人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养对外周NK细胞的影响

为了分析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达;显著上调Th2型细胞因子IL-10的表达水平,下调外周NK细胞穿孔素perforin表达及其细胞毒活性。结果表明,母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境。

溃疡性结肠炎大鼠模型的建立及外周血NK细胞活性的改变

目的 通过建立Wistar大鼠溃疡性结肠炎 (UC)模型 ,探讨外周血NK细胞活性的变化和发病机理的关系。方法 采用饮用Dextransulfatesodium (DSS)水溶液 ,复制UC动物模型 ,随机分为 4组 ,即模型组 :每天饮用生理盐水 6ml(简称M) ;锌治疗组 (Zn组 ) :每天 2次灌肠给予硫酸锌 180mg kg ;硒治疗组 (Se组 ) :每天给予硒力口服液 (含硒 6 0 μg ) 6ml;锌 +硒治疗组 :(ZS组 )每天给予上述剂量硫酸锌 硒力口服液 6ml;均给予 15d ,另设正常对照组 (C组 ) ,每天饮用生理盐水 6ml。用微量乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定各组外周血NK细胞活性。采用火焰原子吸收法测定结肠粘膜锌含量。采用荧光分光光度计比色法测定结肠粘膜硒含量。结果 DSS所致大鼠UC模型简单易行 ,与人类病变相类似。模型组外周血NK细胞活性较正常组降低 (P <0 0 5 ) ,经硒治疗后则有明显回升 (P<0 0 5 )。应用锌、硒治疗后结肠粘膜局部相应微量元素的含量明显提高 (P <0 0 1)。结论 经硒治疗后NK细胞活性明显升高 ,微量元素 (锌和硒 )

十二指肠溃疡急性期寒热辨证与外周血NK细胞关系研究

目的:观察十二指肠溃疡急性期寒热辨证与外周血NK细胞的关系,为中医微观辨证寻找依据。方法:选择80例急性期十二指肠溃疡病患者作为观察组进行寒热辨证,研究其寒热分型情况,并对其中45例患者进行了寒热分型与外周血NK（自然杀伤）细胞变化的相关性研究。同时选择12例健康者作为正常对照组。结果:热证51例,寒证29例,热证的阳性发病率范围为53.27％-74.33％。45例NK细胞在热证中高于正常对照组（P<0.05）。结论:十二指肠溃疡病急性期热证多见;其寒热证型与外周血NK细胞变化有相关性。

外周T细胞及NK细胞淋巴瘤诊疗现状

外周T/NK细胞淋巴瘤(PT/NKCLs)是一组高度异质性的T/NK细胞恶性肿瘤,在全球平均发病率低,具有明显的地域和种族差异性,亚洲人群相对高发,病理亚型差异性更显著,也是影响预后的最关键因素。目前治疗以CHOP类方案为主,因此初治高危的侵袭性PTCLs、二线挽救化疗有效的复发难治患者,均应考虑大剂量化疗联合造血干细胞移植,自体干细胞移植仍然作为首选。新的化疗药物,如Pralatrexate、苯达莫司汀等,对复发难治的PTCLs有效率约30%。靶向药物包括单抗类药物、针对细胞内信号传导通路的小分子抗体药物以及免疫调节药物,也在不同亚型PTCLs中取得一定疗效。本综述对PT/NKCLs诊治现状做一总结。

ULBP3基因转染提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性

目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos -2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT -PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因 ,构建pcDNA3真核表达质粒 ,以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞 ,用percoll密度梯度离心法分离人外周血NK细胞作为效应细胞 ,以Saos -2细胞和转染ULBP3基因的Saos-2细胞作为靶细胞 ,进行体外杀伤实验 ,比较两组的特异性杀伤率。结果 在效靶比为 3 0∶1时人外周血NK细胞对转染ULBP3基因的Saos-2细胞的特异性杀伤率明显高于对照组。结论 ULBP3基因转染能提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性。

