晚期非小细胞肺癌外周血EGFR基因检测与肿瘤抗原标志物临床价值

目的:探究原发性非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血EGFR基因检测与肿瘤抗原标志物临床价值。方法:选取本院2017-09~2018-09收治的NSCLC患者中的80例作为本次研究对象,均检测患外周血的EGFR基因以及血液肿瘤抗原标志物的表达情况,对两者检测结果进行评价分析。结果:EGFR基因突变检测结果中,阳性33例、阴性47例,基因突变率41.25%。EGFR基因突变情况多见于肺腺癌与女性患者(P<0.05);EGFR基因突变阳性患者的CEA值显著高于EGFR基因突变阴性(野生型)患者(P<0.05),而SCCAg值则显著低于EGFR基因突变阴性患者(P<0.05);EGFR基因突变阳性患者的CYFRA21-1、CA-125以及NSE表达水平与EGFR基因突变阴性患者的对比均为见显著差异(P>0.05)。结论:血清中肿瘤抗原标志物CEA浓度水平的升高、SCCAg表达水平下降与EGFR基因突变存在相关性,对血清CEA与SCCAg的检测可对EGFR基因突变的预测起到一定的效果,临床可结合优势人群选择使用EGFR-TKIs进行治疗,临床行血浆EGFR基因检测具有较高的实用价值。

外周血标本检测EGFR基因突变的操作体会

本文旨在介绍外周血样品应用扩增阻滞突变系统（ARMS法）检测EGFR基因突变的操作流程,以及在实际操作中可能遇到的问题,并对外周血检测EGFR基因的应用和优缺点进行总结。1材料与方法1.1材料1.1.1标本收集中日友好医院2015-08~11间送检的10例外周血样品,其中男性8例,女性2例,年龄45~77岁,平均年龄60.5岁。每例样品采血10 ml,EDTA抗凝。

细胞蜡块、肺原发灶和转移灶组织在肺腺癌EGFR/ALK/ROS1基因联合检测中的应用

目的探讨用457例肺腺癌患者的不同样本进行EAR(EGFR/ALK/ROS1)基因联合检测的意义。方法纳入2020年1月至2022年8月经病理确诊为肺腺癌患者457例,分别对415例肺组织标本(131例活检标本和284例手术切除标本)、32例浆膜腔积液细胞蜡块、10例转移灶组织进行EAR基因联合检测,比较肺组织标本与细胞蜡块、转移灶组织EAR基因异常检出情况。结果(1)457例肺腺癌患者EAR突变总检出率为64.3%(294/457),EGFR/ALK/ROS1分别为56.2%(257/457)、4.8%(22/457)、3.3%(15/457);肺组织标本、细胞蜡块、转移灶组织EAR基因检出率分别为:62.7%(260/415)、84.4%(27/32)、70.0%(7/10),三者数据检出率存在着统计学差异(P<0.05),其中细胞蜡块与肺活检组织检出率相比,有统计学差异(P<0.017)。(2)131例活检标本与284例手术切除标本EAR基因检出率分别为52.7%(69/131)、67.3%(191/284),手术切除标本比活检标本有更高的EAR基因检出率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞蜡块在EAR基因检测方面具有最高的突变检出率,当肺腺癌患者临床难以获取活检组织时,可以替代用于基因检测;肺手术切除标本比活检标本有更高的EAR基因突变检出率。

