己糖对杜兴肌肉萎缩症核酸药物Pip5e-PMO跳读活性研究

目的:在杜兴肌肉萎缩症模型上探究己糖混合物对核酸药物Pip5e-PMO介导的外显子跳读活性的促进作用。方法:选择成年mdx小鼠为测试动物模型,通过局部肌肉和系统尾静脉注射,比较Pip5e-PMO与己糖和生理盐水联用的作用效果,利用免疫荧光(IHC)和蛋白印迹法(Western blot)检测dystrophin阳性肌纤维的数量和分布及dystrophin蛋白的表达水平;利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外显子跳读。结果:在局部肌肉给药试验中,己糖能够促进Pip5e-PMO诱导dystrophin蛋白表达水平(P<0.05)。在系统试验中,对己糖和生理盐水组比较发现:按15 mg/kg的剂量单次系统尾静脉注射Pip5e-PMO,骨骼肌中dystrophin蛋白表达恢复至正常水平的50%;在心脏中,也检测到明显的dystrophin恢复表达和外显子跳读。但两组无显著性差别(P>0.05)。结论: Pip5e-PMO可诱导有效的外显子跳读和dystrophin蛋白表达,但己糖对其促进效果有限。

2′-O-甲氧乙基反义寡核苷酸应用于杜兴肌肉萎缩症的体外研究

目的:通过对反义寡核苷酸2′-O-甲氧乙基(2′-O-MOE)化学结构的体外实验,为杜兴肌肉萎缩症基因治疗方法提供一种候选的反义寡核苷酸药物。方法:在杜兴肌肉萎缩症小鼠H2K mdx细胞上转染不同长度和骨架修饰的2′-O-MOE反义寡核苷酸,利用RT-PCR技术检测其诱导外显子跳读的情况。结果:3种2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸体外诱导外显子跳读的效率显著高于目前临床检测的药物2′OmePS,表现出一定的浓度效应和时间效应。并且MOE25(PS)诱导外显子跳读的效率最好。结论:2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸能够有效地诱导H2K mdx细胞外显子跳读。

B族维生素对肌肉萎缩小鼠PMO运输效率的影响

目的:探究B族维生素对反义寡核苷酸药物磷酸二胺吗啉代寡核苷酸(PMO)在DMD治疗中运输效率的影响以及药物安全性评价。方法:通过对成年的杜兴肌肉萎缩症(DMD)模型mdx小鼠胫骨前肌分别局部注射PMO和各种维生素的混合液,利用免疫荧光(IF)和Western印迹检测dystrophin蛋白表达情况,评估各维生素对PMO作用效果的影响;通过尾静脉注射PMO和维生素B12的混合液,相同方法检测维生素B12对PMO治疗效果的影响,同时利用苏木素-伊红组织染色(HE)技术检测组织病理情况,评估维生素B12联合PMO治疗的安全性。结果:在mdx小鼠局部给药实验中,比较不同的B族维生素对PMO药效影响时,发现维生素B12对PMO的促进效果最佳(t=8.015,P<0.01);随后选择维生素B12与PMO混合对mdx小鼠进行系统治疗时,相比于PMO生理盐水组,发现维生素B12能够在胫骨前肌(t=9.631,P<0.01)和股四头肌(t=8.452,P<0.01)上明显提高PMO的系统治疗效果,同时对mdx小鼠不产生肌肉不良反应。结论:维生素B12作为营养补充剂能够显著提高PMO在mdx小鼠上的局部治疗效果,但系统治疗效果有限,且对小鼠肌肉组织无损伤。

治疗Duchenne型肌营养不良新药eteplirsen

Eteplirsen是一种靶向51号外显子的磷酰吗啉寡核苷酸,通过诱导dystrophin基因51号外显子跳读,使其mRNA阅读框不被破坏,从而促进DMD患者dystrophin蛋白的生成,使致死型DMD转变为临床表型较轻的BMD。动物试验及临床研究显示,Eteplirsen具有良好的安全性和耐受性。2016年9月,美国FDA批准其上市。本文将对其药理作用、药动学、临床研究、安全性等进行综述。