恶性血液病患者外周血NK细胞数量变化及意义

目的:研究恶性血液病患者的外周血NK细胞数量变化,并分析其临床意义。方法:选取2013年6月-2015年3月在本院接受诊治的恶性血液病患者200例作为研究对象,其中急性期组105例,缓解期组95例。选取同一时期来我院进行健康体检者100例作为对照组。比较各组外周血NK细胞数量和亚群的变化。结果:对照组NK细胞绝对数为(412.91±167.35)/μl,相对数为(13.31±2.56)%;白血病急性期组NK细胞绝对数为(97.84±23.18)/μl,相对数为(6.79±0.78)%;淋巴瘤急性期组NK细胞绝对数为(101.79±25.63)/μl,相对数为(7.12±1.03)%;白血病缓解期组NK细胞绝对数为(297.17±87.56)/μl,相对数为(10.15±1.64)%;淋巴瘤缓解期组NK细胞细胞绝对数为(288.52±118.52)/μl,相对数为(10.82±1.97)%。各组患者NK细胞数量比较具有统计学差异(P<0.05),缓解组患者治疗前后的NK细胞数量具有统计学差异(P<0.05)。对照组的CD56bright亚群数为(25.28±4.72)%,在白血病急性期组为(65.46±11.21)%,在淋巴瘤急性期组为(70.71±12.14)%,在白血病缓解期组为(23.35±4.67)%,在淋巴瘤缓解期组为(24.89±4.58)%,各组间比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:恶性血液病患者外周血NK细胞数量降低,细胞功能下降。经过治疗后,患者NK细胞数量上升。

反复种植失败患者外周血NK细胞的临床意义

目的探讨外周血自然杀伤(natural killer,NK)细胞比例差异与反复种植失败(repeated implantation failure,RIF)的关联性,外周血NK细胞比例对RIF患者胚胎移植后妊娠结局的预测价值。方法选取2016年6月至2018年6月在桂林医学院附属医院生殖医学中心行体外受精胚胎移植( in vitro fertilization and embryo transplantation,IVF-ET)的RIF患者(77例)与非RIF患者(59例),用流式细胞仪检测两组患者月经期外周血CD3 -CD16 +CD56 +(NK)细胞群占淋巴细胞的比例。本研究通过回顾性分析,根据妊娠结局再将RIF患者分为妊娠失败组(49例)和妊娠组(28例),比较RIF患者妊娠失败组与妊娠组间月经期及胚胎种植日NK细胞比例差异。结果月经期RIF组较非RIF组患者外周血NK细胞比例增高,差异有统计学意义[(20.78±7.64)% vs (16.37±6.59)%, P <0.05];RIF 患者妊娠失败组与妊娠组月经期、胚胎移植日NK细胞比例相比较无明显差异[(21.16±8.15)% vs (20.37±8.48)%,(19.69±8.15)% vs (19.03±4.36)%, P >0.05]。结论 RIF的发生与月经期外周血NK细胞比例的异常增高具有一定的相关性,然而月经期及胚胎移植日NK比例水平对RIF患者胚胎种植结局无明显预测价值。

反复妊娠失败并发遗传性易栓症患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与妊娠结局的关系分析

目的研究反复妊娠失败(RRF)并发遗传性易栓症(IT)患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与妊娠结局的关系。方法选取该院2017年1月—2020年12月收治的85例RRF并发IT患者纳入研究,将其按照妊娠结局分作流产组41例和正常妊娠组44例。以流式细胞技术完成对所有受试者外周血NK细胞百分数以及外周血NK细胞杀伤活性的检测并进行对比。采用Spearman相关性分析明确RRF并发IT患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与流产的关系。结果流产组孕0周、孕6周的外周血NK细胞百分数分别为(13.02±1.33)%、(13.74±1.28)%,均高于正常妊娠组的(8.15±1.01)%、(8.36±1.06)%,差异有统计学意义(t=19.092、21.162,P<0.05);两组外周血NK细胞百分数在孕8周、孕12周时对比,差异无统计学意义(P>0.05);两组孕8周、孕12周时的外周血NK细胞杀伤活性对比,差异无统计学意义(P>0.05)。经Spearman相关性分析可得:RRF并发IT患者孕0周、孕6周的外周血NK细胞百分数、外周血NK细胞杀伤活性均和流产呈正相关关系(P<0.05)。结论RRF并发IT患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与妊娠结局均密切相关,随着孕0周和孕6周的外周血NK细胞百分数及其杀伤活性增加,不良妊娠风险升高。

