不同类型老年冠心病患者外周血单核细胞程序性死亡因子配体2的表达及与血清超敏C反应蛋白、白细胞介素6的相关性

目的探讨不同类型老年冠心病(CHD)患者外周血单核细胞程序性死亡因子配体(PD-L)2的表达情况及其与血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6等炎性因子的联系。方法老年CHD患者112例,其中急性心肌梗死(AMI)患者34例,不稳定型心绞痛(UAP)患者41例,稳定型心绞痛(SAP)患者37例,同时选取体检的健康人33名作为对照组,检测各组PD-L2、hs-CRP、IL-6以及IL-8表达水平。结果 AMI组PD-L2蛋白表达水平明显高于其他组,而对照组最低;AMI组血清hs-CRP、IL-6和IL-8水平明显高于其他组(P<0.05);SAP组和对照组血清hsCRP、IL-6和IL-8差异无统计学意义(P>0.05);PD-L2表达水平与hs-CRP、IL-6表达水平呈正相关(P<0.05),而与IL-8表达水平无相关性(P>0.05)。结论老年CHD患者外周血单核细胞PD-L2表达水平明显升高,可能促进了血清hs-CRP、IL-6的分泌。

程序性死亡因子配体2在不同类型冠心病患者外周血单核细胞中的表达

目的探讨不同类型冠心病患者外周血单核细胞上程序性死亡因子配体2(CD273/PD-L2)的蛋白以及mRNA表达水平。方法将81例行冠状动脉造影的患者根据造影结果及临床表现分为急性冠脉综合征(ACS)组36例,稳定型心绞痛(SAP)组25例,对照组20例。流式细胞仪检测外周血单核细胞CD273+细胞百分率,RT-PCR检测其mRNA表达。结果与对照组比较,SAP及ACS组患者外周血单核细胞上CD273蛋白及mRNA表达均升高,以ACS组为著(P<0.01)。结论冠心病患者外周血单核细胞CD273蛋白和mRNA表达水平明显升高。

阻断程序性死亡配体-1改善糖尿病脓毒症小鼠免疫状态并对肾脏起保护作用

目的探讨阻断程序性死亡配体-1(PD-L1)对糖尿病脓毒症小鼠免疫状态的改变及肾功能保护的可能机制。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为四组:非糖尿病鼠假手术组(Sham组)、糖尿病鼠假手术组(DMS组)、糖尿病鼠脓毒症模型组(DMCLP组)和PD-L1抗体治疗组(anti-PD-L1组),每组6只。采用高糖高脂饮食喂养联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射构建糖尿病小鼠模型,模型建立后继续饲养28 d,盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,PD-L1抗体治疗组于小鼠CLP后1 h腹腔注射抗PD-L1抗体50μg/只。24 h后采用流式细胞术观察各组小鼠经典单核细胞亚型及其表面组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10表达,全自动生化检测仪检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织损伤情况。结果与Sham组和DMS组比较,DMCLP组小鼠经典单核细胞(Ly6C hi单核细胞)百分比明显增加,其表面MHCⅡ表达明显减少,外周血炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10水平升高,BUN和SCr水平明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05);肾脏病理损害加重。与DMCLP组比较,anti-PD-L1治疗组小鼠Ly6C hi单核细胞百分比减少,其表面MHCⅡ表达明显增加,外周血炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10水平下降,BUN和SCr水平降低,差异有统计学意义(均P<0.05);肾脏病理损害减轻。结论PD-L1抗体通过改善经典单核细胞功能而改变糖尿病脓毒症小鼠免疫状态,进而对肾脏起保护作用。

细胞程序性死亡-配体1基因启动子区rs10815225多态性与结直肠癌的关联研究

目的探讨位于细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)基因启动子区的rs10815225多态性与结直肠癌的相关性。方法直接测序法分析215例结直肠癌患者和236例体检健康者rs10815225多态性,定量PCR检测65例结直肠癌组织中PD-L1 mRNA的表达变化。结果与GG基因型相比,CG基因型显著降低了结直肠癌的发病风险(OR=0.48,95%CI 0.28~0.83,P=0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示,与rs10815225G等位基因相比,rs10815225C对应的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。基因型—表型结果显示,携带rs10815225CG基因型结直肠癌患者中PD-L1 mRNA表达明显低于GG基因型携带者(P<0.05)。结论PD-L1基因启动子区rs10815225CG基因型可能通过降低基因转录活性和PD-L1 mRNA表达,从而降低中国汉族人群结直肠癌的发病风险。

