达格列净对ApoE^(-/-)小鼠单核巨噬细胞系统及动脉粥样硬化的影响

目的:研究达格列净对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的影响,探讨其抗AS作用的可能机制。方法:16只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饮食喂养8周形成AS模型后,随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组予达格列净干预,对照组予同等剂量的生理盐水,两组干预4周后取材。油红O染色检测主动脉及主动脉瓣AS斑块面积比例;流式细胞术分析循环中单核细胞亚群的比例(Ly6G-CD11b+Ly6C hi和Ly6G-CD11b+Ly6C lo);免疫荧光染色和共聚焦显微镜成像检测斑块内的巨噬细胞和增殖的巨噬细胞(F4/80和Ki67双阳性细胞);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。结果:实验组与对照组比较有降低主动脉及主动脉瓣斑块负荷的作用,降低循环中Ly6C^(hi)单核细胞比例,降低斑块内增殖巨噬细胞比例,降低LDL-C水平,且具有升高HDL-C作用。结论:达格列净可减轻ApoE^(-/-)小鼠AS负荷的作用,可能与调节单核细胞亚群和血脂代谢相关。

慢性丙型肝炎患者CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞的表达及其与肝纤维化严重程度的关系

目的探讨慢性丙型肝炎患者CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞的表达及其与肝纤维化严重程度的关系。方法选取2018年4月—2022年11月期间公安县人民医院诊治的慢性丙型肝炎患者83例,同期健康人64例,比较两组临床特征、肝组织中CD163表达、血清CD163浓度、CD14^(+)细胞比例以及表达不同种类细胞因子的CD14^(+)细胞比例。结果慢性丙型肝炎组(n=82)ALT水平和AST水平分别为(84.6±9.1)U/L和(69.3±7.2)U/L,显著高于健康对照组(n=64)的(28.4±1.7)U/L和(22.5±6.9)U/L(P<0.05);慢性丙型肝炎患者中F<2者CD163^(+)细胞数量、血清CD163浓度和CD14^(+)细胞比例分别为38.2±4.7、(73.6±2.1)μg/L和(73.7±3.2)%,显著高于健康对照组的12.5±1.3、(50.1±2.6)μg/L和(61.0±8.4)%,F≥2患者CD163^(+)细胞数量、血清CD163浓度和CD14^(+)细胞比例分别为74.9±8.0、(95.4±9.8)μg/L和(79.2±5.5)%,显著高于健康对照组和F<2患者。F<2慢性丙型肝炎患者表达IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的CD14^(+)细胞比例分别为(4.2±1.2)%、(3.8±1.1)%、(3.8±1.0)%、(3.7±1.3)%、(4.0±1.4)%和(6.7±3.6)%,显著高于健康对照组的(0.9±0.1)%、(1.1±0.2)%、(1.8±0.4)%、(1.6±0.6)%、(1.7±0.7)%和(4.6±2.1)%,F≥2患者表达IL-2、IFN-γ、IL-8和TNF-α的CD14^(+)细胞比例分别为(2.2±0.8)%、(2.1±0.5)%、(5.6±2.0)%和(6.9±3.2)%,显著高于健康对照组,表达IL-8的CD14^(+)细胞比例为(5.6±2.0)%,显著高于F<2患者。结论CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞参与了慢性丙型肝炎患者肝纤维化的进程。

牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对牛外周血单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响

探索奶牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对体外培养的单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响。通过体外培养牛外周血单核巨噬细胞(BMC-7),利用牛乳腺炎粪肠球菌野生型菌株(BME1708)和cylA基因敲除突变株(BME1708ΔcylA)按照不同时间梯度侵染BMC-7,利用台酚蓝染色显微镜观察法,统计不同时间BMC-7对BME1708和BME1708ΔcylA的吞噬率和吞噬指数的差异。结果表明随着时间的延续,吞噬率和吞噬指数存在动态变化,至48 h时BMC-7对BME1708的吞噬率和吞噬指数分别为25%和2.3,而对BME1708ΔcylA的吞噬率和吞噬指数分别为50%和5.5。随着时间的进一步延续,巨噬细胞开始死亡。说明溶血素cylA基因阳性的粪肠球菌菌株对巨噬细胞的吞噬作用具有一定的负调控作用,并且在巨噬细胞内的存活率相对高,在单核巨噬细胞内存在一定的“内生”现象,这一现象可能是由该致病菌引起的牛乳腺炎常反复、难治愈的分子机制之一。

