非小细胞肺癌患者外周血游离DNA的EGFR基因突变与靶向药物治疗疗效的相关性研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血游离DNA的EGFR基因突变与靶向药物疗效的相关性。方法选取60例NSCLC患者,均行外周血游离DNA EGFR基因检测,根据检测结果分组,EGFR突变型为观察组(n=13), EGFR野生型为对照组(n=47),两组均予以吉非替尼行EGFR-TKI治疗,比较两组的客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR),分析EGFR基因突变与疗效的相关性。结果两组的ORR比较无显著差异(P>0.05),观察组的DCR显著高于对照组(P <0.05)。Logistic回归分析结果显示,EGFR基因突变是EGFR-TKI治疗疗效的重要影响因素(P <0.05)。结论 NSCLC患者外周血游离DNA的EGFR基因突变与靶向药物治疗疗效具有相关性,能够为临床提供指导。

外周血游离DNA的完整性及含量检测在胰腺癌中的诊断价值

目的:探究外周血游离DNA (cfDNA)的完整性及含量检测在胰腺癌中的诊断价值.方法:选取2016年6月~2018年1月我院确诊并收治的胰腺癌患者40例作为研究组,并选取同期于我院进行体检的健康志愿者40例作为对照组;比较两组受试者外周血中cfDNA的含量及完整性;比较不同临床资料胰腺癌患者外周血cffNA的含量及完整性;计算外周血cfDNA对胰腺癌的诊断的灵敏度、特异性、准确率、阳性预测率及阴性预测率.结果:与对照组相比,胰腺癌外周血中cfDNA的含量显著升高(P<0.05),完整性指数显著升高(P<0.05);不同性别、年龄、分期及组织学分级的患者外周血cfDNA的含量和完整性指数相比,无统计学意义(P>0.05);以cfNA浓度32.15ng/ml作为截断进行诊断,诊断胰腺癌的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测率及阴性预测率分别为92.64%、81.08%、90.50%、95.57%及71.43%.结论:胰腺癌患者外周血cfDNA含量显著增加,完整性指数升高,且对于胰腺癌的诊断具有一定的临床价值.

外周血中游离胎儿DNA检测用于诊断染色体非整倍体的临床价值分析

目的分析外周血中游离胎儿DNA(cff-DNA)检测用于诊断染色体非整倍体的临床价值。方法选择进行外周血中cff-DNA检测的4525例孕妇。4525例孕妇均进行外周血中cff-DNA检测,针对低风险孕妇进行跟踪随访至新生儿出生后3个月时,针对高风险孕妇进行穿刺取样,分析染色体核型,并进行诊断。分析外周血中cff-DNA检测结果及介入性产前诊断染色体非整倍体结果,计算外周血中cff-DNA诊断染色体非整倍体敏感度、特异度及准确率,计算外周血中cff-DNA诊断染色体非整倍体与介入性产前诊断及产后随访结果的一致性。结果4525例进行外周血中cff-DNA检测的孕妇中出现染色体非整倍体的60例,其中性染色体异常4例,13-三体异常5例,18-三体异常11例,21-三体异常40例;外周血中cff-DNA检出的60例染色体非整倍体孕妇均进行羊水穿刺分析检测,证实染色体非整倍体异常58例;对外周血中cff-DNA检测无染色体异常的孕妇进行跟踪随访至新生儿出生后3个月时,未发现染色体异常患儿;以介入性产前诊断及产后随访结果作为金标准,外周血中cff-DNA诊断敏感度为100.00%(58/58),特异度为99.96%(4465/4467),准确率为99.96%(4523/4525);外周血中cff-DNA诊断染色体非整倍体与介入性产前诊断及产后随访结果的一致性极好(Kappa=0.983,P=0.000)。结论外周血中cff-DNA属于无创性产前筛查技术,用于诊断染色体非整倍体准确率较高,有利于检出染色体非整倍体,可为出生缺陷产前干预提供重要指导,对促进优生具有重要影响。

外周血游离胎儿DNA检测在产前唐氏筛查中的应用价值研究

目的 探讨外周血游离胎儿DNA检测(NIPT)在产前唐氏筛查中的应用价值。方法 回顾性分析2020年8月至2022年8月于我院行DS产前筛查的1580例DS高风险孕妇的临床资料,所有孕妇均行外周血游离胎儿DNA、唐氏筛查及羊水穿刺-核型检查。结果 外周血游离胎儿DNA在DS诊断中的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均高于唐氏筛查,差异有统计学意义(P<0.05)。Kappa检验显示:唐氏筛查与“金标准”一致性尚可(kappa值=0.600,P=0.000);外周血游离胎儿DNA与“金标准”一致性良好(kappa值=0.887,P=0.000);24例NIPT阳性孕妇中,15例确诊为染色体异常,胎儿染色体异常发生率为0.95%(15/1580),确诊13-三体综合体2例,18-三体综合体4例,21-三体综合体9例,与“金标准”符合率均为100.00%。结论 NIPT在产前唐氏筛查中具有较高的应用价值,可减少产前有创性诊断数量,增加诊断的准确性,降低新生儿出生缺陷,提高出生人口质量,减少不必要的胎儿流失。

