主动外排抑制剂对大肠杆菌耐药性逆转的研究

应用琼脂稀释法检测大肠杆菌质控株和耐药株在加入主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)后对环丙沙星、恩诺沙星、四环素的最低抑菌浓度(MIC)变化情况。结果发现,在加入CCCP后,大肠杆菌质控株对上述3种抗菌药物的MIC无变化,多数耐药株对四环素MIC变化不大,而CCCP可使耐药株分别对环丙沙星和恩诺沙星的MIC变化较大,其中耐药菌S17对这两种药物的MIC均减小8倍。本研究结果提示,主动外排抑制剂CCCP与抗生素联合应用可降低大肠杆菌对抗生素耐药的发生率。

多重耐药肺炎克雷伯杆菌模型构建及外排抑制剂对其药物敏感性影响的研究

目的研究耐多药肺炎克雷伯杆菌模型的体外构建及泵抑制剂对其药物敏感性的影响。方法收集，临床肺炎克雷伯杆菌，运用左旋氧氟沙星从低浓度至高浓度在体外诱导其成为对喹诺酮、头孢菌素、青霉素、氯霉素、四环素等多种抗生素的耐药株，并排除产ESBLS菌株。分别选用外排抑制剂（EPI）羰基氰氯苯腙（CCCP）及奥关拉唑在20μg／ml及40μg／ml两种不同浓度下与细菌共同培养后，运用琼脂稀释法测定细菌对左旋氧氟沙星敏感性的改变。同时运用纸片扩散法检测耐药株对多重抗生素的药物敏感性。结果起始运用亚抑菌浓度并逐步加大的梯度浓度法体外能成功构建多重耐药肺炎克雷伯杆菌模型，在CCCP耐药性逆转实验中，泵阳性株达53％，CCCP及奥关拉唑的抑制外排作用有统计学差异，尚不能认为外排抑制剂在高低两种浓度下对菌株的药物敏感性影响有统计学差异。运用外排抑制剂后菌株对多种抗生素的抑菌环直径有不同程度的增大。结论不规范长期低浓度应用喹诺酮类可以诱变出多重耐药菌株，外排机制在介导耐多药细菌形成中起着重要的作用，CCCP比奥美拉唑能更有效的抑制细菌主动外排，但是都不能完全逆转其耐药性。

嗜水气单胞菌RND外排泵中药抑制剂的筛选

随着抗生素的滥用,抗菌药物耐药性(Antimicrobial resistance,AMR)已经成为重大公共卫生问题。研究表明革兰氏阴性菌中普遍存在的RND (Resistance Nodulation Division)外排泵在细菌多重耐药机制中扮演了关键角色。RND外排泵抑制剂(efflux pump inhibitors, EPIs)可以将大大降低细菌的耐药性。化学药物类抑制剂虽然抑制效果好,但副作用大,限制了其在临床和水产养殖业上的应用。已证实多种植物及其成分有抑制细菌产生耐药性和消除耐药性等作用,因此中草药成为筛选外排泵抑制剂的巨大宝库。本研究选用了利血平、N-甲基吡咯烷酮、板蓝根、黄芪、连翘、黄连等中药作为抑制嗜水气单胞菌耐药性的候选药物,结果表明利血平的抑菌效果和抑制耐药性的效果最显著,黄连次之。联合药物作用实验结果显示,利血平和OXY在2.5 μg/mL和10 μg/mL的作用下抑菌效果显著。Western blotting结果显示,RND外排泵中的AcrA蛋白的表达量随着利血平浓度的上升而下降,推测说明利血平可能是通过抑制AcrA蛋白的表达来抑制外排泵的外排效率,从而降低嗜水气单胞菌的耐药性。本研究为中药抗生素联合制剂在临床和水产养殖上的应用提供分子基础,为解决细菌耐药性提供理论依据和参考。

ABC跨膜转运蛋白外排抑制剂促进药物肠吸收的研究进展

药物的肠吸收受肠道内的外排转运蛋白影响,其中ABC跨膜转运蛋白为目前已知的主要外排转运蛋白。近年开发的可直接抑制转运蛋白外排作用的外排抑制剂大多属于非离子表面活性剂和植物天然成分。本文综述这两类外排抑制剂的研究进展。

