炎症性肠病患者外周血单个核细胞细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的表达

背景:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)4是一种重要的免疫细胞共刺激分子,主要表达于活化的T淋巴细胞,对T细胞的激活起抑制作用。目的:通过检测炎症性肠病(IBD)患者外周血单个核细胞表面CTLA4的表达,探讨CTLA4在IBD发病中的作用和功能。方法:将18例活动性溃疡性结肠炎(UC)、4例活动性克罗恩病(CD)患者以及21名健康对照者外周血单个核细胞分离后,以流式细胞仪检测细胞表面CTLA4、CD4+和CD8+的表达。结果:自然状态下,UC和CD患者CD4+CTLA4+表达显著高于对照组(8.2%±4.7%对1.4%±1.3%,P<0.001;4.3%±2.9%对1.4%±1.3%,P=0.011);CD8+CTLA4+表达亦显著高于对照组(9.1%±7.2%对0.9%±0.3%;8.7%±3.5%对0.9%±0.3%,P均<0.001)。经植物血凝素(PHA)刺激后,IBD患者和对照组外周血单个核细胞CTLA4的表达均增加;CD组CD8+CTLA4+表达显著高于对照组(35.0%±10.9%对18.1%±10.1%,P=0.005)。结论:活动性UC和CD患者外周血单个核细胞CTLA4表达增强,提示T细胞激活第二信号通路B7/CD28/CTLA4在IBD的发病过程中起重要作用。

慢性肝炎患者外周血单个核细胞Fas抗原及T淋巴细胞亚群的检测意义

[目的 ]探讨Fas抗原系统和T淋巴细胞亚群在慢性肝炎发病机制中的作用及意义。 [方法 ]提取患者外周血单个核细胞 ,应用流式细胞术检测Fas抗原、CD3+ 、CD4 + 、CD8+ ,进行统计学方差分析。共检测 2 5例慢性肝炎患者 ,其中慢性乙型肝炎 (CHB)患者 1 6例 ,脂肪性肝炎患者 9例。[结果 ]2 5例慢性肝炎患者总的Fas抗原及 1 6例慢性乙型肝炎和 9例脂肪肝患者的Fas抗原阳性率分别为 (4 7.35± 6 .1 4 ) %、(4 8.31± 6 .6 8) %和 (4 7.1 9± 8.71 ) % ,明显高于对照组 (2 5 .0±7.0 7) % ,P均 <0 .0 1 ,有显著性差异。各组慢性肝病之间Fas抗原含量无显著性差异。对T淋巴细胞亚群的分析 ,慢性乙型肝炎组CD3+ 与对照组呈显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,其余均无差异。 [结论 ]慢性肝炎患者 ,包括CHB及脂肪性肝炎 ,外周血单个核细胞Fas抗原表达明显增高 ,同时外周血T淋巴细胞数量 (CD3+ )

类风湿关节炎患者外周血单个核淋巴细胞IL-21受体表达及意义

[目的]检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体(IL-21R)表达,探讨其在疾病发生过程中的免疫病理作用。[方法]收集26例RA患者和18例健康成人对照外周血标本,分离外周血单个核淋巴细胞,利用流式细胞仪检测IL-21R在外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表面表达,分析它们在疾病发展过程中的作用。[结果]RA患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表达IL-21R水平比健康者比较显著升高(P﹤0.05)。RA患者接受有效的药物治疗,待症状控制后,分析发现RA患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞、NK细胞IL-21R水平呈明显下降(P﹤0.05)。[结论]RA患者外周血单个核淋巴细胞表达IL-21R水平明显升高,提示IL-21R在关节炎症病变过程中起着重要作用,可能诱导关节滑模炎症病变,参与关节滑膜组织及全身免疫病理损伤。

外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体表达与类风湿关节炎的相关性

目的探讨外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体(IL-21R)在类风湿关节炎(RA)发生过程中的作用。方法收集32例RA患者(观察组)和22例健康成人(对照组)外周血标本,分离外周血单个核淋巴细胞,采用流式细胞仪检测CD4+、CD8+细胞、B细胞和NK细胞表面IL-21R的表达。结果观察组IL-21R表达水平明显高于对照组(P<0.05)。药物治疗症状控制后,IL-21R表达水平明显下降(P<0.05)。结论RA患者外周血单个核淋巴细胞表达IL-21R水平明显升高,提示IL-21R在RA的病情进展中起重要作用,其机制可能为诱导关节滑膜炎症病变、参与关节滑膜组织及全身的免疫病理损伤。