非小细胞肺癌患者胸水与外周血检测EGFR基因突变的比较

目的比较外周血和胸水两种样本检测EGFR基因突变的情况,为临床选取合适的送检标本提供参考。方法选取非小细胞肺癌(NSCLC)合并恶性胸腔积液病例65例,收集血液和胸水标本,分别抽取DNA,使用巢式PCR扩增检测。采用SPSS19.0软件进行数据处理。结果 65例NSCLC患者中有吸烟史的患者占44.6%。病理类型为腺癌的有53例,占81.5%;非腺癌12例,占18.5%。NSCLC分期为Ⅲb者有34例,占52.3%;Ⅳ31例,占47.7%。胸水总检出率(36.9%)高于血清总检出率(18.5%),两种样本中19号外显子突变检出率均高于21号外显子的。19号外显子的突变类型为删除突变,即DelE746-A750、DelE746-T751,胸水中多出一种DelL747-P753insS。21号外显子的突变类型为点突变,即L858R和L861Q。结论虽然外周血中的EGFR基因突变的检出率低于胸水中的,但是19和21外显子的突变情况在外周血和胸水标本中基本一致,循环DNA可以反映组织中DNA的变化。

非小细胞肺癌EGFR基因突变在外周血与淋巴结针吸标本中的对比分析

目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血与淋巴结针吸标本EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血标本EGFR基因突变的临床应用价值。方法采用ARMS法检测105例NSCLC患者淋巴结针吸标本及其配对外周血EGFR基因突变状态,比较外周血和淋巴结针吸标本基因突变的一致性,分析EGFR基因突变与NSCLC临床病理特征的关系。结果105例外周血中检出45例突变(突变率为42.86%),淋巴结针吸标本中检出50例突变(突变率为47.62%),两者一致性为83.81%(88/105),差异有统计学意义(Kappa=0.674,P<0.001)。外周血标本EGFR基因突变与患者性别、是否吸烟、临床分期及病理类型有关(P<0.05),与患者年龄及淋巴结直径无关(P>0.05);淋巴结针吸标本EGFR基因突变状态与患者性别、是否吸烟及病理类型有关(P<0.05),与患者年龄、淋巴结直径及临床分期无关(P>0.05)。结论NSCLC患者外周血与淋巴结针吸标本EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织及细胞学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为NSCLC患者提供临床诊疗帮助。

SYBR荧光实时定量PCR检测非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平

目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin的mRNA进行检测。结果:标准曲线呈良好的线性关系。标准品的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,说明基本无非特异性扩增。结论:所建SYBR荧光实时定量PCR方法操作简便,费用低,特异性好,准确度、灵敏度高,为后续研究构建了理想的平台。

非小细胞肺癌患者外周血及胸水中EGFR基因突变的研究

目的检测非小细胞肺癌患者外周血与新鲜胸水EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血标本在EGFR基因突变的临床应用价值。方法采用ARMS法检测51例非小细胞肺癌患者新鲜胸水及其外周血EGFR基因突变状态,比较外周血和新鲜胸水基因突变的一致性,分析EGFR基因突变与患者临床特征关系。结果 51例外周血中检出20例突变(突变率39.2%),其中19del突变11例(55%,11/20),L858R突变8例(40%,8/20),G719X突变1例(5%,1/20);新鲜胸水中检出24例突变(突变率47.1%),其中19del突变13例(54.2%,13/24),L858R突变10例(41.7%,10/24),G719X突变1例(4.1%,1/24)。两者突变一致性为80.4%(41/51),差异具有统计学意义(Kappa=0.603,P=0.000)。外周血及新鲜胸水EGFR基因突变状态均与性别、是否吸烟和病理类型有关(P<0.05),而与年龄及TNM分期无关(P>0.05)。结论非小细胞肺癌患者外周血与新鲜胸水EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织及细胞学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为非小细胞肺癌患者提供临床诊疗帮助。

