海水养殖真鲷弧菌病病原菌外毒素的分离、纯化及生物学活性

1996年 6月初 ,对福建省平潭县真鲷网箱养殖场发生的弧菌病进行研究 ,并确定该病病原菌为最小弧菌 (Vibrio mimicus)。采用硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析及 Sephadex-G1 0 0层析等方法对最小弧菌产生的外毒素进行研究。结果表明 ,该外毒素为单一的多肽 ,分子量为 3 0 .45 6 k D,对真鲷的 L D50 为 4.48μg,对真鲷等养殖动物的溶血性最强 ,对 Vero细胞的 CD50 值为 0 .48μg,肠毒性弱阳性。该外毒素与最小弧菌产生的其他毒力因子相比 ,性质独特 ,是一类新的毒力因子 ,建议命名为 Vm-

海水养殖真鲷最小弧菌外毒素的免疫学特性初步研究

按常规方法免疫健康家兔进行外毒素抗体的制备。将制备的兔抗血清与等体积的外毒素混合,37℃下作用1h后,观察毒素的溶血性及细胞毒性,取免疫前家兔血清(零号血清)作阴性对照,用毒素作阳性对照。结果表明,兔抗毒素血清能中和毒素,抑制毒素对人血细胞的溶血性及对Vero细胞的细胞毒性,中和毒素的兔抗毒素血清最高稀释度为1∶256,毒素对照显示出溶血性及细胞毒性。毒素与一定浓度的嗜水气单胞菌HEC毒素抗血清、霍乱肠毒素抗血清在37℃下分别作用1 h后,观察其溶血性及细胞毒性。结果表明,这2种抗血清都不能中和毒素,毒素与这2种抗血清作用后,仍然保持其溶血性及细胞毒性。用浓度为0.2%的福尔马林对浓度为5mg/mL的外毒素进行灭活处理,得到的灭活疫苗为毒素苗。一定稀释度的毒素苗,在初次免疫真鲷2周后利用病原菌对免疫组及对照组的实验鱼进行人工攻毒感染,毒素苗的免疫保护率可达80%,强化免疫后,免疫保护率有所提高。注射免疫的免疫保护率比浸泡免疫的高。