检测外周血单个核淋巴细胞IL-21受体表达与类风湿关节炎的关系探讨

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体(IL-21R)表达的检测在RA发生过程中的免疫病理作用。方法:收集32例RA患者和22例健康成人外周血标本,分离外周血单个核淋巴细胞,利用流式细胞仪检测在外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表面IL-21R的表达,分析它们在疾病发展过程中的作用。结果:RA患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表面IL-21R的表达水平与健康者比较呈显著升高(P<0.05)。在接受药物治疗症状控制后,再检测RA患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞、NK细胞IL-21R的表达水平呈明显下降(P<0.05)。结论:外周血单个核淋巴细胞表达IL-21R水平在RA患者中明显升高,提示IL-21R在关节炎症的病变过程中可能诱导关节滑膜炎症病变、参与关节滑膜组织及全身的免疫病理损伤作用。

慢性乙型肝炎患者外周血单个核淋巴细胞不同洗涤方法对HBVDNA检测的影响

目的 :慢性乙型肝炎患者外周血单个核淋巴细胞 (Peipheralbloodmononuclearcells,PBMC)不同洗涤方法对HBVDNA检测的影响。方法 :淋巴细胞分离液常规密度梯度法分离 1例血清HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者PBMC后 ,分别采用常规洗涤法和改良洗涤法 (后者即在常规洗涤法的基础上第 2、 4次洗涤前不重悬细胞 ,直接加入洗液后离心 ) ,计算细胞收获得率和细胞存活率 ,荧光定量PCR法检测 1、 3、 5次洗液样本和细胞样本的HBVDNA ,重复实验 3次。结果 :常规法第 1、 3、 5次洗液样本HBVDNA均阳性 ,改良法洗涤 5次后洗液样本HBVDNA均阴性 ;改良法洗涤的细胞得率和细胞存活率分别为 95 %和 98% ,常规法洗涤的细胞得率和细胞存活率分别为 71%和 83% ;不论常规洗涤法和改良洗涤法收获的PBMC均可检出HBVDNA。结论 :慢性乙型肝炎患者PBMC改良洗涤法优于常规洗涤法 ,适用于PBMC中HBVDNA荧光定量PCR检测。

磁场对淋巴细胞转化率及外周血单个核细胞产生肿瘤坏死因子的影响

磁场对淋巴细胞转化率及外周血单个核细胞产生肿瘤坏死因子的影响于兰★靳彩宁★高福兴★陈新民★许建明★张毅★杨霄鹏★关键词免疫调节磁场淋巴细胞转化率外周血单个核细胞肿瘤坏死因子中国图书资料分类法分类号Ｒ３９２近年来磁疗广泛应用于疾病的预防和治疗。有报道磁...

肾移植患者淋巴细胞亚群及外周血单个核细胞凋亡动态检测

目的 检测肾移植患者外周血淋巴细胞亚群、单个核细胞凋亡情况 ,结合临床诊断及临床表现 ,探讨肾移植患者手术前后淋巴细胞亚群、外周血单个核细胞凋亡及免疫抑制治疗的关系。方法 收集 2例移植患者术前2天 ,术后 2天 ,8天 ,16天外周血 ,利用流式细胞仪进行淋巴亚群及PBMC凋亡检测。结果 与正常参考值相比 ,两例肾移植患者CD3+细胞百分率 (6 1.5 4～ 73.14 ) %在正常范围 ,CD3- CD19+ 细胞百分率较高 (11.14～ 2 9.0 6 ) % ,CD3- CD16 +5 6 + 细胞百分率 (3.5 4～ 2 5 .5 0 ) %较低 ;CD4 + 细胞百分率逐渐增加 (30 .4 8～ 4 1.0 6 ) % ;CD8+ 细胞百分率 (2 6 .5 5～ 34.0 8) %则逐渐降低 (31.74～ 2 7.0 2 ) % ;CD4 CD8比值 (0 .96～ 1.5 2 )逐渐升高 ;PBMC凋亡率术前 2天分别为 10 .2 6 %、8.2 8% ,术后 2天分别为 14 .32 %、11.75 %、术后 8天分别为 12 .93%、8.4 2 % ,术后 16天分别为 9.13%、5 .76 %。结论 :在免疫抑制剂与患者免疫系统的综合作用下 ,肾移植患者术后 2天和术后 8天PB MC细胞凋亡率较高 ;CD4