大片形吸虫外泌体对水牛外周血单核巨噬细胞极化的影响

为探讨大片形吸虫外泌体(FgExo)在宿主免疫调节方面的作用,本研究采用聚合物沉淀法和超速离心法从大片形吸虫分泌排泄产物(FgESP)中分离得到FgExo;采用荧光定量PCR(qPCR)法检测不同浓度的FgESP或FgExo作用于水牛外周血单核巨噬细胞(Mφ)后γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)的转录水平;根据qPCR结果选择50μg/mL FgExo(+5μg/mL脂多糖)、200μg/mL FgESP(+5μg/mL脂多糖)作为试验组,以PBS为阴性对照组、脂多糖为阳性对照组,分别作用于Mφ后采用qPCR检测Mφ分型相关基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD86、精氨酸酶2(Arg-2)、CD206的转录水平;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌水平。结果显示:FgExo和FgESP可显著上调MφIL-10 mRNA的转录水平,显著抑制IFN-γmRNA的转录水平;显著上调M2型Mφ标记物CD206及相关因子Arg-2、TGF-β1的表达,显著抑制M1型Mφ标记物CD86及相关因子iNOS、IL-1β的表达。本研究结果表明,FgExo和FgESP均能够使水牛外周血单核巨噬细胞向M2型极化,利于大片形吸虫在水牛体内生存。

Lyz2+单核-巨噬细胞在多囊卵巢综合征小鼠子宫中的谱系示踪

目的在骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠上建立多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型,通过谱系示踪方法揭示巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中的分布特点。方法利用Cre/LoxP系统构建骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠,分别构建Td-tomato^(flox/flox)小鼠和Lyz2^(Cre)工具小鼠,使两者进行交配,得到Lyz2^(Cre)Tdtomato^(flox/flox)小鼠,其骨髓来源单核-巨噬细胞均被标记上红色荧光蛋白(Td-tomato),再通过来曲唑联合高脂饲料构建PCOS小鼠模型,通过免疫荧光多标结合激光共聚焦共定位方法检测PCOS小鼠子宫中巨噬细胞的分布及数量。结果成功构建了骨髓来源单核-巨噬细胞谱系示踪小鼠(Lyz2^(Cre)Td-tomato^(flox/flox)),并在谱系示踪小鼠上成功构建了PCOS小鼠模型。PCOS小鼠子宫的HE染色结果显示结构异常;免疫荧光多重标记检测发现,在PCOS小鼠子宫中巨噬细胞分布在子宫外膜、肌层、内膜,且M2型巨噬细胞数量增多(P<0.05)。结论本研究构建了肥胖型PCOS小鼠模型,发现骨髓来源的M2型巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中增多。

依达拉奉对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用。方法 以脂多糖诱导RAW264.7细胞,复制炎性细胞模型。采用CCK-8法检测EDA的细胞毒性作用。实验分为空白组(等体积培养基)、模型组(等体积培养基)、给药组(40μg/mL EDA)。采用Griess法检测细胞中一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞中JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平。结果 与0μg/mL比较,20,40,80,160μg/mL EDA处理下细胞存活率无显著变化(P <0.05)。与模型组比较,给药组细胞中NO,PGE2,IL-1β,IL-18,TNF-α,ROS水平均显著降低(P <0.05);IL-1β与IL-18 mRNA及蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3均显著降低(P <0.05)。结论 EDA可能通过抑制JAK2/STAT3通路的激活而抑制RAW264.7细胞的炎性反应。