应用母体外周血中游离DNA鉴定细毛羊胎儿性别研究

本研究针对不同妊娠时期细毛羊进行胎儿性别鉴定工作。首先对外周血浆/血清分别采用加热法和酚-氯仿法提取游离DNA。通过普通PCR扩增雄性性别决定基因(sex determining region Y,SRY)和β-actin检测基因的目的片段。鉴于部分样品未扩增出SRY基因目的片段,设计2对内外引物,运用优化后的巢式PCR体系再次针对SRY目的基因展开特异性扩增。最后对每个妊娠时间段的鉴定结果和实际生产结果进行统计,计算准确率。结果表明:加热法和酚-氯仿法均成功分离提取出妊娠母羊外周血浆/血清中的游离DNA,并扩增出β-actin检测基因片段;SRY阳性样本扩增出了SRY目的基因片段和β-actin检测基因片段,SRY阴性样本只扩增出了β-actin检测基因片段;性别鉴定的平均准确率达到81.25%(19.5/24),SRY基因检出率与妊娠时间的长短呈正比。结论,本研究建立了一种基于外周血游离DNA检测细毛羊胎儿性别的非创伤性且高效低廉的产前诊断技术,但性别鉴定的准确率还有待提高。

孕妇外周血游离胎儿DNA用于无创产前检测的研究进展

产前检查对于预防控制新生儿疾病发生和优生优育有重要意义,孕妇外周血游离胎儿DNA(cffDNA)是一种无创产前检测方法,并且敏感度、精准度和特异度均高达99%,加阳性率大约仅仅只有0.1%,其在鉴别胎儿血型、性别、染色体相关疾病、单基因病等方面应用广泛。为此,本文综述了cffDNA用于无创产前检测的研究进展,旨在为临床提供相关参考依据。

扩增阻滞突变系统检测晚期非小细胞肺癌患者外周血游离DNA中EGFR基因突变

目的探究外周血游离DNA(cf DNA)检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的可行性。方法收集2013年7月-2014年1月湖北省肿瘤医院收治50例确诊为晚期NSCLC患者的肿瘤组织及配对的外周血样本,分别提取肿瘤组织DNA及cf DNA,采用基于实时荧光定量PCR的扩增阻滞突变系统(ARMS)检测两类样本中EGFR基因突变。结果以肿瘤组织的结果为准,cf DNA中检出突变的特异性为97.2%(35/36),敏感度为78.6%(11/14),一致性为92.0%(46/50),且具有和肿瘤组织相同的EGFR基因突变类型。结论 cf DNA和肿瘤组织的EGFR基因突变类型相同,一致性、特异性和敏感度较高,对于晚期难以获得组织的NSCLC患者,外周血可代替肿瘤组织应用于临床EGFR基因突变检测。

绵羊外周血中游离DNA提取及SRY基因检测

【目的】外周血中游离的DNA主要是指存在于血浆/血清等循环系统里的一些小片段DNA,应用在一些疾病的诊断以及非创伤性产前诊断方面。研究三种方法从绵羊外周血浆/血清中分离提取游离DNA,建立高效的外周血游离DNA提取方法,并对SRY基因进行PCR扩增。【方法】利用加热法、酚氯仿法以及试剂盒法对500μL血浆/血清中游离的DNA进行提取。根据游离DNA片段大小的特点分别设计扩增产物大小为168 bp的检测引物和178 bp的SRY基因引物进行普通PCR检测。【结果】利用加热法、酚氯仿法、试剂盒法都提取到了游离的DNA,PCR后通过琼脂糖凝胶电泳检测到了168 bp的目的片段。同时利用PCR扩增到了178 bp的SRY基因目的片段。【结论】不同的提取方法均可有效提取分离绵羊外周血血清和血浆中游离的DNA片段,能够用于SRY基因的检测。

