外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌患者腹腔镜根治术后预后的预测价值

目的分析外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌(CC)患者腹腔镜根治术后预后的预测价值。方法招募2018年9月至2020年9月于儋州市人民医院接受腹腔镜根治术治疗的早期CC患者204例,根据患者术后随访期间预后情况分为预后不良组(43例)和预后良好组(161例)。比较两组临床资料。采用Spearman秩相关分析外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平的相关性。采用多因素logistic回归分析早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的预测价值。结果预后不良组CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)水平,术后切缘阳性占比以及术中宫旁浸润占比高于预后良好组,CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,早期CC患者外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平呈负相关(r_(s)=-0.478,P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的CEA、CA125、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平是促进早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立危险因素(P<0.05),较高的CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平是抑制早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良(P<0.05),两项指标联合可进一步提高预测效能[AUC(95%CI)=0.939(0.898~0.979),P<0.001],灵敏度和特异度分别为86.00%、88.20%。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平与早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良有关,二者能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良。

CD4^＋CD25^＋CD127^low识别人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的优势

目的:探索可用于检测人外周血中CD4+CD25+Treg细胞的最佳标记物。方法:以52名健康人和47名非血液系统肿瘤患者为研究对象,采用多色免疫荧光素标记和多参数流式细胞术同时检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞,并以经典指标CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+为标准,分析和比较CD4+CD25+CD127low作为识别CD4+CD25+Treg细胞的可行性及其优势。结果:健康人和肿瘤患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞占CD4+T细胞百分比分别为(1.769±0.682)和(2.958±1.392);(2.905±1.772)和(5.128±2.227)以及(5.396±1.306)和(7.175±2.565)。三者呈相同的趋势,即肿瘤患者组>健康人组,且三者之间呈显著正相关(P<0.05)。用两种不同标记法高纯度分选CD4+CD25high和CD4+CD25+CD127lowT细胞群后,FoxP3阳性率分别为90.9和92.7。结论:CD4+CD25+CD127low三标记法可以帮助识别CD4+CD25+Treg和部分激活的CD4+T细胞,提高CD4+CD25+Treg细胞的可检出数量,并且不影响细胞活性度,是反映CD4+CD25+Treg细胞更理想的指标。

RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响

目的:探讨RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、成髓细胞瘤转录因子第2亚型(MYBL2)在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响。方法:选取2017年1月至2019年1月于本院就诊的134例胃癌患者术后癌组织标本作为研究对象,另选取其中62例胃癌患者相应的癌旁组织标本及40例同期非胃癌患者正常胃黏膜组织标本进行对照,检测癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达情况,分析其对胃癌预后及生存时间的影响。结果:RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在癌组织中的阳性率均明显高于癌旁组织和正常胃黏膜组织(P<0.05)。胃癌患者术后平均生存时间为(28.61±1.34)个月,其中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2阳性患者的生存时间均短于阴性患者(P<0.05)。RhoA(+)、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(+)、MYBL2(+)是胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:检测RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达可作为胃癌病情严重程度、预后及生存时间评估的重要补充手段。

中国健康人外周血中具有CD4^+CD25^(nt/hi)CD127^(lo)特征的调节性T细胞频率

目的:初步确定健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞(Treg)频率,为临床相关疾病的研究及Treg的分选提供参考。方法:采集312名8~60岁(5个年龄组)、不同性别健康人的静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞频率,并观察细胞内Foxp3转录因子的表达。结果:健康人CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞在外周血中约占CD4+T细胞的(6.55±0.11)%,各年龄组之间有差异(P=0.015),组内性别之间也存在统计学意义(P<0.05);CD25nt/hiCD127lo细胞特异性地表达Foxp3转录因子。结论:初步确定了中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo表达特征的细胞频率,为Treg细胞的临床研究奠定了基础;CD25nt/hiCD127lo作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,可在分选时排除其他细胞干扰,获得较完整的Treg细胞。

