五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的影响

目的 :研究五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活力的影响。方法 :38例男性老年肾虚者采用单盲法 ,随机分为五子衍宗丸治疗组和安慰剂对照组 ,服药 3个月。分别用聚合酶链反应 (PCR)和酶动力学方法检测治疗前后外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体的活力。结果 :五子衍宗丸可提高男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅳ活力 ,减少线粒体DNA缺失 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论

改良一步法制备人外周血白细胞线粒体DNA

目的 建立从少量外周血中提取白细胞线粒体DNA(mtDNA)的快速、简便方法。方法 5 8份抗凝血静置后取白细胞层 ,采用碱变性法裂解细胞 ,酚 氯仿 异戊醇抽提 ,RNA酶消化后再抽提及沉淀 ,PCR扩增产物电泳鉴定。结果 获得的mtDNA样品不存在蛋白质等污染 ,用特异性mtDNAPCR引物从 5 8例核酸样品中均能扩增出 15 2 8bp的mtDNA基因片段。结论 改良一步法是一种省时、经济、实用、重复性好。

31例中国汉族人外周血白细胞线粒体DNA高变Ⅰ区序列特殊变异分析

目的 通过分析线粒体DNA序列 ,进一步了解中国汉族人线粒体基因多态性的特点。方法 一步法制备 3 1个无亲缘关系的中国汉族个体的外周血白细胞线粒体DNA ,PCR扩增包括非编码高变Ⅰ区在内的 15 2 8bp核酸片段 ,并直接测序 ,分析高变Ⅰ区序列变异情况。结果 高变Ⅰ区 162 2 3和 163 62核苷酸位点 ,分别出现高频率C→T变异 ( 70 97% ,2 2 /3 1)及T→C变异 ( 4 8 3 9% ,15 /3 1)。结论 线粒体DNA第 162 2 3核苷酸位点T和第 163 62核苷酸位点C很可能是中国汉族人特异性的单核苷酸多态性位点。

外周血白细胞线粒体DNA水平对结直肠癌患者的诊断价值

目的探讨结直肠癌(CRC)患者外周血白细胞线粒体DNA(mtDNA)水平与临床病理特征的关系及诊断价值。方法选取2018年5月至2020年5月,空军军医大学第二附属医院收治的CRC患者164例,设为CRC组;另选同期体检健康者160人为对照组,检测两组外周血白细胞mtDNA水平,分析外周血白细胞mtDNA水平与CRC患者临床病理特征的关系。Logistic回归分析影响CRC发生的相关因素,并以受试者工作特征曲线(ROC)分析外周血白细胞mtDNA对CRC的诊断价值。结果肿瘤分化程度低、有淋巴结转移、发生远处转移的患者外周血白细胞mtDNA水平低于肿瘤分化程度高、无淋巴结转移、未发生远处转移的患者(P<0.05)。Logistic回归分析显示,外周血白细胞mtDNA低表达、结肠息肉史、溃疡性结肠炎史、肿瘤家族史及梭杆菌门、拟杆菌门肠道菌群占比高是影响CRC发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血白细胞mtDNA水平对CRC的灵敏度为82.94%、特异度为75.83%、准确度为80.56%、曲线下面积(AUC)为0.815。结论外周血白细胞mtDNA在CRC患者中呈低表达,且与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移密切相关,同时外周血白细胞mtDNA水平是影响CRC发生的因素,对临床诊断CRC具有一定价值。