2019年北京市孕妇外周血胎儿游离DNA检测现状分析

目的了解2019年北京市孕妇外周血胎儿游离DNA筛查、产前诊断及妊娠结局的情况。方法采用描述性统计学方法分析2019年北京市8家产前诊断机构孕妇外周血胎儿游离DNA筛查及诊断情况。结果2019年北京市8家产前诊断机构共进行外周血胎儿游离DNA检测65136例,占产妇总数的29.8%(65136/218396)。21\18\13-三体综合征检测复合阳性预测值为57.4%(152/265),21-三体检测阳性预测值为76.0%(117/154),18-三体检测阳性预测值为38.9%(28/72),13-三体检测阳性预测值为18.0%(7/39),性染色体检测阳性预测值为30.5%(85/279),其他染色体检测阳性预测值为16.4%(30/183)。65136例患者中,适用人群筛查10791例,占16.6%;慎用人群筛查53833例,占82.7%;不适用人群筛查343例,占0.5%。追访发现1例21-三体和1例18-三体假阴性患者。21\18\13-三体综合征检出率为98.7%(152/154),其中21-三体检出率为99.2%(117/118),18-三体检出率为96.6%(28/29),13-三体检出率为100%(7/7)。非侵入性产前检查(NIPT)高风险孕妇产前诊断率为84.6%(615/727),其中21\18\13-三体综合征的产前诊断率为91.7%(243/265)。结论孕妇外周血胎儿游离DNA检测已成为21-三体综合征筛查的重要手段之一,在临床应用中应严格掌握检测指征,重视检测前后的遗传咨询,提高产前诊断率,同时加强实验室质控,提高检测质量。

母体外周血胎儿游离DNA检测在孕中期唐氏筛查临界风险非高龄孕妇中的应用价值

唐氏综合征(downs syndrome,DS)是临床常见染色体异常性疾病,患儿的主要临床表现为智力低下、唐氏特殊面容及发育迟缓等[1],因此,在产前及早进行胎儿筛查,寻找积极有效的护理治疗方法,成为人们研究的热点。本次研究主要为母体外周血胎儿游离脱氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA)检测作用于孕中期唐氏筛查临界风险非高龄孕妇,现报告如下。

外周血游离胎儿DNA检测联合唐氏筛查在妊娠中期唐氏综合征胎儿筛查中的应用价值

目的:探讨外周血游离胎儿DNA检测联合唐氏筛查在妊娠中期唐氏综合征胎儿筛查中的应用价值。方法:选取2015年9月~2017年4月在某院进行产前检查的孕中期孕妇1430例,均先行唐氏筛查,对唐氏筛查阳性患者再行外周血游离胎儿DNA检测,统计唐氏筛查结果及外周血游离胎儿DNA检测结果。结果:1430例孕中期孕妇经唐氏筛查,筛查阳性率为7.41%(106/1430);106例高危孕中期孕妇进行外周血游离胎儿DNA检测发现染色体数目异常10例,4例结构异常,检测准确率为100.00%;外周血游离胎儿DNA检测结果显示21-三体综合征2例、18-三体综合征1例、13-三体综合征1例,与染色体核型分析结果符合率均为100.00%。结论:对大样本妊娠中期孕妇进行唐氏筛查可及早发现高危孕妇,对高危孕妇进一步实施外周血游离胎儿DNA检测,可提高诊断符合率。

高龄孕妇500名外周血游离DNA检测结果分析及优生遗传咨询

目的分析500名高龄孕妇外周血游离DNA检测结果,探讨高龄育龄妇女优生遗传咨询要点。方法纳入符合条件的500名高龄孕妇,采集外周血行产前无创筛查(NIPS)。根据孕妇情况行介入穿刺羊水DNA染色体分型检查或随访至胎儿娩出后3个月明确染色体异常情况。以介入性穿刺检查结果及新生儿染色体核型随访检查结果为金标准,计算NIPS诊断胎儿各类染色体异常的准确度、特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值。按照胎儿染色体是否异常将孕妇分为异常组和正常组,收集整理所有孕妇的个体资料、生殖系统相关资料及孕期并发症情况,对上述资料进行组间比较。对差异有统计学意义的指标纳入多因素Logistic系统中行高危因素分析。根据结果探讨高龄孕妇行产前优生遗传咨询的重点。结果500名高龄孕妇NIPS检查判断为染色体异常42例,羊水穿刺胎儿染色体核型检查诊断为染色体异常41例,高龄孕妇胎儿染色体异常的核型构成以为21三体为主;NIPS检测灵敏度及阳性预测值均高;经相关因素分析显示,影响高龄孕妇胎儿染色体异常相关的因素有:年龄、合并自身免疫性疾病、孕前3月生殖道感染史、孕前3个月用药史、孕前孕后辐射环境史、不良孕产史、染色体异常家族遗传史(P<0.05);经Logistic分析,高龄孕妇胎儿染色体异常的高危因素有:年龄>40岁、合并自身免疫性疾病、不良孕产史、染色体异常家族遗传史(P<0.05)。结论高龄孕妇发生胎儿染色体异常风险较大,影响因素及高危因素较多,NIPS检测灵敏度及阳性预测值均高,可有效避免漏诊,指导临床是否行介入穿刺检查,提高检查的针对性,降低产妇行不必要的介入检查的风险,提高优生遗传咨询的质量。