浆细胞性乳腺炎患者外周血CD4^+CD25^+CD127^-调节性T细胞变化

目的:观察浆细胞性乳腺炎(Plasma cell mastitis,PCM)患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(CD4+CD25+CD127-Treg)数量和功能变化,以探讨PCM免疫病理机制。方法:将58例浆细胞乳腺炎患者分成三组:其中急性组13例(22%)、亚急性组25例(43%)和慢性组20例(34%)。并设正常对照组20例及乳腺癌对照组16例。以流式细胞术检测各型PCM患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg细胞百分率;实时荧光定量RT-PCR检测转录因子Foxp3表达及ELISA检测TGF-β水平。结果:三组PCM组与正常组相比,外周血CD4+CD25+CD127-Treg数量,外周血PBMC中Foxp3表达及血浆TGF-β水平均下降(P<0.05),其中急性PCM组下降最为明显(P<0.01),乳腺癌组三项指标均升高(P<0.05)。结论:浆细胞性乳腺炎患者的CD4+CD25+CD127-Treg数量及功能有所下降。

结核性胸膜炎患者外周血及胸水中CD4^+ CD25^+ CD127^-调节性T细胞表达水平的临床意义

目的:探讨结核性胸膜炎外周血和胸水中CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞表达水平及其临床意义。方法:收集住院收治的初治结核性胸膜炎患者30例和非结核性胸膜炎患者20例,另选择健康体检人员20例为正常对照组。流式细胞术检测外周血及胸水中CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞的百分率。结果:结核性胸膜炎组外周血中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+T细胞总数的百分比显著高于正常对照组和非结核性胸膜炎组(P<0.05)。结核性胸膜炎组胸水中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+T细胞总数的百分比明显高于非结核性胸膜炎组(P<0.05)。结核性胸膜炎组患者在规则治疗1、3、7、14 d时,外周血和胸水中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+T细胞总数的百分比均逐渐下降,外周血中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+ T细胞总数的百分比于治疗3 d时显著低于入院时水平(P<0.05),胸水中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+ T细胞总数的百分比于治疗7 d时显著低于入院时水平(P<0.05)。结论:CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞参与了结核性胸膜炎的发病机制,且可作为判断肺结核患者的免疫状态、指导用药、疗效观察的指标。

非霍奇金淋巴瘤患者外周血CD4^+CD25^(high)调节性T细胞研究

本研究分析B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25high调节T(Tr)细胞比例及其变化规律,初步探讨B-NHL免疫抑制机制,以及化疗对此免疫抑制功能的影响。采用流式细胞术检测42例初治B-NHL患者、36例化疗后达CR/PR患者及15例正常健康者(对照组)外周血CD3+、CD4+、CD8+和CD4+CD25highT细胞的比例。结果显示:B-NHL患者CD3+及CD4+T细胞比例、CD4/CD8比值均低于正常对照组,它们依次为(68.33±15.27)%,对照(72.06±9.26)%;(34.47±12.84)%,对照(42.45±9.2)%;1.36±0.26,对照1.92±0.20,但CD4+CD25highTr细胞比例明显高于正常对照组,为(4.10±1.21)%,对照(2.04±1.03)%,(P<0.001)。化疗后组CD4/CD8比值低于化疗前组(P<0.05);而外周血CD4+CD25highTr细胞比例,显著高于化疗前组和对照组(P<0.01)。结论:B-NHL初治化疗前及化疗后患者外周血CD4+CD25highTr细胞比例都显著升高,提示CD4+CD25highTr细胞可能是B-NHL患者免疫抑制的重要原因之一。