外周血单个核细胞TFAM、GDF-15、淋巴细胞β1-AR的mRNA对近期MACE的预测效能

目的探究外周血单个核细胞(PBMCs)线粒体转录因子A(TFAM)、生长分化因子-15(GDF15)、淋巴细胞β1肾上腺素受体(β1-AR)的mRNA对近期主要心血管不良事件(MACE)的预测效能。方法选取延安大学附属医院2017年4月~2019年10月CHF患者127例作为研究对象,分析外周血指标与心肌重构指标[左心房内径(LAP)、左室后壁厚度(LVPW)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室质量指数(LVMI)、左室重构指数(LVRI)]、LVEF相关性及对MACE的预测价值。结果PBMCs中TFAM、淋巴细胞β1-AR mRNA相对含量与LAP、LVPW、LVEDD、LVMI呈负相关,与LVRI、LVEF呈正相关,GDF-15 mRNA相对含量与LAP、LVPW、LVEDD、LVMI呈正相关,与LVRI、LVEF呈负相关(P<0.05);随访3个月,发生MACE组PBMCs中TFAM、淋巴细胞β1-AR mRNA相对含量低于未发生MACE组,GDF15 mRNA高于未发生MACE组(P<0.05);PBMCs中TFAM、GDF-15、淋巴细胞β1-AR mRNA相对含量联合预测MACE的AUC值为0.889,大于任一指标单独预测。结论CHF患者PBMCs中TFAM、GDF-15、淋巴细胞β1-AR mRNA表达异常,在其病理变化中发挥重要作用,且表达水平与MACE发生关系密切,可能成为CHF新的标志物及治疗靶点。

急性胰腺炎患者外周血单个核淋巴细胞IL-21受体表达及意义

目的分析急性胰腺炎(AP)患者外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体(IL-21R)表达,探讨其在疾病发生过程中的免疫病理作用。方法收集72例AP患者(其中轻型AP52例,重症AP20例)和40例正常健康人外周血标本,分离外周血单个核淋巴细胞,利用流式细胞仪检测IL-21R在外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表面的表达水平,分析它们在疾病发展过程中的作用。结果AP患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表达IL-21R水平比健康者比较显著升高(P<0.05),其中重症AP患者上述细胞IL-21R水平显著高于轻型AP患者。结论IL-21R在AP患者外周血单个核淋巴细胞表达升高,并与病情严重程度具有相关性,提示IL-21R参与胰腺急性炎症损伤过程。

多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型

目的:用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化. 方法:用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞,rhIFN-γ,rhIL-2,Anti- CD3mAb共孵育.分别在第0,4,7,10,13 d计细胞数,并通过流式细胞术检测细胞免疫表型. 结果:大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-γ,IL-2,Anti- CD3mAb共孵育4,7,10,13d,细胞数分别增加2.69±0.9, 14.1±3.7,23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+,CD4+,CD8+ 和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%, (31.5±5.8)%,(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%,(48.0±6.3)%,(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%. 结论:rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞,体外增殖力强,是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.

外周血单个核细胞Toll样受体4和B淋巴细胞刺激因子表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系

目的 探讨外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)和B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达水平与免疫球蛋白(Ig)A肾病患者临床指标的关系。方法 回顾性分析122例IgA肾病患者的临床资料,比较不同外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平患者临床指标,并分析外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与临床指标的相关性。结果 低TLR4水平组和高TLR4水平组间、低BLyS水平组和高BLyS水平组间性别、收缩压、高血压史、低密度脂蛋白(LDL)、血尿酸、血肌酐和尿素氮差异均有统计学意义;Pearson相关性分析结果显示,IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4、BLyS表达水平与收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关(均P<0.05)。结论 外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与IgA肾病患者收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关。

炎症性肠病外周血单个核细胞LncRNA表达谱研究

目的明确炎症性肠病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)的表达谱特征,并明确关键LncRNA与病情指标相关性。方法分离炎症性肠病患者PBMC,以正常志愿者PBMC为对照,提取RNA并进行LncRNA表达谱芯片检测,筛选关键LncRNA并分析其与炎症性肠病病情活动度的相关性。结果溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)组差异表达LncRNA 1 672个、克罗恩病(Crohn’s disease,CD)组差异表达LncRNA 1 048个,2组共有差异表达177个;差异表达中ENSG00000251186.1改变最为明显,在UC组中上调9.4倍、CD组中上调8.9倍;ENSG00000251186.1与UC组患者CRP、ESR及改良Mayo评分均呈正相关关系,与CD组患者的CRP、ESR及CD活动指数也为正相关关系;ROC曲线显示ENSG00000251186.1曲线下面积UC组为0.902 4、CD组为0.903 1。结论炎症性肠病患者外周血单个核细胞LncRNA表达谱出现显著异常,其中ENSG00000251186.1明显上调且与炎症指标、病情活动度密切相关,可能有助于IBD的早期诊断。