细菌耐药的外排机制及其抑制剂

细菌对药物产生耐药性的机制多种多样,主动外排(efflux)是重要和常见的耐药机制之一.主动外排过程是细菌不同种类的外排蛋白系统将药物从自身体内主动外泵排出的过程.主动外排耐药机制属于非特异性耐药机制,具有底物广、能量依赖、外排泵种类多和外排泵来源菌多的特点.外排泵广泛存在于革兰阳性菌、革兰阴性菌和分枝杆菌中,因此抑制耐药细菌的一条重要途径是寻找和发现外排泵抑制剂.外排泵抑制剂通过抑制外排泵对抗生素药物的外排作用,从而恢复细菌对抗生素的敏感性.外排泵抑制剂可根据所作用的外排泵能量来源不同分为ATP水解能驱动型外排泵抑制剂和跨膜质子梯度能驱动型外排泵抑制剂两大类;也可依据所抑制的外排泵蛋白种类不同分为NorA蛋白抑制剂,Mex外排泵抑制剂,Tet(B)外排泵抑制剂,以及AcrAB-TolC外排泵抑制剂等多种类型.各种类型的外排泵抑制剂将成为解决细菌耐药问题的有效方法之一.

4种药物外排泵抑制剂对异烟肼抗结核分枝杆菌最低抑菌浓度的影响研究

目的研究4种药物外排泵抑制剂对异烟肼抗结核分枝杆菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的影响。方法纳入37株单耐异烟肼和10株全敏的结核菌临床分离株以及H37Rv,应用微孔板Alamar blue显色法检测以上菌株分别加入维拉帕米(verapamil,VP)、氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)、硫利哒嗪(thioridazine,TZ)和羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone,CCCP)4种外排泵抑制剂前后异烟肼抗结核菌的MIC的变化情况,并用配对χ2检验比较不同抑制剂对异烟肼MIC的影响程度。结果 37株单耐异烟肼结核菌中,分别有64.86%(24/37)、48.65%(18/37)、43.24%(16/37)和37.84%(14/37)的菌株被VP、CPZ、TZ和CCCP降低异烟肼MIC,且均以降低2倍为主,VP致异烟肼MIC降低2倍及以上的菌株数均高于TZ和CCCP,P值均<0.05。6/10的全敏结核菌以及H37Rv的异烟肼MIC被VP降低2倍及以上。结论 4种药物外排泵抑制剂对异烟肼抗结核菌存在不同程度的影响,VP降低异烟肼MIC的作用较强。

鲍曼不动杆菌adeB基因检测及外排泵抑制剂逆转亚胺培南耐药性的研究

目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵adeB基因表达量与亚胺培南耐药性的关系,探讨外排泵抑制剂对亚胺培南敏感性的影响,为外排泵及外排泵抑制剂在鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性中的作用提供理论依据。方法筛选临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌79株,采用PCR法检测adeB基因表达情况,RT-PCR方法对adeB基因进行转录水平测定,并比较亚胺培南敏感及耐药组基因转录表达量有无差异;采用微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂PAβN、奥美拉唑前后adeB阳性及阴性组多重耐药菌对亚胺培南MIC值的变化。结果 79株多重耐药鲍曼不动杆菌中,adeB基因在亚胺培南敏感组及耐药组表达量存在差异。PAβN对adeB阳性组亚胺培南耐药性降低有统计学意义,对adeB阴性组无明显影响;奥美拉唑对adeB阳性组及阴性组亚胺培南耐药性降低均无统计学意义。结论鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性与adeB基因高表达有关。PAβN降低adeB阳性组多重耐药鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性,提高亚胺培南敏感性,对adeB阴性组无明显影响;奥美拉唑对亚胺培南耐药性无明显影响。

