凋亡相关蛋白变化可以从淋巴细胞增殖和凋亡活性两方面评价肿瘤患者的免疫状态 ,在胃癌转移的临床监测中具有重要意义。

不同剂量糖皮质激素对外周血CD4^+T淋巴细胞凋亡的影响

目的观察不同浓度糖皮质激素对外周血CD4+T淋巴细胞凋亡的影响。方法取健康志愿者10名的全血样本,用RPMI1640培养液稀释一倍。分为五组,加入不同浓度氢化可的松:A组,0.3mg/L;B组,1.2mg/L,C组,36mg/L,D组,200mg/L,E组(对照组),0mg/L。以5%CO2培养箱培养4h,分离淋巴细胞,流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞凋亡。结果0.3mg/L和1.2mg/L糖皮质激素致CD4+T淋巴细胞凋亡率分别为(8.74±1.3)%和(8.15±1.7)%,明显低于对照组的(10.84±2.1)%(P<0.05)。36mg/L和200mg/L糖皮质激素致淋巴细胞凋亡率分别为(11.59±2.2)%和(12.56±2.87)%,明显高于对照组(P<0.05)。结论低剂量糖皮质激素致T淋巴细胞凋亡率下降,而大剂量糖皮质激素则促淋巴细胞凋亡。

结核患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达与巨噬细胞凋亡的临床意义

目的探讨结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T淋巴细胞(Treg)表达与单核巨噬细胞(MΦ)凋亡的可能关系及临床意义。方法用流式仪测定29例活动性结核、17例肺外结核患者治疗前及治疗后3、6个月PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达及MΦ凋亡率,并与20例健康对照者(健康对照组)进行比较。结果活动性结核患者PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达明显高于健康对照组和治疗后患者,且复治患者高于初治患者,肺外结核高于肺结核;患者MΦ凋亡率明显高于健康对照组(P<0.01),初治组明显高于复治组(P<0.01)。活动性结核患者PBMC中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达与MΦ凋亡呈负相关。结论 CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达升高,MΦ凋亡下降,提示与结核病呈慢性感染有关。

地塞米松对哮喘患者外周血CD4^+和CD8^+T淋巴细胞凋亡的诱导作用

【目的】观察地塞米松对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞凋亡的诱导作用。【方法】经密度梯度离心法、尼龙棉柱法、磁珠分离法分离出CD4+、CD8+T淋巴细胞,分地塞米松(DXM)及空白(blank)组培养72h后,用流式细胞仪检测凋亡率。【结果】①DXM(10-5mol/L)可以诱导健康组和哮喘组CD4+及CD8+T淋巴细胞凋亡率增加,P<0.05;②健康组和哮喘组的CD4+T细胞的凋亡率均显著低于CD8+T细胞,P<0.05;③无论在CD4+T或CD8+T淋巴细胞,哮喘组的凋亡率均低于健康组,但差异没有统计学意义,P>0.05。【结论】地塞米松的抗炎作用可能部分通过促进CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡来实现。

类风湿性关节炎患者外周血CD4^+T细胞存在凋亡缺陷

目的探讨CD4+T细胞凋亡在类风湿性关节炎(RA)发病机制中的作用。方法 30例RA患者和12例健康对照者分为2组,应用annexinⅤ-FITC/PI双标记结合流式细胞术分析RA患者及对照者CD4+T细胞凋亡水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关蛋白Fas、Fas L、caspase-8、caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA相对表达水平,Western blot法测定细胞凋亡蛋白Fas、Fas L及caspase-8、caspase-3的表达;分析RA组凋亡蛋白表达水平与临床活动指标的相关性。结果与健康对照组相比,RA患者CD4+T细胞凋亡减少;与血沉(ESR)、类风湿因子(RF)呈负相关;qRT-PCR结果表明,RA患者CD4+T细胞Fas、caspase-8、caspase-3、Bax mRNA的表达量显著降低、Bcl-2 mRNA表达量增加。Fas表达与中医症状积分呈负相关,Bcl-2与环瓜氨酸肽(CCP)水平呈正相关。Western blot结果显示,RA患者CD4+T细胞Fas、Fas L、caspase-8、caspase-3的表达量较正常组明显降低,Fas与CRP呈正相关、Fas L与晨僵时间呈负相关。结论 RA患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡减少,与多数相关凋亡蛋白的表达降低、Bcl-2表达增强有关。提示RA存在凋亡缺陷,Fas介导的细胞凋亡在RA过程中有一定作用。