急性脑梗死患者入院时Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的相关性

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者入院时同型半胱氨酸(Hcy)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)水平与单核巨噬细胞极化的相关性。方法选择2020年8月至2022年8月该院收治的107例ACI患者为病例组,另选取同期体检健康者50例为对照组,比较2组入院时血清Hcy、HMGB1、TLR4水平,比较2组单核巨噬细胞极化情况[M1型细胞比例、M2型细胞比例、M1/M2比值、M1型极化标志物(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α)、M2型极化标志物(白细胞介素-10、转化生长因子-β)],分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的关系,分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与ACI患者预后的关系。根据ACI患者预后情况,将患者分为预后良好组和预后不良组,比较其血清Hcy、HMGB1、TLR4水平。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Hcy、HMGB1、TLR4对ACI预后的预测效能。结果与对照组比较,病例组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,病例组M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α水平明显升高(P<0.05),白细胞介素-10、转化生长因子-β水平明显降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清Hcy、HMGB1、TLR4水平与M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平呈正相关(P<0.05),与白细胞介素-10、转化生长因子-β水平呈负相关(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Hcy、HMGB1、TLR4联合预测ACI预后的效能较高,其曲线下面积、灵敏度、特异度依次为0.840、77.80%、80.00%。结论Hcy、HMGB1、TLR4在ACI患者外周血中呈高表达,其水平与单核巨噬细胞极化及预后关系密切,有望成为ACI临床诊治的生物标志物。

肿瘤相关巨噬细胞来源的外泌体在消化系统肿瘤中的作用机制及治疗进展

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境中的重要细胞群,分泌多种细胞因子促进肿瘤进展。肿瘤相关巨噬细胞通过向肿瘤细胞递送包含蛋白质、脂质和多种类型核糖核酸的外泌体促进肿瘤增殖、侵袭、转移、血管生成,并增强肿瘤细胞的耐药性。本研究综述肿瘤相关巨噬细胞分泌的外泌体对消化系统肿瘤的调节作用及其分子机制,并从外泌体角度介绍防治消化系统肿瘤的策略,为临床药物的开发提供新思路。

结直肠癌化疗前后循环单核细胞/巨噬细胞亚群变化分析

目的通过分析外周血中单核细胞/巨噬细胞亚群的表型和占比,探究结直肠癌患者中循环单核细胞/巨噬细胞亚群的分布变化,以及化疗对单核细胞/巨噬细胞亚群分布的影响,并探究中间型单核细胞和M2型巨噬细胞评分与肿瘤进展和预后的相关性。方法收集2023年4—8月于北京朝阳区三环肿瘤医院就诊的18例结直肠癌患者(包括12例初治患者和6例后线接受化疗的患者,结直肠癌组)及5例健康志愿者(健康对照组)的外周血样本。分析健康志愿者、化疗前结直肠癌患者和化疗后结直肠癌患者循环单核细胞/巨噬细胞亚群的分布情况。使用标志基因表征肿瘤组织中中间型单核细胞和M2型巨噬细胞,并计算免疫细胞标志基因评分与肿瘤进展的关系。利用多因素回归分析和生存分析探究中间型单核细胞和M2型巨噬细胞评分与患者预后的相关性。结果与健康对照组相比,结直肠癌组患者外周血中M2型巨噬细胞占比显著增加(P<0.05)。相比结直肠癌Ⅲ期组患者,结直肠癌Ⅳ期组患者的中间型单核细胞的比例显著增加(P<0.05),且化疗显著增加了结直肠癌患者循环中间型单核细胞的频率(P<0.05)。中间型单核细胞和M2型巨噬细胞评分升高与患者肿瘤进展呈现相关。生存分析和多因素Cox回归分析显示,中间型单核细胞和M2型巨噬细胞高评分组的结直肠癌患者总生存时间缩短,提示这些评分可以作为结直肠癌患者独立预后因素。结论流式细胞术揭示结直肠癌患者循环M2型巨噬细胞比例显著增加,且化疗能够提升中间型单核细胞的比例。多因素回归分析和生存分析结果表明,中间型单核细胞和M2型巨噬细胞的评分与结直肠癌患者的进展和预后密切相关。