卵巢癌患者外周血CD4^+ CD25^(hi) CD127^(lo)调节性T细胞格局变化及临床意义

目的:观察卵巢癌患者外周血中CD4+CD25hiCD127lo调节性T细胞格局变化及其相关免疫细胞因子TGF-β1、IL-10的变化及与临床病理特征之间的关系,探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测70例卵巢癌患者、50例卵巢良性疾患及70例健康者外周血单个细胞中调节性T细胞的比率和血浆TGF-β1、IL-10的水平。结果:①卵巢癌患者外周血中CD4+CD25hiCD127loTreg调节性T细胞占CD4+细胞的比例为6.32%±1.46%(n=70),显著高于卵巢良性疾患4.03%±1.25%(n=50)和健康对照组3.21%±0.96%(n=70),均P<0.01。术后患者CD4+CD25hiCD127loTreg比率与术前比较无明显差异。②卵巢癌患者血浆中TGF-β1、IL-10水平(256.68±56.34)pg/ml、(28.24±3.12)ng/ml,明显高于良性疾患(156.48±43.68)pg/ml、(20.58±2.39)ng/ml与健康对照组(130.24±35.60)pg/ml、(18.38±2.98)ng/ml,有统计学差异,分别P<0.001,P<0.01。③术前卵巢癌患者外周血CD4+CD25hi CD127lo Treg比率、血浆中TGF-β1、IL-10水平与患者的临床分期、淋巴结转移以及远处转移有关,P<0.05～P<0.001。④相关分析显示,卵巢癌患者外周血CD4+CD25hiCD127lo Treg比率与血浆中TGF-β1水平、IL-10水平呈正相关,r=0.734,P<0.01;r=0.665,P<0.01。结论:①CD4+CD25hiCD127lo Treg在卵巢癌患者外周血中表达显著增高,这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因,并与临床病理特征存在显著相关性;②卵巢癌患者血浆中抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10水平明显升高,并与临床病理特征存在显著相关性;③CD4+CD25hiCD127loTreg与TGF-β1、IL-10水平存在正相关,CD4+CD25hiCD127loTreg可能通过产生抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10对效应性T细胞发挥抑制作用。

糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞水平的影响

目的:探讨糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)水平的影响。方法:采用糖皮质激素吸入治疗70例发作期哮喘患儿,应用流式细胞术检测患儿外周血的Tr细胞数。结果:糖皮质激素规则治疗后患儿外周血CD4+CD25+Tr水平(7.05%±1.61%)明显高于治疗前(5.62%±1.29%),P<0.01。完全控制组患儿外周血CD4+CD25+Tr水平最高(7.56%±1.88%),部分控制组患儿次之(7.09%±1.23%),控制不佳组患儿最低(6.11%±1.96%),差异均显著,P<0.05。经激素规则治疗的患儿外周血Tr水平(7.05%±1.61%)明显高于不规则治疗组患儿(5.91%±1.76%),P<0.01。结论:规则使用糖皮质激素吸入疗法可明显提高哮喘患儿外周血Tr水平,Tr水平与哮喘的激素治疗效果有关。

慢性乙型肝炎患者外周血中CD4^+CD25^+调节性T细胞的变化和意义

目的观察慢性乙型肝炎感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的频率,特征性表型及与临床指标的相关性。方法采集44例慢性乙型肝炎,29例健康人外周血,多色流式分析Treg的频率,CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的频率。所有病例均经酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量及肝功能的检测。结果慢性乙型肝炎组Treg的频率(5.02%±2.07%)显著高于正常对照组(3.35%±1.51%,P<0.05);Foxp3在Treg上特异性表达,慢性乙型肝炎组CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的频率(2.05%±1.03%)显著高于正常对照组(1.30%±0.68%,P<0.05);慢性乙型肝炎组Treg的频率与病毒载量呈正相关。结论Treg在慢性乙型肝炎感染者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素。