脑创伤大鼠外周血白细胞线粒体DNA拷贝数与神经功能损伤程度的相关性

目的探索脑创伤（traumatic brain injury，TBI）后外周血白细胞线粒体DNA拷贝数变化与神经功能损伤程度的相关性。方法按随机数表法将40只sD大鼠分为4组：对照组（10只）、轻度TBI组（10只）、中度TBI组（10只）、重度TBI组（10只），采用皮质撞击致伤法构建不同损伤程度TBI大鼠模型；TBI后24h、48h、72h进行神经功能评分（mNSS、网屏实验、旷场实验），在每次神经功能评分完成后行眶下静脉丛取血，提取基因组DNA，real—timePCR法测量相对线粒体DNA拷贝数；实验完成后大鼠安乐死，取脑组织做HE染色。结果脑组织病理HE检测结果实验各组之间均差异有统计学意义（P〈0．05）。各组大鼠TBI后外周血线粒体DNA拷贝数在24h（9．63±3．62）和48h（9．80±3．58）时升高，在72h（4．97±2．68）时开始下降（P〈0．05）；在大鼠mNSS评分在TBI后24h（r=0．578，P〈0．05）和48h（r=0．559，P〈0．05）与线粒体DNA拷贝数均正相关，TBI后72h（r=0．487，D0．05）不相关；网屏实验评分在TBI后24h（r=0．573，P〈0．05）和48h（r=0．501，P〈0．05）与线粒体DNA拷贝数均正相关，TBI后72h（r=0．273，P〉0．05）不相关；旷场实验的水平评分在TBI后24h（r=-0．662，P〈0．05）和48h（r=-0．507，P〈0．05）与线粒体DNA拷贝数均负相关，TBI后72h（r=-0．410，P〉0．05）不相关；旷场实验的垂直评分在TBI后24h（r=-0．683，P〈0．05）和48h（r=-0．607，P〈0．05）与线粒体DNA拷贝数均负相关，TBI后72h不相关（r=-0．141，P〉0．05）。结论TBI早期外周血白细胞线粒体DNA拷贝数与大鼠神经功能损伤程度具有一定相关性，外周血白细胞线粒体DNA拷贝数有可能成为临床评估TBI神经功能损伤程度的一个潜在生物标志物。

气态甲醛对小鼠外周血白细胞的DNA损伤作用

为研究气态甲醛对外周血白细胞DNA的损伤作用,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,用浓度为0.5 mg/m2、1.0 mg/m2、3.0 mg/m3气态甲醛对小鼠进行连续动态染毒72 h,染毒结束后,观察外周血白细胞的DNA断裂和DNA-蛋白质交联的状况.实验表明:气态甲醛能诱导小鼠外周血白细胞的DNA断裂,在各染毒浓度组与对照组均有及显著差异,在0.5 mg/m3浓度组DNA断裂效应比1.0 mg/m2,3.0 mg/m3浓度组高;1.0 mg/m2,3.0 mg/m3浓度组出现明显的DNA-蛋白质交联作用.研究结果表明:气态甲醛暴露对小鼠外周血白细胞的DNA有明显的损伤作用.

中国人外周血白细胞端区DNA长度随增龄缩短

中国人外周血白细胞端区ＤＮＡ长度随增龄缩短张宗玉范新青童坦君（北京医科大学生物化学与分子生物学系，北京１０００８３）一个细胞的端区ＤＮＡ长度取决于端区ＤＮＡ的延长与缩短的平衡，染色体ＤＮＡ半保留复制导致端区ＤＮＡ的缩短．端聚酶是自带ＲＮＡ引物的逆转录...

人外周血白细胞端粒DNA长度变化与性别的关系

目的 探讨人外周血白细胞端粒DNA长度变化与性别的关系。方法 选取123例不同年龄健康人外周血样本，其中男性63例，女性60例，酚氯仿法抽提人基因组DNA，采用地高辛标记探针，通过Southern Blot方法检测端粒DNA限制性酶切片段(TRF)长度的变化。结果 123例外周血白细胞端粒TRF平均长度随年龄增长而逐渐缩短，TRF随年龄缩短的速度是不均一的，且呈现出性别差异。结论 人外周血白细胞端粒DNA长度随年龄缩短的变化速率具有性别差异，通过端粒DNA长度推断个体年龄需考虑到性别因素。