流式细胞仪分选外周血CD3^+CD4^+T淋巴细胞方法的建立

首先用Percoll连续密度梯度离心法制备外周血单个核细胞,采用流式细胞仪分选CD3+CD4+T淋巴细胞。分选后的细胞通过细胞存活率、细胞纯度鉴定和形态观察对分选方法进行评价。结果显示,Percoll连续密度梯度离心法能很好的制备外周血单个核细胞,分选前CD3+CD4+T淋巴细胞纯度为(51.9±9.6)%,分选后CD3+CD4+T淋巴细胞纯度为(95.9±0.8)%,差异有统计学意义(P<0.01)。分选后的细胞存活率为(95.8±1.2)%,细胞的形态保持完整。

TIPE2、Foxp3、CTLA-4 mRNA在慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)、调节性T淋巴细胞(Treg)功能分子叉头样转录因子3(Foxp3)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达及临床意义。方法选取2012年5月-2016年12月在河北医科大学第三医院门诊及住院的未经抗病毒药物和免疫调节药物治疗的慢性丙型肝炎患者80例,另选取同期健康志愿者45例作为对照。应用实时荧光定量PCR法检测PBMC中TIPE2、Foxp3、CTLA-4 mRNA表达水平,并观察与肝脏血清生化指标及HCV RNA水平的相关性及TIPE2对Foxp3和CTLA-4的影响。计量资料两组间比较采用t检验;计数资料两组间比较采用χ2检验;相关分析采用Pearson相关性检验。结果慢性丙型肝炎患者PBMC中TIPE2 mRNA表达较健康对照组显著降低(0. 564±0. 232 vs 0. 704±0. 165,t=3. 569,P <0. 001); Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA表达较健康对照组明显升高(0. 701±0. 405 vs 0. 527±0. 184,t=2. 725,P=0. 007; 0. 638±0. 211vs 0. 448±0. 134,t=5. 449,P <0. 001)。TIPE2 mRNA表达与ALT、AST、TBil水平及HCV RNA载量均呈负相关(r值分别为-0. 368、-0. 417、-0. 416、-0. 327,P值分别为0. 001、<0. 001、<0. 001、0. 003); Foxp3 mRNA表达与TBil水平呈负相关(r=-0. 284,P=0. 011); TIPE2 mRNA表达与Foxp3 mRNA、CTLA-4 mRNA表达均呈正相关(r值分别为0. 461、0. 257,P值分别为<0. 001、0. 021)。结论慢性丙型肝炎患者存在TIPE2基因表达及Treg功能分子Foxp3、CTLA-4 mRNA表达数量和功能的异常,并且与肝细胞损伤程度和病毒复制有一定的关系,TIPE2基因可能通过正性调控Treg介导的免疫反应参与了慢性丙型肝炎的发病过程。

PD-L1联合CTLA-4检测在胸腔积液患者胸腔积液及外周血单个核细胞中的表达及意义

目的分析抗程序性死亡配体-1(PD-L1)联合抗细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)检测在胸腔积液患者胸腔积液及外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其临床意义。方法选择2015年6月—2016年6月上海复旦大学附属闵行医院呼吸内科诊治的胸腔积液患者84例作为研究对象,其中结核性胸腔积液28例,恶性胸腔积液27例,非结核非恶性胸腔积液29例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)检测患者胸腔积液、PBMC中PD-L1、CTLA-4的表达,并分析二者联合检测对恶性胸腔积液的诊断价值。结果与非结核非恶性胸腔积液比较,恶性胸腔积液患者PBMC中PD-L1、CTLA-4 mRNA,胸腔积液中PD-L1、CTLA-4表达含量显著增高,而结核性胸腔积液患者中上述指标则明显降低(P<0.05);胸腔积液、PBMC中PD-L1与CTLA-4的表达均呈显著正相关(r=0.477,0.418,P<0.05);胸腔积液中PD-L1、CTLA-4联合检测敏感度、特异度分别为92.5%、94.7%,均高于胸腔积液脱落细胞及PD-L1、CTLA-4单独检测,亦高于PBMC的敏感度、特异度。结论胸腔积液患者胸腔积液、PBMC中PDL1、CTLA-4的表达与病因有关,可反映局部微环境下的免疫功能状态,联合检测有助于良恶性胸腔积液的鉴别诊断。