外排泵抑制剂对海水养殖源弧菌酰胺醇类药物耐药性的影响

通过检测从海水养殖中分离的对氟苯尼考低敏感弧菌菌株中常见酰胺醇耐药基因的携带情况,来分析外排泵抑制剂对弧菌酰胺醇耐药性的影响,旨在研究主动外排机制在我国海水养殖源弧菌耐药中的作用。本研究从前期分离的海水养殖源弧菌中挑选出41株对氟苯尼考低敏感的菌株,运用琼脂稀释法测定了这些菌株对酰胺醇类药物(氯霉素和氟苯尼考)的敏感性;利用PCR方法检测了这些菌株的酰胺醇外排泵耐药基因和整合子的携带情况,包括外排泵基因floR、cmlA、pexA、fexA、fexB和optrA,以及Int1、SXT和ISCR1整合子相关基因;同时研究4种外排泵抑制剂对弧菌氯霉素、氟苯尼考最小抑菌浓度(MIC)的影响,利用琼脂稀释法检测41株弧菌分别加入甲基吡咯烷酮(N-methyl-2-pyrrolidone,NMP)、利血平(reserpine)、羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone,CCCP)和苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(Phe-Arg-β-naphthylamide,PAβN)4种外排泵抑制剂前后对氯霉素和氟苯尼考的MIC值的变化情况。副溶血弧菌(14株)、溶藻弧菌(17株)、哈维氏弧菌(8株)、创伤弧菌(2株)共41株氟苯尼考低敏感弧菌敏感度检测结果显示,氟苯尼考耐药菌株39株、氯霉素耐药菌株11株。41株氟苯尼考低敏感弧菌菌株中,酰胺醇类外排泵基因floR检出率为100%,而cmlA的检出率仅为17.1%,其他4个外排泵基因均未检出;整合子相关基因Int1、SXT和ISCR1的检出率分别为46.3%(19/41)、46.3%(19/41)和63.4%(26/41)。41株弧菌中,添加NMP、利血平、CCCP和PAβN后,分别有0株、2株、10株和2株弧菌为氯霉素外排阳性菌;分别有1株、1株、15株和3株弧菌为氟苯尼考外排阳性菌。研究表明,CCCP被验证可以作为有效治疗酰胺醇类药物耐药弧菌的外排泵抑制剂。

4种外排泵抑制剂对鲍曼不动杆菌耐药性的抑制影响

目的检测4种外排泵抑制剂对5种抗菌药物耐药的影响,了解主动外排泵耐药机制在鲍曼不动杆菌菌株中的作用,为外排泵抑制剂的开发和鲍曼不动杆菌感染的治疗提供实验室数据。方法临床收集鲍曼不动杆菌116株,采用琼脂平皿二倍稀释法测定5种抗菌药物对实验菌株的最低抑菌浓度(MIC),同批测定加入外排泵抑制剂后抗菌药物的MIC值。结果庆大霉素加羰基氰氯苯腙(CCCP)后显示出外排阳性的菌株数量最多,有87株(75%);其他显示外排阳性菌株的数量分别为:利血平+氯霉素(46.6%),奥美拉唑+氯霉素(33.6%),维拉帕米+庆大霉素(17.2%)。外排泵抑制剂对头孢唑林的耐药性无影响。结论 4种所用外排泵抑制剂可不同程度逆转鲍曼不动杆菌的耐药,以CCCP筛选外排阳性菌效果最佳。当存在明显的酶水解耐药机制时,外排泵抑制剂对耐药性无影响。

外排泵抑制剂对幽门螺杆菌多重耐药性的影响

目的:探索多种外排泵抑制剂对H.pylori多重耐药性的影响.方法:临床分离培养H.pylori,对分离敏感株进行氯霉素耐药性诱导,筛选出多重耐药(MDR)株;琼脂二倍稀释法对敏感菌株和MDR株进行9种抗生素的药敏试验,分别加入外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)、利血平、泮托拉唑后再次进行药敏试验,比较分析外排泵抑制剂对H.pylori耐药性的影响;同样方法检测泮托拉唑、雷贝拉唑、奥美拉唑、兰索拉唑和埃索美拉唑对MDR-H.pylori株抗生素最小抑菌浓度(MICs)值的影响.结果:诱导出4株MDR-H.pylori;CCCP及泮托拉唑能够部分恢复MDR-H.pylori株对抗生素的敏感性,而利血平对MDR-H.pylori耐药性无明显影响;这三种外排泵抑制剂对敏感株的MICs值影响不大;5种质子泵抑制剂中,雷贝拉唑能使甲硝唑和阿莫西林的MIC值分别降低至1/4和1/3,泮托拉唑能使其均降低至1/2左右.结论:外排泵抑制剂能够在体外提高多重耐药H.pylori株的药物敏感性;在所有质子泵抑制剂中雷贝拉唑对降低MDR-H.pylori对抗生素的耐药性作用最强,其次为泮托拉唑.