外周血游离DNA检测非小细胞肺癌患者EGFR基因突变研究进展

外周血游离DNA检测非小细胞肺癌人群表皮生长因子受体基因突变法因受到标本质量、采集运输分离条件、DNA提取方法、基因突变检测方法的多种限制，检测敏感性低，假阴性比例较高，但特异性较好。因此，外周血游离DNA的基因突变检测需针对特殊人群，优化采集运输分离步骤，并尝试使用较好的DNA提取（如改良酚一氯仿法、QIAmpCirculatingNucleicAcidKit）及基因检测方法（如蝎形探针扩增阻滞突变系统、高效液相色谱法、高分辨溶解曲线分析技术、突变一富集PCR等）。本文就外周血游离DNA表皮生长因子受体基因突变检测的现状及发展方向进行综述。

外周血游离线粒体DNA与肿瘤相关性的研究进展

线粒体DNA因长度短、分子结构简单、数量大等独特特点迅速成为引人注目的肿瘤早期诊断分子工具。近年来关于外周血游离线粒体DNA(ccfmt DNA)在肿瘤早期诊断和预后监测上潜在价值的转化研究已取得显著进展。本文归纳了ccfmt DNA的来源及含量变化的可能机制,总结了ccfmt DNA定量检测技术的挑战,综述了其含量变化同肿瘤发生发展的关系,并讨论其作为新的肿瘤标志物的潜在临床价值。

外周血游离线粒体DNA定量检测在结直肠癌患者中的表达及意义

目的评价外周血游离线粒体DNA(circulating cell free mitochondrial DNA, CCF mtDNA)在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者组织中的表达及其临床意义。方法收集102例CRC患者的癌组织及癌旁组织标本、30例原发性CRC患者及体检健康者血浆标本,实时荧光定量PCR检测各组CCF mtDNA的表达水平,并分析CCF mtDNA含量与CRC患者临床病理参数的关系。ROC曲线分析其作为CRC筛查标志物的效能。结果 CRC患者癌组织中的CCF mtDNA含量(85.94±4.54)明显低于癌旁组织(183.10±7.59),差异有统计学意义(t=11.04,P<0.05)。低分化癌组织中的CCF mtDNA含量(57.75±5.26)明显低于中分化(92.64±5.68)及高分化(110.00±14.95)癌组织,差异有统计学意义(F=8.42,P<0.05)。CCF mtDNA含量高低与CRC患者的预后无关(χ2=0.261,P=0.610)。CCF mtDNA筛查CRC的AUCROC为0.921,敏感性为0.833,特异性为0.933。结论 CCF mtDNA含量在癌组织中下降,但与预后无关,可能作为CRC的筛查标志物。

孕妇年龄、孕周及体重指数对孕妇外周血中胎儿游离DNA比例的影响

目的无创产前诊断(noninvasive prenatal testing,NIPT)是通过提取母体外周血中游离DNA,经高通量测序技术和生物信息学分析,发现游离DNA中是否存在比例异常的染色体,进而判断胎儿是否存在染色体非整倍体。孕妇外周血中胎儿游离DNA比例是影响NIPT准确性的重要因素,评价孕妇年龄、孕周和体重指数(body mass index,BMI)对胎儿游离DNA比例的影响对提高NIPT的准确性有重要意义。方法回顾性分析了2015年3月至2016年5月苏州市立医院2563例孕有正常男性胎儿孕妇的NIPT检测结果及相关数据,提取孕妇外周血胎儿游离DNA浓度、孕妇年龄、孕周和体重指数等信息,对以上参数进行了归一化处理后再进行相关性分析,挖掘孕妇年龄、孕周和BMI对孕妇外周血中胎儿游离DNA比例的影响。结果数据显示孕妇外周血中胎儿游离DNA比例与孕周呈正相关(线性回归方程y=0.003x+0.060,R2=0.752,P=0.01144);孕妇年龄与BMI也呈正相关(线性回归方程y=0.112x+18.80,R2=0.721,P=6.46E-08);而胎儿游离DNA比例与孕妇BMI、年龄均呈负相关,且在样本量较大时相关性显著。结论孕妇年龄、BMI的增加都会相对降低孕妇外周血中胎儿游离DNA的比例,孕妇年龄越大则BMI也会相对越大,而孕周的增大会提高孕妇外周血中胎儿游离DNA比例,因此,针对高龄且高BMI值的孕妇适当延后进行NIPT的孕周可以提高NIPT检测的准确性。

孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的研究价值

目的:探讨孕中期女性唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的临床诊断价值。方法:收治孕中期孕妇1 426例,先行唐氏综合征筛查,对阳性患者再纳入外周血游离胎儿DNA进行染色体非整倍体检测。结果:1 426例孕妇筛查出高危孕妇38例,其中检出10例染色体数目异常,结构异常4例,羊水细胞培养染色体核型分析检出2例21三体综合征及2例18三体综合征,经检测,与细胞遗传学的核型分析相符。结论:孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测能够早期诊断高风险孕妇,预防和减少唐氏儿及其他缺陷儿的出生,操作简单、安全、有效,有利于提高国民素质。

孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的研究价值

目的：探讨孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的研究价值。方法：2013年1月--2013年12月选择在我院产前诊断科及产科门诊就诊的孕中期孕妇1600例，都进行唐氏筛查，对阳性患者再纳入羊水穿刺分析与外周血游离胎儿DNA检测。结果：在1600例孕妇中，检出45例三体高风险孕妇，筛查阳性率为2．81％。其中年龄／〉35岁者35例，年龄〈35岁者10例，组闯对比差异有统计学意义（P〈0．05）。羊水细胞培养染色体核型分析，检出2例21三体综合征及2例18三体综合征。应用短串联重复多态性聚合酶链式反应技术（STR—PCR）进行确诊与细胞遗传学的核型分析相符。结论：孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测可对高风险孕妇与出生缺陷婴儿做出早期诊断早期干预，值得临床应用推广。

外周血游离线粒体DNA定量水平在结直肠癌患者预后判断中的价值

目的探讨外周血游离线粒体DNA定量水平在结直肠癌患者预后判断中的价值。方法选择2017年2月至2019年9月本院收治的结直肠癌患者80例为研究对象。留取入组者晨起空腹肘静脉血5 mL及手术切取肿瘤组织、癌旁组织各25 mg,提取基因组DNA,并行PCR检测。比较不同分化程度(低分化、中分化及高分化)者线粒体mtDNA水平;比较不同部位(肿瘤组织、癌旁组织及正常组织)线粒体mtDNA水平;比较是否合并淋巴结转移线粒体mtDNA水平。结果不同分化程度者线粒体mtDNA水平比较中低分化者低于中分化低者于高分化者,差异有统计学意义(P<0.05);不同部位线粒体mtDNA水平比较中,肿瘤组织低于癌旁组织低于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);合并淋巴结转移者其线粒体mtDNA水平显著低于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论线粒体mtDNA表达水平与结直肠癌分化水平、肿瘤侵犯部位及是否合并淋巴结转移存在一定相关性,线粒体mtDNA表达水平越低,分化水平越低,存在淋巴结转移可能性越高。

孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的价值分析

目的:探讨孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的临床价值。方法:回顾性分析2019年1月—2021年1月在南京市江宁区妇幼保健计划生育服务中心孕产保健科进行胎儿唐氏综合征(D S)产前筛查的230例D S高风险孕妇的临床资料,均接受唐氏筛查和外周血游离胎儿D N A检测。将单纯唐氏筛查作为A组,单纯外周血游离胎儿DNA检测作为B组,唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测作为C组。以羊水穿刺染色体核型结果作为金标准,对比三组对D S的诊断阳性预测值、特异度和准确率。结果:A组阳性27例(真阳性9例、假阳性18例),阴性203例(真阴性201例、假阴性2例);B组阳性21例(真阳性10例、假阳性11例),阴性209例(真阴性208例、假阴性1例);C阳性13例(真阳性11例、假阳性2例),阴性217例(真阴性217例、假阴性0例)。A组对D S诊断的阳性预测值为33.33%(9/27)、特异度为91.78%(201/219)、准确率为91.30%(210/230),B组对D S诊断的阳性预测值为47.62%(10/21)、特异度为94.98%(208/219)、准确率为94.78%(218/230),C组对DS诊断的阳性预测值为84.62%(11/13)、特异度为99.09%(217/219)、准确率为99.13%(228/230),差异有统计学意义(P<0.05);21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的诊断符合率均为100.00%。结论:孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿D N A检测的价值显著,对DS诊断的阳性预测值、特异度及准确率高,有助于临床早期采取措施及时终止妊娠。