急性冠脉综合征患者外周血中CD4^+ CD25^+调节性T细胞的检测及意义

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的异常与疾病的关系。方法28例ACS患者(ACS组)2、6例稳定性心绞痛(SAP)患者(SAP组)和30例正常人(对照组)作为入选对象,均采用流式细胞术检测各组外周血中Treg表达百分比,并检测各组Treg的功能状态,ELISA法检测循环及上清液中细胞因子TNF-α和IL-10浓度,常规检测循环CRP及血脂水平。结果外周血中Treg表达百分比水平及功能ACS组显著低于SAP组(P<0.05)和对照组(P<0.05),CRP、TNF-α的水平ACS组显著高于SAP组(P<0.05)和对照组(P<0.05),ACS组IL-10的水平显著低于SAP组(P<0.05)和对照组(P<0.05)。结论ACS患者外周血中Treg比例减少及功能的降低可能破坏了外周免疫耐受的平衡,参与炎症反应激活致动脉粥样硬化发生发展这一病理过程。

胃癌患者外周血及癌组织中CD4^+ CD25^+调节性T细胞、转录因子Foxp3的表达及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血及胃癌组织中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)和转录因子Foxp3表达及临床意义。方法收集38例胃癌患者术前血液样本和20例健康体检者血液样本进行流式细胞仪检测,同时胃癌组中留取胃癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>5 cm)进行免疫组化染色,检测CD4+CD25+Foxp3+Tregs表达,并与胃癌的TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴转移、肿瘤所在部位、肿瘤直径等相关参数进行分析。结果胃癌组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达水平与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且在胃癌TNM分期、淋巴转移组内比较差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌组织中Foxp3+Tregs的表达水平与癌旁组织相比,差异有统计学意义(P<0.01),且在胃癌TNM分期、分化程度、淋巴转移组内比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。外周血中CD4+CD25+Foxp3+Tregs与胃癌组织中Foxp3+Tregs的表达水平呈显著正相关(r=0.786,P<0.01)。结论外周血中CD4+CD25+Foxp3+Tregs和组织中Foxp3+Tregs在胃癌患者中明显增加,且与胃癌发生、发展关系密切,可为胃癌的早期诊断和免疫治疗提供理论基础。

慢性丙型肝炎患者外周血CD4^+ CD25^(high)调节性T细胞与抗病毒疗效的关系

目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)与抗病毒疗效的关系。方法选取83例完成抗病毒治疗和随访的慢性丙型肝炎患者作为研究对象(慢性丙型肝炎组)。分别在治疗前和治疗12、48周及随访24周时,采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25highTreg百分比,并进行血清丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量和肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)等指标的检测。设立正常对照组(n=32)。结果与正常对照组比较,治疗前慢性丙型肝炎组外周血中的CD4+CD25highTreg百分比和血清ALT、AST均显著升高(P<0.05)。在治疗12周时,32例患者获得早期病毒学应答(EVR),外周血CD4+CD25highTreg百分比和HCV-RNA定量结果与治疗前和未获得EVR患者比较,差异均有统计学意义(P<0.01),但血清ALT无明显变化。在治疗48周时,慢性丙型肝炎病毒学应答组(HCV-RNA定量结果低于最低检测限)(n=51)患者外周血中CD4+CD25highTreg百分比、HCV-RNA定量结果和血清ALT均显著低于治疗前和无病毒学应答组(n=32)(P<0.01),慢性丙型肝炎无病毒学应答组患者各项检测指标治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后随访24周时,病毒学应答组中有39例患者获得了持续病毒学应答(SVR),外周血中的CD4+CD25highTreg百分比、HCV-RNA定量及血清ALT均显著低于治疗前和未获得SVR患者(P<0.01);而未获得SVR患者的各项检测指标均较治疗结束时(48周末)明显升高(P<0.05)。结论慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗及随访过程中外周血中CD4+CD25highTreg百分比的变化对预测疗效和复发有一定的价值。