单核–巨噬细胞调控脂质代谢的研究进展

脂质代谢是一个复杂的生理过程,涉及营养调节、激素调节和稳态。脂质代谢紊乱和脂质代谢相关疾病给社会和个人带来巨大的负担,然而这些疾病的具体发病机制尚未明确。免疫代谢领域的发展,揭示了慢性代谢性疾病中复杂的免疫学机制,为这些疾病的治疗开创了很多潜在的新型治疗靶点。单核–巨噬细胞是目前免疫代谢领域中涉及研究最广泛的免疫细胞,其在脂质稳态和脂质代谢紊乱相关疾病中都发挥着重要作用。本文总结了单核–巨噬细胞在调控脂质代谢和促进脂质代谢紊乱中的机制,旨在寻找全新的脂质代谢相关疾病的治疗靶点。

冠心病患者外周血单核细胞源性巨噬细胞清道夫受体活性变化及银杏叶提取物的干预作用

目的观察冠心病患者外周血单核细胞 (peripheralbloodmonocyte ,PBMs)转化为巨噬细胞清道夫受体活性及血清炎性因子的变化及银杏叶提取物 (Gingkobilobaextract,GBE)对清道夫受体活性的影响 ,探讨炎性因子水平与清道夫受体活性关系及GBE稳定粥样硬化斑块的可能机制。方法 97例血脂正常的冠心病患者分为稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组、急性心肌梗死组 ,2 9名健康人作为对照组。测定所有观察对象血清C反应蛋白 (CRP)、可溶性细胞间黏附分子 1(solubleintercellularadhesionmolecule 1sICAM 1)、可溶性血管细胞黏附分子 1(solublevascularcelladhesionmolecule 1,sVCAM 1)水平 ;并在体外分离培养PBMs转化为巨噬细胞 ,观察GBE对其表达清道夫受体的影响。结果巨噬细胞清道夫受体活性及血清CRP、sICAM 1、sVCAM 1水平 ,急性心肌梗死组 >不稳定性心绞痛组 >稳定性心绞痛组 >对照组。GBE能下调冠心病患者PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性。结论冠心病患者PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性与CRP、sICAM 1、sVCAM 1呈正相关 ,PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性可作为易损斑块活动程度的监测指标 ;GBE可抑制冠心病患者血PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性。

恒河猴外周血单核巨噬细胞体外培养方法的建立

目的 建立一种简单、经济、高效的培养恒河猴外周血单核巨噬细胞（monocyte-derived macrophage,MDM）的方法.方法 用肝素钠抗凝管采集成年恒河猴（Macaca mulatta）全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）.同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清.将猴PBMCs置于CellBIND Surface的96孔（0.8 ×10^6个细胞/孔）或48孔培养板（3×10^6个细胞/孔）中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清（fetal calf serum,FCS）的RPMI 1640培养液培养24 h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7d后观察细胞形态学.分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域.胞体形态多样,多数呈长梭形.用巨噬细胞标记受体（CD14）抗体染色判断细胞纯度.并用细菌内毒素（LPS）刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达.此外,用猴艾滋病毒（SIVmac17E-Br、SIV-mac251）和人-猴嵌合体艾滋病毒（SHIV KU-1）感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制.结果 在含2％猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数（＞85％）猴单核细胞能在24 h内贴壁,体外分化5-7d后,猴巨噬细胞纯度大于96％.相比而言,含较高浓度（4％,8％或10％）猴自体血清或FCS的RPMI 1640培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差.分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子.此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒.结论 含2％猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化.该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段.

一种简单的分离、培养及鉴定小鼠外周血单核巨噬细胞方法的建立

目的在L929条件培养基的作用下体外分离、培养小鼠外周血单核巨噬细胞,并进行鉴定。方法密度梯度离心法分离小鼠外周血单核巨噬细胞,用L929条件培养基培养7 d。采用免疫荧光的方法检测F4/80的表达以及细胞的吞噬作用,用流式细胞术进一步检测细胞吞噬率。结果用L929条件培养基诱导培养7 d后小鼠外周血单核细胞表达F4/80,加入细胞吞噬珠之后,在不同时间点用荧光显微镜可以看到红色荧光颗粒聚集在小鼠外周血单核巨噬细胞核周围,用流式细胞仪检测细胞的吞噬率为24.8%±0.79%。结论该方法是一种简单、易操作的体外分离培养和鉴定小鼠外周血单核巨噬细胞的方法。