氩氦刀冻融的肺癌细胞联合IL-2刺激人外周血单个核细胞免疫功能

观察氩氦刀冻融的肺癌细胞联合IL-2对正常人外周血单个核细胞免疫功能的作用。分离正常人外周血单个核细胞,分别与氩氦冻融的肺癌细胞、IL-2和氩氦冻融的肺癌细胞联合IL-2混合培养,并设空白对照组。分别在第37、1、4天检测培养上清液中IL-12含量及NK细胞、CTL细胞的杀伤活性。结果表明,单用氩氦冻融的肺癌细胞可以轻度增加IL-12含量,但不能增加NK细胞、CTL细胞的杀伤活性;氩氦冻融的肺癌细胞联合IL-2后,可明显提高NK细胞和CTL的杀瘤活性。氩氦冻融的肺癌细胞联合IL-2对增强NK细胞和CTL活性具有协同作用,此种作用可能是通过刺激IL-12分泌增加实现的。

云芝糖肽对健康人外周血淋巴细胞的体外免疫调节作用

目的探讨云芝糖肽在体外对细胞免疫和体液免疫功能调节的可能机制。方法分离健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),分为PBMCs空白组、云芝糖肽20μL与PBMCs共培养组和云芝糖肽40μL与PBMCs共培养组,3组分别于培养24 h、48 h、72 h采用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群的比例变化及T淋巴细胞表面CD3+/HLA-DR+、B淋巴细胞表面CD19+/CD69+表达情况,ELISA方法检测上清液中Ig G水平。结果云芝糖肽与PBMCs共培养组CD4+T细胞比例明显上升(P<0.05),CD4+/CD8+细胞比值明显增高(P<0.05);云芝糖肽20μL与PBMCs共培养组T细胞表面CD3+/HLA-DR+,72 h时表达水平高于24 h(P<0.05);B细胞表面CD19+/CD69+的表达显示从培养24 h到48 h表达升高而在72 h表达减少的趋势;PBMCs与云芝糖肽共培养2组上清Ig G水平均明显高于PBMCs空白组(P均<0.05)。结论云芝糖肽在体外能促进CD4+T细胞比例上升及CD8+T细胞比例下降,提高CD4+/CD8+比值,并增加Ig G分泌,具有一定的免疫调节作用。

趋化因子受体CXCR3及初始/记忆T淋巴细胞在原发性胆汁性肝硬化患者肝脏和外周血中的变化

目的通过研究原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者与非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者外周血和肝脏内淋巴细胞及其活化状态(分子标记:HLADR+CD3+)、初始T细胞(CD45RA)、记忆T细胞(CD45RO)及趋化因子受体CXCR3,了解肝内淋巴细胞活化状态及其影响因素。方法流式细胞法检测两种肝病患者外周血和肝内淋巴细胞分子标记CD3、CD4、CD8、HLADR+CD3+、CD45RA、CD45RO、CXCR3,进行统计分析。结果 PBC患者在外周血中以CD4+T淋巴细胞为主,肝内浸润淋巴细胞CD8+T和CD4+T淋巴细胞无明显差异;肝内与外周血比较:CD4+T淋巴细胞明显减少,CD4/CD8比例明显降低,HLADR+CD3+T淋巴细胞差异无显著性,CD45RA明显低于外周血,CD45RO则差异无显著性,CXCR3高于外周血中。与NASH患者比较:PBC患者肝内CD4+T细胞增多,CD4/CD8上升,HLADR+CD3+增高,CD45RO、CD45RA减少,CXCR3增多;外周血T淋巴细胞及HLADR+CD3+两组间差异无显著性,CD45RA减少,CXCR3两组间差异无显著性。结论 PBC患者外周血淋巴细胞及其活化状态与肝内免疫状况有关;肝内CD4+T淋巴细胞较NASH患者增多,提示CD4+T的活化和增殖是PBC发生和发展的关键环节;记忆性T淋巴细胞数量(CD45RO)控制在一定范围内可能是自身免疫反应得以不断进行的原因;CXCR3与T淋巴细胞向肝脏定向迁徙有关。