外周血单核细胞PD-L2分子在系统性红斑狼疮中的应用

目的探讨外周血单核细胞(PBMC)程序性死亡配体-2(PD-L2)分子在系统性红斑狼疮(SLE)中的应用。方法回顾性分析2019年1月至2020年1月萍乡市人民医院收治的30例SLE患者临床资料,将SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分>5分的15例活动期狼疮性肾炎患者纳入活动期组,将SLEDAI评分≤5分的15例缓解期狼疮患者纳入缓解期组,并选取同期于萍乡市人民医院接受治疗的10例类风湿关节炎(RA)患者作为活动期阳性对照纳入RA组及接受体检的10例健康志愿者纳入正常对照组。所有入选者均接受PBMC的PD-L2分子检测,分析PBMC的PD-L2分子的表达水平在SLE患者的应用价值。结果不同性别、年龄、体重的SLE患者PD-L2分子表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);活动期组患者PD-L2分子表达水平高于缓解期组患者与正常对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);活动期组患者PD-L2分子表达水平与RA组患者比较,差异无统计学意义(P>0.05);Pearson相关性分析发现,SLE患者SLEDAI评分与PD-L2分子表达水平呈正相关(r=0.946,P=0.000);受试者工作曲线结果显示,PD-L2分子表达水平预测SLE患者处于活动期的曲线下面积为0.820,具有较高的预测价值。结论PBMC的PD-L2分子表达水平与SLE患者病情活动程度密切相关,可辅助临床评估病情严重程度,为临床制定治疗方案提供有效参考。

节拍化疗联合程序性死亡因子1/程序性死亡因子配体-1抑制剂治疗Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌合并2型糖尿病患者疗效研究

目的探讨节拍化疗联合程序性死亡因子1(PD-1)/程序性死亡因子配体-1(PD-L1)抑制剂治疗Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌合并2型糖尿病患者的临床疗效。方法选取自2019年1月至2021年1月南通大学附属海安医院收治的Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌合并2型糖尿病患者80例为研究对象。采用随机数字表法将患者分为单纯组和联合组,每组各40例。单纯组患者接受节拍化疗,联合组患者接受节拍化疗联合PD-1/PD-L1抑制剂治疗,比较两组患者的临床疗效、血清学指标、生存质量、癌因性疲乏以及不良反应发生情况。结果联合组患者的临床治疗总有效率为82.5%(33/40),明显高于单纯组的50.0%(20/40),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)水平较治疗前下降,且联合组患者CEA、CA125水平明显低于单纯组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的卡氏评分(KPS)较治疗前增加,癌因性疲乏评分较治疗前降低,且联合组患者KPS评分高于单纯组,癌因性疲乏评分低于单纯组,差异均有统计学意义(P<0.05)。单纯组和联合组患者的不良反应发生率分别为15.0%(6/40)和20.0%(8/40),两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论节拍化疗联合PD-1/PD-L1抑制剂治疗Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌合并2型糖尿病患者的疗效较佳,能改善患者生活质量,且安全性较好。