外周血宏基因组二代测序在肺炎中的应用价值

目的评估外周血宏基因组二代测序(mNGS)技术在肺炎患者中微生物检测方面的应用价值。方法使用回顾性分析的方法,收集常州市第二人民医院收治的28例使用外周血mNGS技术进行病原学检测的肺炎患者,并与常规微生物学检测(CMT)方法进行比较。结果在这28例患者中,重症肺炎有19例,非重症肺炎有9例。mNGS对微生物的检出率(78.6%,22/28)与CMT(64.3%,18/28)相比差异无统计学意义(P=0.338)。mNGS对病毒的检出率高于CMT(P=0.004),但是在检出细菌(P=0.625)和真菌(P=0.118)方面无明显优势。进一步在重症肺炎患者的亚组分析中得到了同样的结果。经过综合评估,7例患者通过mNGS确诊病原体,分别为耶氏肺孢子菌(PJ)2例,PJ合并巨细胞病毒(CMV)2例,鹦鹉热衣原体2例和腺病毒1例。结论尽管血mNGS对病原微生物的检出率并不优于CMT,但是当病毒、PJ或鹦鹉热衣原体感染时,可以考虑使用血mNGS进行病原学诊断。

非小细胞肺癌患者外周血游离DNA的EGFR基因突变与靶向药物治疗疗效的相关性研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血游离DNA的EGFR基因突变与靶向药物疗效的相关性。方法选取60例NSCLC患者,均行外周血游离DNA EGFR基因检测,根据检测结果分组,EGFR突变型为观察组(n=13), EGFR野生型为对照组(n=47),两组均予以吉非替尼行EGFR-TKI治疗,比较两组的客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR),分析EGFR基因突变与疗效的相关性。结果两组的ORR比较无显著差异(P>0.05),观察组的DCR显著高于对照组(P <0.05)。Logistic回归分析结果显示,EGFR基因突变是EGFR-TKI治疗疗效的重要影响因素(P <0.05)。结论 NSCLC患者外周血游离DNA的EGFR基因突变与靶向药物治疗疗效具有相关性,能够为临床提供指导。

血型血清学检测在急性白血病病人非清髓异基因外周血干细胞移植中的意义

为了探讨ABO血型不合的急性白血病非清髓性异基因外周血干细胞移植中红细胞血型血清学检测的临床意义 ,采用红细胞凝集试验方法检测供、受者ABO和MN血型 ,用DianaGelphenotypeRh卡检测Rh血型。移植后观察受者血型和红细胞凝集素效价变化以及用STR PCR方法监测供者细胞植入情况。结果显示 ,4例受者中 2例供者细胞混合嵌合伴血型嵌合 ,其中 1例在移植后 1 0 0天转为完全嵌合 ,血型亦转为供者型。另 2例受者细胞呈供、受混合嵌合体 ,但血型未见转变 ,其中 1例在移植后 1 54天出现移植排斥。红细胞凝集素效价检测显示 ,受者红细胞凝集素效价高者 ,供者细胞植入率低 ,血型不易嵌合。反之 ,效价低者 ,供者细胞植入率高 ,血型易嵌合。结论 :在非清髓外周血干细胞移植 (NAPBSCT)中红细胞血型血清学检测可间接反映移植效果 ,协助确定临床预处理方案和移植后免疫抑制治疗的强度 ,估计预后 。

生理状态下外周血白细胞IL-2基因表达的荧光定量PCR检测

目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。

孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因的检测

目的 探索检测孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因表达的方法。方法 提取孕妇全血mRNA ,经体外逆转录后 ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,以NdeⅡ酶切后 ,经琼脂糖凝胶电泳 ,在凝胶成像系统下观察。结果 成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断 ,大小分别为 191、5 7和 2 6bp。结论 孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求 ,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础。

外周血单个核细胞内乙型肝炎病毒基因的检测及临床应用

乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒，主要侵犯肝脏，但是目前在许多肝外组织和细胞中，已发现了HBV核酸及其相关抗原。乙型肝炎的发病机制主要与机体免疫状态有关。HBv感染外周血单个核细胞(PBMCs)会直接影响机体的免疫功能，所以对PBMCs内HBV-DNA的检测有重要意义。为此，本室在HBV-preS/S区设计合成了一对核酸引物，采用聚合酶链反应(PCR)方法检测乙型肝炎病毒感染者的血浆及PBMCs内的HBV-DNA，现将结果报告如下。