卵巢肿瘤患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D与其配体MICA表达的初步研究

目的:研究卵巢癌、良性卵巢肿瘤患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达及局部组织中相应配体MICA的表达情况,并结合临床病理因素分析探讨宿主NK细胞受体NKG2D在抗卵巢癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对4 2例卵巢癌、2 3例良性卵巢肿瘤及2 0例正常妇女,采用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况,RT PCR技术检测在上述部分相应组织标本中MICA的表达。结果:恶性、良性卵巢肿瘤患者及正常人外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为( 94 2 3±6 0 2 ) %、( 98 70±0 98) %、( 98 6 1±1 5 9) % ,恶性组与另两组之间比较,差异有统计学意义(P <0 0 5 ) ;相应配体MICA在卵巢癌组织中的表达率较良性卵巢肿瘤中明显增高,差异有统计学意义(P <0 0 1) ;在卵巢癌病人是否绝经、不同组织类型、分化程度、手术分期及是否淋巴转移等各组临床病理情况下,其表达率未见明显差异(P >0 0 5 )。结论:卵巢恶性肿瘤患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D的配体MICA的基因表达可能与卵巢癌的恶性转化有一定的相关性,卵巢癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MI

妊娠期uNK、pNK细胞NKG2A与NKG2D的表达及其生物学意义的研究

目的:研究妊娠期妇女子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)表面NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨uNK细胞表面NKG2A和NKG2D的不平衡表达与母胎界面所形成的免疫耐受关系。方法:采用流式细胞术检测30例孕6～9周的正常妊娠妇女uNK细胞和pNK细胞NKG2A、NKG2D的表达状况;RTPCR技术检测绒毛膜组织HLAE、MICA的表达。结果:子宫NK细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞,二者分别为(97.86±1.75)%与(33.35±10.92)%;子宫NK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(93.21±4.52)%与(97.80±1.72)%,滋养层组织仅检测到HLAEmRNA的表达。结论:妊娠期子宫NK细胞表面高表达抑制性受体NKG2A,同时滋养层组织表达相应的配体HLAE,这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。

母-胎界面趋化因子及其受体表达与NK细胞在蜕膜中选择性聚集的关系

目的探讨母-胎界面中自然杀伤细胞(NK细胞)募集机制及生物学意义.方法留取8～10孕周正常孕妇行人工流产术后滋养层、蜕膜组织及外周血标本.采用免疫磁珠法分离、纯化外周血及蜕膜中NK细胞,逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测蜕膜和滋养层组织中的趋化因子,检测外周血、蜕膜NK细胞中相应的趋化因子受体及血源性生长因子.结果获得了高纯度的NK细胞;蜕膜和滋养层组织中可检测到某些趋化因子的表达;在蜕膜与外周血NK细胞中检测到有相应的趋化因子受体的表达及血源性生长因子.结论蜕膜中的NK细胞可能来源于外周血NK细胞,并由趋化因子募集而来,其可能参与母-胎界面血管形成.