COPD患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞Cofilin的表达与其吞噬烟曲霉功能的相关性

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞Cofilin的表达与其吞噬烟曲霉功能的相关性。方法选取2015年7月至2016年5月南方医科大学珠江医院呼吸内科门诊20名COPD患者,其中观察组1(2011版GOLD中A和B组),观察组2(2011版GOLD中C和D组),健康对照组10人。3组行支气管肺泡灌洗术、采取外周血,分别提取AM和MDM,检测各组的AM和MDM对烟曲霉孢子的吞噬能力。运用实时荧光定量(qRT-PCR)和免疫蛋白印迹实验(Western blot)检测3组Cofilin蛋白的表达,比较其差异。结果 3组人群MDM/AM吞噬烟曲霉孢子的菌落数分别为(17±3)个、(16±2)个、(42±3)个(F=73.446,P<0.001),两观察组与健康组差异明显,而两观察组无明显差异。qRT-PCR和Western blot结果显示,两观察组中Cofilin蛋白表达明显高于健康组。结论 COPD患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞吞噬烟曲霉功能降低可能与Cofilin蛋白升高有关。

氧化型低密度脂蛋白在人外周血单核巨噬细胞中的代谢

为探讨氧化型低密度脂蛋白在人外周血单核巨噬细胞中的代谢及其致动脉粥样硬化的机制，使用放射配基法观察了两种低密度脂蛋白在单核巨噬细胞中的代谢情况，并测定了细胞内胆固醇含量的变化。结果发现，人外周血单核巨噬细胞通过受体途径代谢低密度脂蛋白。该受体可饱和，最大结合量（Bmax）为274μg／g细胞蛋白，解离常数为35.7mg／L。低密度脂蛋白经氧化修饰后，人外周血单核巨噬细胞对其结合、摄取和降解均显著增加；与氧化型低密度脂蛋白共同孵育的人外周血单核巨噬细胞内总胆固醇含量明显高于低密度脂蛋白组。以上结果提示，低密度脂蛋白经氧化修饰后在人外周血单核巨噬细胞内的代谢途径发生改变并导致细胞内总胆固醇的堆积，促进了动脉粥样硬化的发生。

人单核细胞和外周血单个核细胞衍生的巨噬细胞极化特性的比较

目的在成功建立巨噬细胞(Mφ)体外培养模型基础上,比较不同来源Mφ的极化特性。方法采用密度梯度离心法和免疫磁珠法体外分离并培养外周血单个核细胞(PBMC),经人重组巨噬细胞集落刺激因子诱导后培养出PBMC Mφ。人单核细胞系THP-1在100 nmol·L^-1佛波酯刺激下分化为THP-1 Mφ。上述两种来源的Mφ分别采用不同的极化因子进行诱导,经50 ng·mL^-1脂多糖+20 ng·mL^-1干扰素-γ诱导形成M1型Mφ(M1 Mφ),经20 ng·mL^-1白细胞介素-4诱导形成M2型Mφ(M2 Mφ)。观察两种来源Mφ的细胞形态,比较两种细胞表面极化标记物(CD86和CD206)和细胞因子[白细胞介素-1β(IL^-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、甘露糖受体C1样蛋白(MRC1)、白细胞介素-10(IL^-10)等]的表达情况。结果两种来源的Mφ经M1极化因子刺激后,TNF-α、IL^-1β的mRNA水平显著上调,CD86表达量增加,与PBMC Mφ相比,THP-1 Mφ中的TNF-α、IL^-1β分泌水平更高;两种Mφ在M2极化因子刺激后MRC1、IL^-10 mRNA水平上调,CD206在PBMC Mφ中表达显著增强,而在THP-1 Mφ中表达没有明显变化。结论THP-1可能更适合进行M1极化的研究,而PBMC可能更适合进行M2极化的研究。