鼻咽癌组织与外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞检测及临床意义

目的通过检测鼻咽癌患者肿瘤组织及外周血中CD4+T、CD8+T、CD4+CD25-T、CD4+CD25+T细胞的频数,寻找客观、全面评价鼻咽癌患者免疫状态的临床指标。方法采用流式细胞术检测40例初诊鼻咽癌患者及10例正常对照鼻咽部组织和外周血CD4+T、CD8+T、CD4+CD25-T、CD4+CD25+T细胞比例。结果鼻咽癌患者CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+T比值均低于对照组(P<0.05),而CD8+T细胞两组间差异无统计学意义(P>0.05),但是CD4+/CD8+T比值在鼻咽癌组织与外周血间差异无统计学意义(P>0.05)。鼻咽癌组织及外周血中CD4+CD25+T细胞比例都高于对照组(P<0.05),同时癌组织中该细胞比例远远高于外周血(P<0.05)。在鼻咽癌组织中CD4+CD25+T细胞与CD8+T细胞、CD4+CD25-T细胞呈负相关(r分别为-0.70、-0.675,P<0.05),而在外周血中没有相关关系(P>0.05)。在不同T(原发肿瘤大小)组间,T4组的鼻咽癌组织中CD4+CD25+T细胞分别高于T1、T2、T3各组(P<0.05),而在T1、T2、T3各组间差异无统计学意义(P>0.05);鼻咽癌中CD4+CD25+T细胞比例与患者有无淋巴结转移并无关系(P>0.05);鼻咽癌组织中Ⅲ+Ⅳ期组CD4+CD25+T细胞比例高于Ⅰ+Ⅱ期组(P<0.05),而在外周血中两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD4+CD25+T细胞与鼻咽癌病程进展无相关性,但是联合检测患者肿瘤组织及外周血中CD4+CD25+T细胞的频数并结合既往CD4+/CD8+T比值会全面反应患者免疫状态,为临床治疗提供依据。

胃癌患者不同区域淋巴结和外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的表达和临床意义

目的探讨胃癌患者不同区域淋巴结及外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)频数变化和临床意义。方法收集45例胃癌患者不同区域淋巴结及外周血标本,采用流式细胞仪检测各标本中Tregs占CD4+T细胞比例,并与胃癌TNM分期、分化程度等参数进行相关性分析。结果 Tregs在引流区阳性淋巴结、引流区阴性淋巴结、非引流区淋巴结、外周血中比例分别为(20.71±2.72)%、(14.43±2.62)%、(10.09±2.27)%、(9.72±2.13)%,前3组中两两相比均差异显著(P<0.05),后2组相比无显著差异(P>0.05)。引流区阳性淋巴结中Tregs细胞比例与肿瘤分期无显著相关(P>0.05);引流区阴性淋巴结、非引流区淋巴结、外周血中Tregs细胞比例与肿瘤分期相关(r=0.429、0.453、0.367;P<0.05),且Ⅲ+Ⅳ期Tregs比例显著高于Ⅰ+Ⅱ期比例。不同区域淋巴结Tregs分布与年龄、性别、肿瘤部位、病理分化间差异无相关性。结论 Tregs在不同区域淋巴结及外周血中分布表达呈递减趋势,可能是导致胃癌淋巴结微环境内出现局部免疫抑制,导致肿瘤细胞发生免疫逃逸的重要因素。

淋巴结核患者外周血CD4^+CD25^(high)FoxP3^+调节性T淋巴细胞以及血浆IFN-γ和IL-10水平及其临床意义

目的研究淋巴结核患者外周血CD4+CD25highFoxP3+调节性T淋巴细胞(Treg)和干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)水平的变化及临床意义。方法采用流式细胞仪对100例淋巴结核患者及30名正常人外周血CD4+CD25highFoxP3+Treg和IFN-γ、IL-10水平进行检测。结果淋巴结核患者组与正常对照组比较,外周血CD4+CD25highFoxP3+Treg和IL-10水平均升高(P<0.05),而IFN-γ水平则降低(P<0.05)。在干酪样型、增殖型和混合型3种类型的淋巴结核病之间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论淋巴结核患者细胞免疫功能明显异常。CD4+CD25highFoxP3+Treg和IFN-γ、IL-10在淋巴结核的发病过程中发挥了重要作用。