不明原因复发性自然流产患者外周血NK细胞与蜕膜NK细胞检测价值分析

目的研究不明原因复发性自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞数量和活性。方法选择不明原因复发性自然流产患者作为研究组(RSA组),人工流产中止早期妊娠妇女为对照组,分别检测外周血和蜕膜NK细胞数量和活性。结果非孕期,RSA组外周血NK细胞数量和活性均高于对照组(P<0.05);RSA组非染色体因素再次自然流产妇女,外周血NK细胞数量和活性也高于成功妊娠组(P<0.05);RSA组非染色体因素再次自然流产妇女,蜕膜NK细胞数量和活性则显著低于对照组(P<0.05)。结论外周血NK细胞数量和活性可作为RSA免疫治疗监测的指标,外周血NK细胞和蜕膜NK细胞可能在RSA中发挥了不同的作用。

原发性肝癌患者外周血中NK细胞亚群及杀伤功能的研究

目的对原发性肝癌患者外周血NK细胞数目、亚群及其杀伤功能进行检测,分析原发性肝癌外周血中NK细胞的特点及机制。方法临床确诊原发性肝癌(HCC)患者110例,健康对照69例,采用流式细胞仪检测外周血NK细胞的数目及亚群;将IL-2活化的PBMC与CFSE标记的K562细胞混合,流式细胞仪检测NK细胞的杀伤活性。结果 1)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期原发性肝癌患者外周血NK细胞占淋巴细胞的比率均显著低于健康对照(P均<0.01);2)与健康对照相比,Ⅰ、Ⅱ期原发性肝癌患者外周血CD56bright NK细胞占淋巴细胞的比率无显著变化(P>0.05),Ⅲ期原发性肝癌患者CD56bright NK细胞占淋巴细胞的比率显著升高(P<0.05);3)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期原发性肝癌患者外周血CD56dimNK细胞占淋巴细胞的比率显著低于健康对照(P均<0.01);4)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期原发性肝癌患者外周血NK细胞CD56bright/CD56dim NK cells值显著高于健康对照(P均<0.01);5)原发性肝癌患者外周血NK细胞裂解杀伤靶细胞K562细胞的活性与健康对照相比显著降低(P<0.05)。结论原发性肝癌患者外周血NK细胞数量显著降低,可能是CD56bright NK细胞的显著增高和CD56dimNK细胞显著降低综合作用的结果。原发性肝癌患者外周血NK细胞的杀伤活性显著降低,可能与CD16+NK细胞减少有关。提示以NK为代表的天然免疫系统参与了肝癌的发生与发展。

外周T／NK细胞淋巴瘤治疗的进展

外周T细胞淋巴瘤（PTCL）是一组异质性非常明显的淋巴瘤，起源于成熟T淋巴细胞，对传统化疗反应不佳，大部分患者预后差。对复发难治患者的治疗选择尚未达成共识。目前正在进行一些新的临床试验，探讨一些新的治疗方法和药物，如第一次缓解后采用自体干细胞移植进行巩固治疗的前瞻性临床研究，以及denileukin diftitox或者CD52单抗（alemtuzumab）等靶向治疗药物与化疗的联合等。文章对外周T／NK细胞淋巴瘤的流行病学、预后因子和目前的治疗进行了探讨。

重组人生长激素注射液联合乌司他丁对ICU重度胰腺炎患者外周血NK细胞、内源性SS的影响

目的研究重组人生长激素注射液联合乌司他丁对ICU重度胰腺炎患者外周血自然杀伤(NK)细胞、内源性生长抑素(SS)水平的影响。方法将2018年5月至2019年10月本院收治的120例ICU重度胰腺炎患者纳入研究,采用随机数字表法将入选患者分为观察组和对照组,每组60例。两组患者均给予基础治疗,对照组采用单一乌司他丁药物治疗,观察组在对照组基础上联合重组人生长激素注射液治疗。比较两组外周血NK细胞、内源性SS水平变化情况。结果治疗前,两组外周血NK细胞水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组外周血NK细胞水平均显著上升,同时观察组升高更明显,上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,两组内源性SS水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组内源性SS水平均显著上升,同时观察组升高更明显,上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组的ICU住院时间和总住院时间明显低于对照组,观察组28 d病死率为0.00%,显著低于对照组的8.33%,上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论重组人生长激素注射液联合乌司他丁在ICU重度胰腺炎患者中应用效果良好,可提高外周血NK细胞水平,降低内源性SS水平。