孕妇外周血中胎儿特异性血红蛋白基因的检测与定性分析

目的 :自孕妇外周血中检测胎儿γ血红蛋白基因及探索GelWorks 1D软件应用于PCR扩增产物的定性分析。方法 :提取孕妇全血mRNA ,经体外逆转录后 ,应用ε/γ引物引导扩增胎儿特异血红蛋白基因片段 ,以NdeⅡ内切酶对其酶切 ,经琼脂糖凝胶电泳 ,凝胶成像系统扫描成像 ,用GelWorks 1D软件对凝胶图像进行定性分析。结果 :成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因。定性标准曲线公式 :Y =0 0 3 5 92X2 -11 94X + 10 92 ,R2 =0 9978,精确度为 98 6%。ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断 ,大小分别为 191bp、 5 7bp和 2 6bp。结论 :GelWorks 1D软件可以对PCR扩增产物进行定性分析 ,孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求 。

外周血基因转录本检测中2种标本处理方法的比较

目的 选择合理的标本处理方法 ,提高外周血基因转录本检测的灵敏度。方法 5 3例胃癌患者外周血标本分别以淋巴细胞分离液 (FICOLL)和红细胞裂解液 (RLS)处理后提取RNA ,以荧光定量RT PCR技术检测 β actin基因和CEA基因转录本。 结果 RLS法和FICOLL法定量检测 5 3例外周血标本的 β actin基因转录本的平均浓度分别为 1.19× 10 6和 2 .4 0× 10 5拷贝 /ml,2组测定值差异有显著性 (P <0 .0 1)。RLS法检测 5 3例中 13例为CEAmRNA阳性 ,阳性率为 2 4 .5 % ;FICOLL法检测到 5例阳性 ,阳性率 9.4 % ,RLS法的阳性检出率高于FICOLL法 (P <0 .0 5 )。结论 RLS法分离外周血有核细胞的效果优于FICOLL法 ,有利于提高基因表达检测的灵敏度。

3例复发性流产患者外周血的基因芯片检测结果初步分析

目前我国将流产定义为妊娠在28周以前,胎儿在1000g以下者,分为自然流产和人工流产。在所有临床确认的妊娠中,自然流产的发生率约为15%,连续2次及2次以上自然流产的发生率为5%。

胃癌患者外周血EGFRmRNA检测的研究

目的：检测胃癌患者外周血中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor EGFR)并分析其临床病理联系。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测57例胃癌患者及30例健康人外周血EGFRmRNA。结果：30例健康对照组外周血EGFR均为阴性。胃癌患者组EGFRmRNA表达24／57。EGFRmRNA表达阳性在TNM分期中为Ⅰ期3／11，Ⅱ期3／19，Ⅲ期13／21及Ⅳ期5／6(P<0．05，Ⅰ，Ⅱ VS Ⅲ，Ⅳ)。胃癌病理上在低未分化及中高分化癌问经x。检验有显著差异。结论：RT-PCR方法检测胃癌患者外周血中EGFRmRNA表达与其临床及病理分期相关。此项指标检测可作为胃癌治疗及预后的参考指标。

PCR-MASA检测胰腺癌外周血K-ras基因点突变的研究

目的 了解胰腺癌外周血中 K- ras基因点突变检测的临床价值。方法 采用 PCR- MASA法检测胰腺癌患者外周血中 K- ras基因点突变。结果 胰腺癌外周血标本中 K- ras基因点突变率为38.1% (8/ 2 1) ,而所有被检测的急、慢性胰腺炎、胰岛素瘤、壶腹癌、十二指肠乳头癌、胆管癌及胆石症患者外周血标本均无 K- ras基因突变。结论 (1) PCR- MASA方法简捷、特异、敏感 ,扩增产物只需常规电泳、染色即可观察结果 ,无需酶切、杂交、放射性和非放射性显影 ;(2 )对外周血标本检测 K- ras基因第12位密码子有无突变 ,具有临床实用性 ,有助于判断胰腺病变良恶性及胰腺癌的早期诊断。