免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞

目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。

II型胶原蛋白对CIA大鼠外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞的影响

目的:观察Ⅱ型胶原蛋白对胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)的影响。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型。采用流式细胞术分别检测正常对照组、模型组、Ⅱ型胶原蛋白治疗组和雷公藤多苷组大鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg的水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠外周血CD4+T细胞亚群中CD25+FOXP3+Treg的水平明显下降(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,Ⅱ型胶原蛋白治疗组大鼠外周血CD25+FOXP3+Treg显著升高(P<0.05或P<0.01);而CD25+FOXP3-T细胞和CD25-FOXP3+T细胞的水平则明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:II型胶原蛋白治疗CIA大鼠的可能途径是升高外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg的水平。

不同病程寻常型银屑病患者外周血中CD4^+CD25^(high)调节性T细胞的比较与分析

目的:检测和分析不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(CD4+CD25highTreg)水平特点和意义。方法:选取进行期(70例)、稳定期(64例)和消退期(38例)寻常型银屑病患者,知情同意后,取外周抗凝全血,分离单一核细胞,采用流式细胞术检测不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25highTreg的水平,并统计分析其特点与意义。结果:进行期、稳定期和消退期寻常型银屑病患者组外周血CD4+CD25highTreg与CD4+淋巴细胞的百分比分别为(2.86±0.9)%、(3.95±0.6)%和(4.77±0.1)%。稳定期和消退期寻常型银屑病患者组明显高于进行期组(t’=8.312,P<0.01;t=10.126,P=0.000),而消退期组明显高于稳定期组(t’=4.588,P<0.01)。值得注意的是,消退期寻常型银屑病患者组与正常对照组比较,差异显著,消退期组仍低于正常对照组(t=2.281,P=0.0264)。结论:不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25highTreg水平存在显著差异,提示CD4+CD25highTreg与寻常型银屑病发生和病程发展关系密切。本研究为深入研究寻常型银屑病免疫学发病机制做出了初步的尝试与探索。

HIV感染者外周血CD4^+ CD25^+ Foxp3^+ /CD127^(low/-)调节性T细胞表达水平对疾病进展的影响

目的:探讨HIV感染者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)、CD4+CD25+CD127low/-Treg的水平及其与其他免疫指标的关系。方法:采集68例未经抗HIV治疗的HIV/AIDS患者(长期不进展组即LTNP组29例、典型进展的HIV感染组27例、AIDS组12例)及20例健康成人的外周抗凝全血,经免疫荧光染色,应用流式细胞仪分析CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg的含量,并进行统计学分析。结果:除CD8+T细胞外,HIV/AIDS患者外周血中CD4+T细胞、NK细胞、CD4+/CD8+结果均明显低于健康对照组(P<0.05);随着疾病的进展,LTNP组、HIV组、AIDS组CD4+T细胞百分比、绝对值计数,CD8+T细胞绝对计数,NK细胞绝对计数,CD4+/CD8+比值逐渐下降,而CD8+T细胞百分比逐渐上升。对CD4+CD25+Foxp3+Treg与CD4+CD25+CD127low/-Treg百分含量、绝对计数进行多重比较发现,各组间CD4+CD25+Foxp3+Treg与CD4+CD25+CD127low/-Treg所占CD4+T细胞百分含量的差异均有统计学意义(P<0.05),并且随着疾病的发展,CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg细胞百分含量逐渐上升,LTNP组与健康对照组之间、HIV组和AIDS组之间CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg绝对计数差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间的差异均有统计学意义(P<0.05),并且随着疾病的发展,CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg绝对计数逐渐下降。结论:CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg在HIV持续感染的免疫发病机制中有一定作用。