PERV在猪外周血白细胞DNA和组织mRNA中的表达及其差异性分析

为了解我国家猪猪内源性逆转录病毒(PERV)生物学的基本特征,为评价应用猪器官、组织、细胞进行猪—人间跨种移植的生物安全性提供理论基础。本文采用PCR方法调查12个家猪品系外周血白细胞DNA基因组PERV的生物学特征,并应用SS-SSCP、RFLP-PCR方法分析PERV基因片段的差异性及采用RT-PCR方法和半定量方法分析2个品系小型猪13种组织PERV表达的差异。结果表明12个品系猪外周血白细胞DNA基因组普遍存在PERV-A、-B基因序列,未发现单链构象多态性;部分品系猪PERV env基因序列片段存在限制性片段长度多态性。分析2个品系13种组织均表达PERV-A、-B、-C,肾、淋巴结、肝为高表达器官,胰腺和脑组织为低表达器官,PERV-C mRNA丰度明显低于PERV-A、-B mRNA。PERV env存在限制性片段长度多态性、PERV-A存在碱基缺失和错配的现象,有可能在猪异种移植中构成PERV感染的潜在危险性,这是在猪异种移植过程中值得高度关注的问题。

一种快速分离纯化外周血细胞线粒体DNA方法的建立

目的探索快速分离纯化人外周血细胞线粒体DNA(mtDNA)的方法。方法收集抗凝外周血,首先破红细胞,然后裂解白细胞,去除细胞膜和核DNA后获得mtDNA;再经过去除蛋白和RNA,获得纯mtDNA。用PCR扩增人线粒体ND1基因片段,PCR产物经纯化后测序和核苷酸同源性分析。结果用本研究中建立的方法制备的mtDNA纯度高,每毫升抗凝血可获得100ng左右的mtDNA。经过PCR扩增ND1基因433bp片段,较用细胞总DNA为模板,模板用量少,扩增产物多。测序后经核苷酸同源性分析证实扩增片段为ND1基因。结论本研究中建立的快速分离外周血细胞mtDNA的方法,可制备高纯度的mtDNA用于线粒体相关研究。

祛毒胶囊对狼疮样小鼠外周血白细胞介素-6和抗ds-DNA抗体的影响

目的:探讨狼疮样小鼠外周血白细胞介素-6(IL-6)和抗ds-DNA抗体水平及祛毒胶囊对其的影响。方法:采用LPS诱导系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型,经中药祛毒胶囊、强的松及联合用药治疗后分别做肝肾组织的病理切片进行组织学观察,并取血检测抗IL-6、抗ds-DNA抗体水平。结果:病理结果显示模型鼠肝肾炎性改变,治疗组炎性改变减轻。模型组血清抗ds-DNA抗体与正常组比较差异有显著性(P<0.01)。各治疗组抗ds-DNA抗体与正常组比较差异不显著(P>0.05)。模型组小鼠外周血IL-6水平明显高于正常组及各治疗组,差异有显著性(P<0.05),治疗组与正常组无明显差异。结论:祛毒胶囊具有免疫抑制剂的作用,通过调节SLE小鼠分泌IL-6和抗ds-DNA抗体水平,从而调节Th1/Th2平衡。

鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的检测

目的 探讨鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的分布及其与鼻咽癌的关系。方法 采用多聚酶链反应检测 2 4例鼻咽癌患者 (实验组 )及 10例头颈部其它部位肿瘤 (对照组 1)和 10例慢性鼻咽炎患者 (对照组 2 )外周血白细胞及血清中EB病毒的DNA。同时采用免疫酶法检测以上各组患者血清中EB病毒VCA IgA抗体的效价。结果 发现实验组中 10例患者外周血白细胞中EB病毒DNA为阳性 ,阳性率为 4 1 6 7% (10 / 2 4 )。对照组 1阳性率为 10 % (1/ 10 ) ,对照组 2患者外周血白细胞中EB病毒DNA均为阴性。实验组与对照组 2比较阳性率差异有显著性 (P <0 0 5 )。在以上三组患者血清中EB病毒DNA均为阴性 ,三组间无差异。实验组VCA IgA与对照组 1,对照组 2分别比较阳性率其差异均有显著性 (P <0 0 1)。结论 有些鼻咽癌患者外周血白细胞中可检测出EB病毒DNA。血清中未能检测出EB病毒DNA。鼻咽癌患者外周血白细胞EB病毒DNA的存在与血清VCA