木犀草素对宫颈癌大鼠外周血T细胞亚群及PD-1/PD-L1通路的影响

目的:探究木犀草素对宫颈癌(CC)大鼠程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)通路蛋白表达及外周血T细胞亚群的影响。方法:取雌性SD大鼠,在左侧腋窝处皮下注射人宫颈癌HeLa细胞悬液构建CC模型,将造模成功的40只大鼠随机分为模型组(CC)、木犀草素低(5 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组;另取10只雌性SD大鼠,在左侧腋窝处皮下注射等量生理盐水,作为空白对照组(Control)。各组于造模成功后开始给药,木犀草素低、中、高剂量组经腹腔注射给予相应剂量药物,2次/d,共30 d,Control组和CC组经腹腔注射等量生理盐水。各组大鼠末次给药12 h后,处死大鼠,测量大鼠体质量,剥取瘤体,测量移植瘤体积及瘤重,并计算抑瘤率,取肿瘤组织,ELISA检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)含量及外周血中IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)含量;取大鼠外周血,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD4^(+)T、CD8^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)T百分比,计算其比值;Western blot法检测外周血单个核细胞中PD-1、PD-L1蛋白表达。结果:与Control组相比,CC组大鼠瘤体体积及质量、肿瘤组织VEGF含量、外周血T细胞亚群CD4^(+)CD25^(+)T百分比、IL-10和TGF-β含量、外周血单核细胞中PD-1、PD-L1蛋白表达升高(P<0.05),大鼠体质量、外周血T细胞亚群CD4^(+)T及CD8^(+)T比例降低(P<0.05);与CC组相比,木犀草素低、中、高剂量组大鼠瘤体体积及质量、肿瘤组织VEGF含量、外周血T细胞亚群CD4^(+)CD25^(+)T百分比、IL-10和TGF-β含量、外周血单核细胞中PD-1、PD-L1蛋白表达降低(P<0.05),大鼠体质量、抑瘤率、外周血T细胞亚群CD4^(+)T、CD8^(+)T占比均升高(P<0.05),且木犀草素各剂量组上述指标呈剂量依赖性。结论:木犀草素可能通过抑制CC模型大鼠外周血PD-1、PD-L表达,逆转CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞抑制状态,提高机体免疫功能发挥抗肿瘤效应。

脓毒症患者外周血单核细胞PD-L1/PD-1表达及临床意义

目的观察脓毒症患者外周血单核细胞(PBMC)的程序性细胞死亡因子-1(programmed cell death-1,PD-1)及其配体(programmed cell death-1 ligand,PD-L1)表达变化并探讨其临床意义。方法收集2015-01~2015-10入住我科的脓毒症患者38例,对照组为健康人15例。采集脓毒症患者外周血,采集时间点为入住ICU第1天、第3-4天、第7-8天,分离PBMC。流式细胞技术检测单核细胞、树突细胞PD-L1表达及CD8^+T淋巴细胞PD-1表达。并记录相应时间点中性粒细胞和淋巴细胞绝对计数。结果与对照组相比,脓毒症患者入住ICU第1天、第3-4天及第7-8天的单核细胞PD-L1表达和CD8^+T淋巴细胞均明显升高(P<0.01);脓毒症患者入住ICU第1天、第3-4天树突细胞PD-L1表达均明显升高(P<0.05)、第7-8天的树突细胞PD-L1表达有升高趋势,但差异没有统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析,树突细胞PDL1表达与中性粒细胞绝对计数呈正相关(r_s=0.272,P=0.018)。结论患者PBMC的PD-L1/PD-1上调表达可能反映脓毒症诱导的免疫抑制。

系统性红斑狼疮患者程序性死亡配体-1表达的初步研究

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达水平,探讨其在系统性红斑狼疮发病过程中的作用。方法密度梯度离心法分离系统性红斑狼疮患者和正常人PBMC,采用半定量RT-PCR检测PBMC的PD-L1mRNA表达。结果系统性红斑狼疮患者活动期组和稳定期组的PD-L1mRNA表达与对照组比较明显增高,差异有显著性(P均<0.05);但PD-L1mRNA表达在系统性红斑狼疮活动期组与稳定期组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞PD-L1mRNA表达水平增加,程序性死亡配体-1可能在系统性红斑狼疮的发病机制中有一定的作用。

1型糖尿病患儿程序性细胞死亡受体配体2白细胞介素-17 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达变化及与血糖代谢的关系