鲍曼不动杆菌抗生素主动外排泵转运系统与外排泵抑制剂

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是医院内感染的重要病原菌,其耐药率呈现上升的趋势。该菌存在多种耐药机制,其中药物主动外排转运系统或外排泵介导的抗菌药物主动外排与多重耐药(multi-dmg resistance,MDR)密切相关,是近年来研究细菌多重耐药机制的重点。外排泵抑制剂(efflux pump inhibitors,EPIs)的研发有助于克服细菌主动外排机制导致的多重耐药性,为逆转细菌的多重耐药提供了一条新思路。本文就近年来鲍曼不动杆菌的药物主动外排转运系统与外排泵抑制剂的研究进展进行综述。

幽门螺杆菌多重耐药性与其外排泵抑制剂研究进展

随着抗生素的广泛大量的使用,细菌的耐药性及耐药水平越来越高,给临床抗菌治疗带来了困难,必须引起足够重视。幽门螺杆菌耐药率不断上升,而且已经出现同时对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林耐药的多重耐药株,近年发现的能引起多重药物耐受(multidrug resistance,MDR)的外排泵系统在临床耐药中扮演越来越重要的角色。因此,对幽门螺杆菌多重耐药机制及其外排泵抑制剂进行研究,以解决幽门螺杆菌日益增高的耐药性问题,具有重要的临床意义。

药物耐药性外排泵抑制剂的研究进展

外排泵抑制剂可以抑制耐药细菌和肿瘤细胞对进入胞体内药物的外排作用,提高对药物的敏感性。它在改善药物的药动学特性等方面也有广泛的作用。研制开发外排泵抑制剂,逆转现有药物的耐药性将是改善药物疗效的一种有效的治疗方法。简要阐述近年来外排泵抑制剂的研究进展。

结核分枝杆菌外排泵及其抑制剂的研究进展

结核病自古以来就威胁着人类的健康，每年导致约200万人死亡。特别是近年来，耐多药结核病、广泛耐药结核病以及结核分枝杆菌与人免疫缺陷病毒（HIV）共感染的出现，给结核病的临床治疗带来了新的困难。耐多药结核病是耐受2种抗结核病一线药物的结核病，广泛耐药结核病是在耐多药的基础上至少耐受3种二线药物的结核病。

外排泵抑制剂小肽1号对抗菌药抗菌活性的影响

为了观察外排泵抑制剂小肽1号对抗菌药抗菌活性的影响,本试验采用标准微量稀释法,测定了6类8种抗菌药单用和与小肽1号联用对12株临床分离鸡大肠杆菌的MIC值。结果表明,12株鸡大肠杆菌中有9株为产超广谱酶的多重耐药菌株,小肽1号(1∶2)使恩诺沙星等8种药物的抗菌活性多数增强2倍,使氟苯尼考对A8、A15的抗菌活性增强了4倍,小肽1号(1∶2或1∶4)使恩诺沙星、甲替沙星、环丙沙星的抗菌活性增强2倍,使左旋氧氟沙星对A13的抗菌活性增强4倍。以上结果表明,细菌外排泵抑制剂-小肽1号对大多数药物的抗菌活性有一定的增强作用,产酶多重耐药的鸡大肠杆菌至少同时存在产ESBLs、外排泵两种耐药机制。

细菌外排机制及其抑制剂研究进展

细菌耐药性,尤其是多重耐药问题日益严重,给临床治疗带来极大的困难。而细菌外排机制是细菌产生多重耐药的重要机制之一。本文对细菌外排泵系统的组成、种类和几种常见耐药病原菌(包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和金葡菌)中的主要外排泵,以及外排泵抑制剂的研究进展作简要综述。

多重耐药外排泵抑制剂作用机制研究

多重耐药外排泵广泛存在于各种病原菌中,对细菌的药物敏感性以及细菌性感染的临床治疗影响很大。对于细菌来说,外排基因占所有转运蛋白基因的6%～18%,所以外排基因编码的外排泵是导致其多重耐药的重要机制。最新研究结果表明[1-2],临床分离的多重耐药的大肠埃希菌,其耐药性往往与某些基因的超表达相关,

细菌外排泵功能及抑制机制的研究进展

近年来,由于抗生素在临床上的不规范使用,细菌耐药率呈快速增长趋势,显著增加临床的抗感染治疗难度。对于耐药菌而言,外排蛋白基因占所有转运蛋白基因的6%~18%。因此,由外排基因编码的外排泵是细菌产生多重耐药的重要机制之一。最新研究结果表明,外排泵抑制剂是通过抑制外排泵研发针对性抗生素的新治疗靶点,因此,为解决细菌多重耐药性问题,研发外排泵抑制剂势在必行。鉴于此,本研究对细菌外排泵的功能和抑制机制进行综述,以期为临床合理用药及医院感染防控提供帮助与指导。