水牛外周血单核巨噬细胞的培养与鉴定

本试验旨在为阐明水牛感染大片吸虫的免疫机理提供单核巨噬细胞材料。经过密度梯度离心分离,贴壁法培养水牛外周血单核巨噬细胞,以MTT法检测培养4、24、48、72、96、120、144、168、192h时贴壁单核巨噬细胞的相对存活数量,结果显示贴壁细胞体外培养72、96、120h时,细胞数量相对稳定,组间差异不显著(P<0.05)。贴壁72h的细胞通过倒置显微镜、瑞氏染色观察,结果显示其具备单核巨噬细胞的典型形态特征;酸性磷酸酶、非特异性酯酶染色阳性率分别为(72.8±0.5)%和(84.6±0.4)%,显示其具备单核巨噬细胞酶化学特性;贴壁细胞表达单核巨噬细胞特异性表面抗原MHCⅡ;墨汁的吞噬率为(87.5±0.6)%,表明该细胞具有单核巨噬细胞的吞噬功能。结果表明贴壁法分离,5%BSA的DMEM培养水牛外周血单核巨噬细胞,培养72h贴壁细胞具备单核巨噬细胞特征,在细胞数量相对稳定期(72、96、120h)可以进行相应的试验研究。

凝血因子Ⅻ诱导外周血单核细胞分化为卵巢癌腹膜内肿瘤相关巨噬细胞的实验研究

目的:探讨凝血因子Ⅻ能否诱导外周血单核细胞(MO)分化为卵巢癌(EOC)腹膜微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。方法:分离正常女性外周血MO,在体外经Ⅻ因子刺激,流式荧光激活细胞分选技术(FACS)检测刺激后CD14、CD68和CD163表达的比例;ELISA检测TNF-α、IL-4、IL-8、TGF-β、IL-10、MMP2等因子的表达;Real-timePCR检测IL-10、IL-8、CCL18、CCR2、TGF-β、CXCR1及CXCR2等细胞因子及相关受体mRNA的表达,添加Ⅻ因子抑制物-C1酯酶抑制剂(C1-INH)后检测相应mRNA转录变化。结果:经Ⅻ因子刺激后,MO表面CD14,CD163表达比例上调[CD14:(57.025±11.135)%,CD163:(1.09±0.21)%],与阴性对照组[CD14:(45.2±5.24)%,CD163:(0.7±0.08)%]相比有统计学差异(P<0.05);经Ⅻ因子刺激后MO分泌IL-8,IL-10及TGF-β分泌表现出时间依赖性,IL-8及TGF-β于刺激后12h分泌达到高峰,IL-10分泌高峰为刺激后3h;刺激后IL-8,IL-10,CXCR2,CCR2以及CCL18mRNA的表达上调,添加C1-INH后,相应mRNA的转录水平下调。结论:凝血因子Ⅻ能诱导外周血MO分化成表型为CD14highCD163highIL-10highCCL18highIL-8high的单核巨噬细胞,类似TAM特征的巨噬细胞亚型,Ⅻ因子可能参与EOC腹膜微环境中浸润的MO分化,从而调控EOC的腹膜转移。

罗格列酮对急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ在调节急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1中的作用。方法用不同浓度罗格列酮干预急性冠状动脉综合征患者和对照者单核细胞源性巨噬细胞,然后测定各组上清液中基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度及单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。结果干预后,急性冠状动脉综合征组及对照组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达上调,表达强度与罗格列酮浓度呈正变关系;基质金属蛋白酶9表达下调,在急性冠状动脉综合征组其下调程度与罗格列酮浓度呈反变关系;组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达无明显变化。结论罗格列酮干预可上调单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达,下调基质金属蛋白酶9表达,在急性冠状动脉综合征组尤其明显,对组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达无明显影响;可能存在稳定动脉粥样斑块的作用。

牛外周血单核巨噬细胞的分离、培养与鉴定

试验旨在为深入研究单核巨噬细胞的生物学特性和免疫学功能提供材料。应用牛淋巴细胞分离液从牛外周血中分离牛外周血单个核细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640营养液培养5d,在倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14。结果表明,获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型。通过形态学观察和流式细胞术鉴定可知,该试验成功获得了牛外周血单核巨噬细胞。