目的探讨1型糖尿病(T1DM)患儿程序性细胞死亡受体配体2(PD-L2)、白细胞介素-17(IL-17)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)表达变化及与血糖代谢的关系。方法将2019年2月—2022年2月湖州市中心医院诊治的52例T1DM患儿设为T1DM组,同期52例健康体检儿童为对照组。检测并对比两组PD-L2、IL-17、Tim-3水平,分析T1DM患儿PD-L2、IL-17、Tim-3水平与血糖代谢的关系及三者之间的相关性,采用logistic回归法分析T1DM发生的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析PD-L2、IL-17、Tim-3水平对T1DM的早期诊断效能。结果T1DM组空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平均高于对照组(均P<0.05)。T1DM组PD-L2、IL-17、Tim-3水平分别为(205.14±85.93)ng/L、(271.83±80.69)ng/L、(0.82±0.35);对照组PD-L2、IL-17、Tim-3水平分别为(104.82±42.26)ng/L、(142.07±38.63)ng/L、(0.34±0.12)。T1DM组PD-L2、IL-17、Tim-3水平均高于对照组(t=7.555,10.460,9.355,均P<0.05)。Pearson相关分析显示:T1DM患儿PD-L2、IL-17、Tim-3水平与FPG、2 h PG、HbA1c水平均呈正相关(均P<0.05),T1DM患儿PD-L2、IL-17、Tim-3水平之间均呈正相关(均P<0.05)。logistic回归分析结果显示:FPG、2 h PG、HbA1c、PD-L2、IL-17、Tim-3均是T1DM发生的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线结果显示:PD-L2、IL-17、Tim-3均对T1DM发病有一定诊断价值,联合诊断时曲线下面积最高,为0.950,联合诊断时灵敏度为96.15%,特异度为82.69%。结论T1DM患儿PD-L2、IL-17、Tim-3水平呈异常高表达,且与血糖代谢有关,三者可能协同促进了T1DM的发生、进展,三者联合早期诊断T1DM的效能较高,可以作为疾病诊治的候选指标。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

PD-L1联合CTLA-4检测在胸腔积液患者胸腔积液及外周血单个核细胞中的表达及意义

目的分析抗程序性死亡配体-1(PD-L1)联合抗细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)检测在胸腔积液患者胸腔积液及外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其临床意义。方法选择2015年6月—2016年6月上海复旦大学附属闵行医院呼吸内科诊治的胸腔积液患者84例作为研究对象,其中结核性胸腔积液28例,恶性胸腔积液27例,非结核非恶性胸腔积液29例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)检测患者胸腔积液、PBMC中PD-L1、CTLA-4的表达,并分析二者联合检测对恶性胸腔积液的诊断价值。结果与非结核非恶性胸腔积液比较,恶性胸腔积液患者PBMC中PD-L1、CTLA-4 mRNA,胸腔积液中PD-L1、CTLA-4表达含量显著增高,而结核性胸腔积液患者中上述指标则明显降低(P<0.05);胸腔积液、PBMC中PD-L1与CTLA-4的表达均呈显著正相关(r=0.477,0.418,P<0.05);胸腔积液中PD-L1、CTLA-4联合检测敏感度、特异度分别为92.5%、94.7%,均高于胸腔积液脱落细胞及PD-L1、CTLA-4单独检测,亦高于PBMC的敏感度、特异度。结论胸腔积液患者胸腔积液、PBMC中PDL1、CTLA-4的表达与病因有关,可反映局部微环境下的免疫功能状态,联合检测有助于良恶性胸腔积液的鉴别诊断。

传染性单核细胞增多症患儿外周血B淋巴细胞中免疫抑制因子的表达及意义

目的观察4种免疫抑制因子〔程序性死亡受体-1(PD-1)、程序性死亡受体-1配体(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、含T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(TIGIT)〕在传染性单核细胞增多症(IM)B淋巴细胞上的表达水平及临床意义。方法以2017年4月—9月湖南省儿童医院收治的IM患者为研究对象(IM组),急性期59例,恢复期34例,20例健康体检儿童为正常对照组。采用流式细胞术分别检测PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在各组B淋巴细胞上的表达水平及急性期表达量与血浆/血清EBV-DNA含量的相关性。结果与正常对照组比较,IM急性期组患者的PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在B细胞上均显著升高〔PD-1:5.22(3.15)%比0.76(0.86)%,PD-L1:7.80(5.29)%比0.87(0.09)%,CTLA-4:4.23(6.21)%比0.52(0.28)%,TIGIT:9.78(5.72)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕。IM恢复期组PD-L1、TIGIT在B细胞上的表达较正常对照组明显升高〔PD-L1:4.43(6.27)%比0.87(0.09)%,TIGIT:6.03(5.46)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕,但其升高程度明显低于急性期组(均P<0.05)。对急性期59例患者抽血查EBV-DNA检测结果为(8.44±2.04)×10~5拷贝/mL。相关性分析显示,IM患者急性期TIGIT在B细胞上表达水平与EBV-DNA含量呈正相关(r=0.371,P=0.006);而其余3个指标则无相关性,PD-1:r=0.049,P=0.723;PD-L1:r=0.068,P=0.625;CTLA-4:r=0.662,P=0.659。结论PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在IM急性期表达上调,随着疾病恢复而表达有所下降,提示在IM发病中有一定作用;同时急性期TIGIT表达水平与血浆/血清EBV-DNA含量高低有关。

MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1的表达

目的:探究MLN4924对肺腺癌A549细胞中程序性死亡-配体1(PD-L1)表达的影响及其可能的内在机制。方法:体外培养A549细胞,按(0、0.25、0.5、0.75、1、5、10μmol/L)MLN4924分组分别处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,作图并计算各组半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测PD-L1的表达,选择最适时间72 h及其IC_(50)用于后续实验。后续实验按(0、0.469μmol/L)MLN4924分组培养72 h,Western blot法检测FBXW2蛋白、肌段同源盒2(MSX2)蛋白、Y-染色体性别决定基因盒2(SOX2)蛋白、PD-L1蛋白表达,qPCR法测定PD-L1 mRNA表达。结果:MLN4924在24、48、72 h的IC_(50)值分别为(1.976、0.647、0.469)μmol/L;与对照组相比,实验组A549细胞PD-L1表达均上调,呈时间-浓度依赖性。与对照组相比,实验组A549细胞FBXW2、SOX2蛋白表达降低,MSX2蛋白、PD-L1 mRNA及蛋白表达均增加。结论:MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1表达。

地西他滨对AML1-ETO阳性急性髓系白血病细胞中PD-L2分子表达的影响

背景复发难治性AML1-ETO融合基因阳性的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后差。程序性细胞死亡蛋白-配体2(programmed cell death-ligand 2,PD-L2)是参与白血病免疫逃逸的重要分子,研究去甲基化药物对白血病细胞中PD-L2分子表达的影响,对于优化用药方案具重要意义。目的分析AML1-ETO融合基因阳性的AML细胞中PD-L2分子启动子区甲基化水平及DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(decitabine,DAC)对其表达的影响。方法以AML1-ETO融合基因阳性AML细胞系Kasumi-1以及两对AML1-ETO沉默(SKNO-1-PGK,SKNO-1-siA/E)或诱导细胞系(U937-MT,U937A/E,U937A/E+ZnSO4)为模型,采用终浓度为2.5μmol/L的DAC或0.1%二甲基亚砜(对照)处理细胞72 h,其中Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系设置0.25μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 3个浓度梯度。采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PD-L2 DNA启动子区特异性位点的甲基化水平;采用逆转录实时定量PCR技术检测PD-L2 mRNA表达水平。结果Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系中PD-L2 DNA启动子区呈高甲基化水平,DAC处理后该区域DNA甲基化水平下降(94.3%vs 90.7%,88.6%vs 83.6%)。2.5μmol/L DAC处理后的Kasumi-1、SKNO-1-PGK、SKNO-1-siA/E、U937A/E细胞中PD-L2 mRNA的相对表达水平均显著高于对照组(P均<0.05);特别是DAC处理后,沉默AML1-ETO基因的细胞系中PDL2表达增加(SKNO-1-siA/E与SKNO-1-PGK相比上升35.80%,P=0.031),过表达AML1-ETO基因的细胞系中PD-L2表达减少(U937A/E+ZnSO4与U937A/E相比下降95.51%,P=0.036)。经DAC处理后的Kasumi-1和SKNO-1-PGK细胞系中,PD-L2 mRNA表达呈浓度依赖性递增(Kasumi-1:r2=0.87;SKNO-1-PGK:r2=0.93。P均<0.05)。结论AML1-ETO阳性AML细胞中PD-L2基因的表达受DNA甲基化调控,AML1-ETO可能参与了PD-L2基因表达的抑制。

敲低lncRNA LINC01296调节PD-L1抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸的机制研究