特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞凋亡信号蛋白表达的临床意义

目的检测凋亡信号蛋白死亡结构域(FADD)、Fas、FasL和核因子κB(NF-κB)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T细胞中的表达,探讨其对T细胞凋亡的影响及其临床意义。方法无菌采集35例ITP患儿及30例健康儿童外周血,T细胞分离富聚柱法分离纯化T细胞,流式细胞仪检测T细胞凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达;免疫组化法检测FADD、NF-κB P65蛋白的表达。结果ITP患儿T细胞凋亡信号蛋白Fas、FADD表达与正常儿童比较明显下降,FasL、NF-κB P65表达显著上升,差异均有显著性意义(P均<0.05);患儿外周血T细胞凋亡率明显降低,并与血小板计数呈对数正相关(r=0.880 P<0.05)。结论ITP患儿可通过下调引起T细胞凋亡的信号蛋白Fas、FADD表达,同时上调活化增殖蛋白FasL、NF-κB P65表达,导致ITP患儿T细胞凋亡减少、活性增强,引起血小板大量损伤。

镁对哮喘患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4+CD25+T细胞的纯度为77.4%～92.3%,哮喘患者CD4+CD25+T细胞的纯度为75.2%～93.8%。(2)CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比例在健康组为4.12%～7.98%,在哮喘组为4.51%～8.68%,两者没有显著差异(P>0.05)。(3)镁(10 mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4+CD25+T细胞凋亡率增加(P<0.05),但对Foxp3的表达无影响(P>0.05)。结论:镁促进CD4+CD25+T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。

HIV感染者/AIDS病人外周血淋巴细胞凋亡与CD_4^+T淋巴细胞水平的临床实验研究

目的探讨艾滋病病毒感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS患者)外周血淋巴细胞凋亡与CD4+T淋巴细胞水平的关系。方法采用流式细胞技术测定HIV/AIDS患者外周血淋巴细胞凋亡百分率和CD4+T淋巴细胞计数。结果各对比组中淋巴细胞调亡百分率有统计学差异(F=898,P<0.01),表现为AIDS组>HIV感染组>对照组(q12=46,q13=58,q23=12,P均<0.01);CD4+T淋巴细胞水平亦呈现出统计学差异(F=13 270,P<0.01),表现为对照组>HIV感染组>AIDS组(q12=33,q13=203,q23=185,P均<0.01)。结论HIV/AIDS患者CD4+T淋巴细胞水平与外周血淋巴细胞凋亡具有一定程度的关联性,为进一步深入研究提供了有益的线索。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血T淋巴细胞凋亡检测的临床价值

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血CD4+、CD8+T细胞凋亡水平与肺功能的相关性。方法采用流式细胞术测定30例COPD缓解期患者、30例COPD急性期患者及20名健康体检者外周血CD4+和CD8+T细胞凋亡水平,与第1秒用力呼出量占预计值百分比(FEV1%)和FEV1/用力肺活量(FVC)水平作相关分析。结果 COPD患者CD4+T细胞凋亡水平较健康对照组明显升高(P<0.01),其中急性期显著高于缓解期(P<0.05);COPD患者CD8+T细胞凋亡水平明显低于健康对照组(P<0.01),其中急性期明显低于缓解期(P<0.05)。CD4+T细胞凋亡率与FEV1%、FEV1/FVC呈负相关(P<0.01);CD8+T细胞凋亡率与FEV1%、FEV1/FVC呈正相关(P<0.01)。结论 CD4+、CD8+T细胞凋亡水平与肺功能具有密切相关性,其水平变化可作为监测COPD患者病情的重要指标。

梅毒患者外周血T细胞亚群的变化及与凋亡的关系

利用荧光单克隆抗体标记,Annexin V凋亡检测试剂盒,结合流式细胞术,检测梅毒患者外周血中Th(CD4+)细胞和Tc(CD8+)T细胞比例变化,及Th细胞凋亡情况。结果:二期梅毒患者外周血中Th细胞比例和Th/Tc比值显著降低,而Tc细胞比例显著升高;一期和二期梅毒患者,CD4+Th细胞凋亡比例明显升高。患者外周血Th细胞比例与Th细胞凋亡率之间呈显著负相关(r=-0.338,P=0.021)。