原发性肝癌患者外周血单个核细胞线粒体DNA含量检测及其临床意义

目的探讨原发性肝癌(PLC)患者外周血单个核细胞(PBMC)线粒体DNA(mtDNA)的含量对肝癌诊断的临床意义。方法收集250例PLC患者和48例健康人群全血样本、临床信息及实验室指标等,实时荧光定量PCR检测线粒体中NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因的含量,并以核基因组的β-globin作为内参基因。比较两组PBMC mtDNA含量的差异,同时比较分析mtDNA、甲胎蛋白(AFP)及二者联合诊断肝癌的效能。结果PLC患者PBMC mtDNA含量(90.51)明显低于健康对照组(456.67)。诊断效能分析显示,mtDNA的曲线下面积(0.884)及灵敏度(75.20%)略高于AFP(0.863,71.70%);mtDNA与AFP联合诊断的曲线下面积为0.957,显著高于mtDNA(0.884)或AFP(0.866)单独检测,联合检测的灵敏度提高至84.91%。结论肝癌患者外周血PBMC mtDNA含量可作为肝癌诊断的辅助指标。

一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。 方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体 DNA用 PCR进行长片段扩增 ,比较扩增效果。结果 :用改进的方法制备的线粒体 DNA中没有检测到核 DNA,并能有效扩增 8kb长的目的片段。 结论 :改进后的方法简便、快捷 ,制备的线粒体 DNA纯度高 ,也有利于长片段

人外周血线粒体DNA4934bp自发缺失及^(60)Coγ射线诱发缺失的剂量效应关系初探

为探索正常人群外周血样品中线粒体DNA(mtDNA)4934bp缺失的发生比例及电离辐射是否可以诱发该缺失,对109例正常人外周血样品进行分析,确定正常人外周血样品中发生该缺失的比例,将3例缺失阳性正常人外周血样品,使其受到0、2和6Gy60Coγ射线照射,对4934bp缺失发生情况进行研究;经分析发现,41%的正常人外周血样品具有该缺失,聚合酶链反应PCR产物经克隆、测序和核苷酸同源性分析证实该缺失发生在线粒体DNA重链nt8435-nt13368之间。自发缺失发生比例与供者年龄增长相关(p<0.01),与性别无关。使用半定量聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR),缺失阳性正常人外周血样品在接受0、2和6Gyγ射线照射后,检测其mtDNA4934bp的缺失情况,发现在照射前后外周血线粒体DNA均有该缺失;以正常人外周血所做的半定量分析发现在照射0、2和6Gy后该缺失水平分别为23、25和27。说明电离辐射诱发人外周血样品缺失水平随剂量增加而增高。

线粒体肌病和脑肌病白细胞线粒体DNA缺失分析

线粒体肌病和脑肌病的发生主要与线粒体ＤＮＡ突变有关，线粒体ＤＮＡ缺失是最常见的突变之一，在所有已证实的缺失中，“普通缺失”是最常见的［１］，这种缺失位于人类线粒体ＤＮＡ的８４８２碱基至１３４５９碱基间，普遍地存在于患者各组织中。本文对线粒体肌病和脑肌...

快速提取冻存外周血中线粒体DNA及其纯化的方法学研究

目的探讨并建立从少量冻存外周血中快速、简便提取高纯度线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的技术途径。方法冻存外周血复温后,经破碎红细胞,裂解白细胞,去除细胞膜和核DNA(nuclear DNA,nDNA)后获得mtDNA;再去除蛋白和RNA,利用紫外光谱分析及凝胶电泳鉴定,获得高纯度mtDNA。结果能获得无蛋白质及nDNA污染,纯度较高的mtDNA样品。结论该方法能快速、可靠地从外周血中提取较高纯度的mtDNA,满足常规分子生物学、遗传学和生物信息学等研究领域需要,具有一定的方法学意义。