目的研究敲低长链非编码RNA(lncRNA)LINC01296调节程序性死亡配体-1(PD-L1)抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸的机制。方法分离培养人外周血淋巴细胞后与人鼻咽癌细胞CNE-2Z共培养,同时取C57BL/6小鼠皮下注射CNE-2Z细胞构建鼻咽癌移植瘤模型24只,均随机分为对照组、lncRNA LINC01296敲低组[转染lncRNA LINC01296小干扰RNA(siRNA)]、阴性对照组(转染lncRNA LINC01296 siRNA阴性对照和空载质粒)、lncRNA LINC01296敲低+PD-L1过表达组(转染lncRNA LINC01296 siRNA和PD-L1过表达质粒),分组转染后,流式细胞术检测人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;细胞计数试剂盒-8法检测人外周血淋巴细胞对CNE-2Z细胞杀伤率;测量移植瘤小鼠肿瘤体积;免疫荧光染色检测移植瘤小鼠肿瘤组织CD8和PD-L1阳性表达;实时荧光PCR实验检测CNE-2Z细胞和肿瘤组织lncRNA LINC01296、PD-L1信使RNA(mRNA)表达;蛋白印迹实验检测CNE-2Z细胞和肿瘤组织PD-L1蛋白表达。结果与对照组相比,lncRNA LINC01296敲低组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及对CNE-2Z细胞杀伤率、肿瘤组织CD8阳性比例升高(P<0.05),肿瘤体积、CNE-2Z细胞和肿瘤组织PD-L1阳性比例、CD8和PD-L1双阳性比例、lncRNA LINC01296、PD-L1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05);过表达PD-L1可减弱敲低lncRNA LINC01296对CNE-2Z细胞和小鼠各指标的影响。结论敲低ln⁃cRNA LINC01296可通过下调PD-L1而促进CD8^(+)T细胞活化及浸润,减弱鼻咽癌细胞免疫逃逸,增强CD8^(+)T细胞对其杀伤力。

免疫检查点分子HHLA2和PD-L1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

探讨和分析免疫检查点分子人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)和PD-L1在NSCLC中的具体表达,以及其所具有的临床研究价值。方法 以2019年1月~2021年12月期间在内蒙古医科大学附属人民医院进行过非小细胞肺癌组织切除的患者以及同时进行了癌旁肺组织切除的患者作为研究对象,累积60人。此外,将进行过肺良性病变组织切除手术的患者选取(如肺结核、间质性肺炎、肺大泡等)15例(肺良性病变对照组)。采用En VisionTM免疫组织化学染色法检测各组织中HHLA2和PD-L1的表达,分析HHLA2和PD-L1在NSCLC组织中的表达的相关性。结果 HHLA2在非小细胞肺癌组织中所得到的表达率为58.33%,相对于抗癌组织所产生的表达(36.67%)来看,高出许多,此外,两小组在非良性病变方面所产生的数值差异较大,故此数据结果具有统计学意义(P<0.05);PD-L1所呈现出来的良性表达与癌旁组织所表现出来的表达相比,相对来说较高,前者为61.67%,后者为45.0%。由于两组数值的差异较大,故此二者的数值差异具有统计学意义(P<0.05)。对于NSCLC患者来说,其性别,吸烟与否,肿瘤的分化程度以及肿瘤的尺寸,患者当前的年龄等并不会影响HHLA2的表达(P>0.05),但是与当前肿瘤的分化程度和临床得出的分期数据有关(P<0.05)。对于NSCLC患者来说,其性别,吸烟与否,肿瘤的分化程度以及肿瘤的尺寸,患者当前的年龄等并不会影响PD-L1 的表达(P>0.05),但是临床分期所给出的结果却与其表达变化有关(P<0.05)。结论 在NSCLC病变的过程中HHLA2 可能与其病变的发生存在一定的关系,并且该癌细胞中所含有的PD-L1 与HHLA2表达之间呈现出正相关关系。