宫颈癌患者外周血T淋巴细胞NK细胞的检测及临床意义

目的探讨宫颈癌患者外周血T淋巴细胞NK细胞的检测及临床意义。方法 2008年1月至2010年月1月收治的宫颈癌患者140例,选取同期健康体检140例进行外周血T淋巴细胞NK细胞的检测。结果正常组与宫颈癌组各期对比P<0.05有显著差异性。结论宫颈癌患者免疫状态与TNM分期呈负相关,免疫功能越低下,提示病期越晚、预后越差,外周血T淋巴细胞NK细胞的检测可间接提示患者预后。

蒲苓盆炎康联合阿奇霉素治疗解脲支原体感染及其对外周血NK细胞活性的影响

目的分析蒲苓盆炎康联合阿奇霉素治疗解脲支原体感染患者的疗效以及其对外周血自然杀伤(NK)细胞活性的影响。方法选取2013年3月至2016年12月该院收治的125例解脲支原体感染患者,分为阿奇霉素组(n=41)、蒲苓盆炎康组(n=42)与联合组(n=42),阿奇霉素组服用单一阿奇霉素片治疗,蒲苓盆炎康组采用蒲苓盆炎康治疗,联合组采用阿奇霉素联合蒲苓盆炎康治疗。比较3组的治疗效果及复发情况,检测治疗后3组患者外周血NK细胞的活性并进行比较。结果阿奇霉素组治疗有效率达63.4%,复发率达87.2%,蒲苓盆炎康组治疗有效率达66.7%,复发率达84.4%,联合组治疗有效率与复发率分别为92.9%、18.5%;阿奇霉素组与蒲苓盆炎康组比较,差异无统计学意义(P>0.05),联合组与其他两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后3组外周血NK细胞活性比较,联合组明显高于其他两组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论口服蒲苓盆炎康联合阿奇霉素治疗解脲支原体阳性感染比单独治疗效果好,其治疗机制可能与提高外周血NK细胞活性有关。

HIV感染症状长期不进展者NK细胞变化研究

目的探讨HIV长期不进展者NK细胞的变化。方法应用流式细胞术对HIV长期不进展者、典型进展者和HIV抗体阴性正常对照外周血NK细胞、NKT细胞及NK细胞趋化因子受体等进行研究。结果长期不进展者NKT细胞绝对计数与正常对照差异无统计学意义(P=0.301),高于HIV感染者和艾滋病病人(P=0.01,P=0.002);长期不进展者NK细胞绝对计数低于正常对照(P=0.03),高于HIV感染者和艾滋病病人(P=0.005,P<0.0001);长期不进展者NK细胞与CD4+T淋巴细胞呈正相关(r=0.393,P=0.001);NKT细胞与CD8+T淋巴细胞呈正相关(r=0.372,P=0.002)。长期不进展者NK细胞表达的CCR5受体低于典型进展者和正常对照(P<0.01)。结论NK细胞的变化与HIV疾病进展相关,值得深入研究。

肾移植术后外周血自然杀伤细胞的CD158b表达及意义

目的探讨肾移植术后外周血自然杀伤细胞(NK细胞)的CD158b表达及意义。方法测定62例患者肾移植前、术后第1d、术后第7d、肾功能正常时以及疑有排斥反应时外周血NK细胞的CD158b表达水平。结果62例中,术后38例肾功能恢复正常,观察期内无排斥反应发生,移植前后外周血CD3-CD16/CD56+细胞(NK细胞)及CD3-CD16/CD56+CD158b+细胞稳定,NK细胞中CD158b+细胞的比例也稳定;24例术后7～14d发生急性排斥反应,其外周血CD3-CD16/CD56+细胞呈上升趋势,CD3-CD16/CD56+CD158b+细胞呈下降趋势,NK细胞中CD158b+细胞的比例也呈下降趋势,经单因素方差分析,各指标在不同测定时点的差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论干扰NK细胞表达CD158b的因素较少,在临床上做出排斥反应诊断前,患者外周血中NK细胞的CD158b表达即呈下降趋势,因此术后监测NK细胞的CD158b表达可为评价患者的免疫状况提供依据。