10种单味中药对鲍曼不动杆菌的抗菌作用和对主动外排机制抑制作用的研究

目的:研究10种单味中药对临床分离的鲍曼不动杆菌的抗菌作用和对主动外排机制的抑制作用。方法:收集2011年1月至2011年12月宁波市第一医院患者临床标本中分离到的20株鲍曼不动杆菌,按照耐药性把20株菌分为多重耐药组和敏感组,每组10株。先检测10种单味中药对鲍曼不动杆菌的抑菌作用,再分别用外排抑制剂氰氯苯腙(终浓度15 mg/L)、利血平(终浓度20 mg/L)检测四环素和氯霉素外排泵表型,抗生素MIC值比空白对照下降4倍或以上时判为外排泵表型阳性。然后用终浓度2 000g/L的10种单味中药做外排抑制剂,检测四环素和氯霉素MIC值是否比空白对照下降4倍或以上。最后对数据进行统计分析。结果:10种单味中药对鲍曼不动杆菌都有不同程度的抑菌作用,黄岑和连翘的抑菌作用最强,金银花、三叶青、大青叶、黄连、野菊花的抑菌作用稍弱;焦栀子、蒲公英、紫花地丁的抑菌作用较弱。金银花、连翘、三叶青、焦栀子、大青叶、野菊花、蒲公英这7味中药对两组菌的抑菌作用有统计学差异(P<0.05):对敏感组菌的MIC_(50)和MIC_(90)都明显低于多重耐药组,而黄连、紫花地丁、黄岑对两组菌的抑菌作用无显著差异(P>0.05)。两组鲍曼不动杆菌对四环素和氯霉素的外排泵表型阳性率高,终浓度2 000 g/L的10种单味中药对氯霉素和四环素没有外排抑制作用。重新配制并提高本试验中10种单味中药水煎液浓度至终浓度为20 000 g/L,对氯霉素和四环素仍然没有外排抑制作用。结论:中药对鲍曼不动杆菌有抑菌作用,可作为抗生素的辅助用药。主动外排机制是鲍曼不动杆菌对四环素和氯霉素耐药的一种重要机制,但在20 000 g/L的浓度下,10种单味中药对氯霉素和四环素没有外排抑制作用。

秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型用于外排泵抑制剂逆转环丙沙星耐药的研究

目的建立秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型,用于外排泵抑制剂(EPIs)逆转泛耐药鲍曼不动杆菌(XDR-AB)对于环丙沙星耐药的研究。方法建立秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型,选用6种EPIs(CCCP、PAβN、NMP、奥美拉唑、利血平和维拉帕米)与氟喹诺酮类药物环丙沙星联合使用,记录秀丽隐杆线虫生存率以评价体内药效,同时进行毒性试验及体外药敏试验。结果不同浓度XDR-AB对秀丽隐杆线虫的致死情况不同,选择5×10^(6 )CFU/mL作为XDR-AB感染秀丽隐杆线虫浓度。秀丽隐杆线虫生存实验显示,XDR-AB感染线虫3 h后线虫组与加入多粘菌素B的对照组生存曲线比较,差异无统计学意义(χ~2=3.154,P>0.05),感染线虫6、9 h,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001),但感染6 h与9 h组的生存曲线比较,差异无统计学意义(χ~2=0.669,P>0.05),最终选择6 h作为感染时长,36 h为合适的抗菌药物治疗时长。环丙沙星联合EPIs应用于感染模型实验中,低浓度的PAβN、NMP、奥美拉唑、利血平可将线虫存活率分别提高30%~40%、15%~20%、20%~30%、20%,高浓度的维拉帕米可将感染线虫的存活率提高30%左右。体外药敏试验和毒性试验结果显示,环丙沙星分别与CCCP、奥美拉唑和维拉帕米联合可降低MIC至原来的1/4,分别联合PAβN,NMP和利血平可降低MIC至原来的1/2,其中CCCP体外联合抑菌效果最佳,但毒性较大不适于体内药效研究。结论首次成功构建了秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型,得到6种EPIs逆转环丙沙星耐药性的初步研究。