PD-L1阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响

目的:探讨程序性死亡受体-1配体(PD-L1)阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响。方法:30只8~10周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:sham组、模型组、PD-L1拮抗组,每组10只,模型组、PD-L1拮抗组小鼠采用盲肠结扎穿孔手术(CLP)构建脓毒症小鼠模型,sham组小鼠暴露盲肠后即进行伤口缝合,不结扎。PD-L1拮抗组小鼠术后腹腔注射抗PD-L1抗体(50μg/只),每6 h注射1次,连续4次,sham组和模型组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水。流式标记法检测各组小鼠CD3+T细胞表面PD-1和单核细胞CD11b+表面PD-L1表达,HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察脾脏和胸腺超微病理结构改变,TUNEL染色检测脾脏和胸腺组织细胞凋亡、流式细胞术检测胸腺组织T淋巴细胞凋亡,ELISA检测Caspase-3和TNF-α、IL-6及IL-10表达。结果:与sham组相比,模型组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,PD-L1拮抗组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低,IL-10表达明显升高(P<0.05)。结论:PD-L1阻断可有效降低脓毒症小鼠T细胞凋亡率,改善其单核细胞功能。

食管鳞状细胞癌YES-2细胞顺铂耐药致其恶性生物学行为及PD-L1表达的变化

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)YES-2细胞顺铂(cis-dichlorodiammine platinum,CDDP)耐药后(YES-2/CDDP-R)细胞恶性生物学行为的变化和程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达的变化。方法:用CDDP由低质量浓度到高质量浓度(0.25~2.0μg/ml)间断冲击(间隔15~25 d)的方法处理YES-2细胞,建立CDDP耐药细胞株YES-2/CDDP-R。倒置显微镜下观察YES-2/CDDP-R细胞的形态学变化,MTT法检测细胞对CDDP敏感性的变化,划痕愈合实验检测耐药前后细胞迁移能力的变化,qPCR和Western blotting检测耐药前后细胞中PD-L1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:经过CDDP梯度给药9个月后成功建立YES-2/CDDP-R细胞。显微镜下见YES-2/CDDP-R细胞的形态大小不一、胞内空泡及黑色颗粒明显增多且出现巨大细胞。与YES-2细胞比较,YES-2/CDDP-R细胞的IC50值显著升高,表明其对CDDP的敏感程度降低(P<0.05);YES-2/CDDP-R细胞的增殖和迁移能力显著增强(P<0.05或P<0.01),PD-L1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.01)。结论:成功建立的CDDP耐药细胞株YES-2/CDDP-R对CDDP的敏感程度降低,其增殖和迁移能力增强。YES-2/CDDP-R细胞中PD-L1表达水平升高,提示CDDP耐药可能通过上调YES-2细胞PD-L1表达水平促进免疫逃逸。

食管鳞状细胞癌(ESCC)中PD-1/PD-L1/PD-L2的表达与临床因素及预后的相关性

目的检验程序性细胞死亡分子1(programmed cell death-1,PD-1)/PD配体1(PD ligand-1,PD-L1)/PD配体2(PD-L2)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者中的表达,并评估其与临床特征及预后的关系。方法收集2007年1月至12月在复旦大学附属中山医院胸外科接受手术治疗的325例食管肿瘤患者的临床数据,通过免疫组织化学染色分析石蜡包埋的肿瘤样品及部分对应的癌旁组织中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达,用免疫反应评分并分析其与临床特征及预后的关系。结果 PD-1、PD-L1、PD-L2三者阳性表达率分别为12.0%、52.6%、32.9%,PD-L(P<0.001)、PD-L1(P<0.001)、PD-L2(P=0.023)在癌旁组织和癌组织中的表达有差别。PD-L1的阳性表达与T分期(P<0.001)、术后分期(P=0.006)相关,PD-L2的阳性表达与T分期(P<0.001)、术后分期(P=0.002)及淋巴结转移(P=0.044)相关,与其他临床因素的相关性无统计学意义。PD-1(P=0.500)、PD-L1(P=0.058)、PD-L2(P=0.096)单阳性与患者生存状况均无明显关联。但三者表达均阴性的患者预后要显著优于仅其中一个因子表达阳性(HR=1.669)或二个以上因子表达阳性的患者(HR=1.606)。结论 PD-L1和PD-L2与ESCC患者的多个临床特征有关。虽然PD-1、PD-L1、PD-L2各自与患者预后之间无统计学意义关联,但表达均阴性的患者预后相对较好。