健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞外泌体诱导胃癌细胞失巢凋亡的机制研究

目的 探讨健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)外泌体对胃癌失巢凋亡的影响及其机制。方法 体外诱导人单核细胞THP-1建立TAM模型;超速离心法提取M0、TAM及TAM+健脾养正方外泌体,与胃癌细胞共孵育。流式细胞术检测各组外泌体对胃癌细胞失巢凋亡的影响。构建BALB/c移植瘤小鼠模型,Western blot检测移植瘤中凋亡蛋白的表达水平。Label-free质谱蛋白组学及生物信息学分析干预前后胃癌细胞中的差异蛋白;Western blot及qPCR实验检测差异蛋白异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)表达水平,泛素化实验检测IDH1的泛素化水平;试剂盒检测α-酮戊二酸(α-KG)、NADPH/NADP^(+)、谷胱甘肽(GSH/GSSG)水平及活性氧(ROS)含量。结果 TAM外泌体干预胃癌细胞后其失巢凋亡率降低(P<0.05,P<0.01);而TAM+健脾养正外泌体干预后则显著升高(P<0.05,P<0.01)。小鼠体内实验中,TAM外泌体组瘤体内Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值降低(P<0.05),而TAM+健脾养正方外泌体干预后比值明显增高(P<0.05)。蛋白组学分析显示IDH1在干预前后差异明显,且与三羧酸循环代谢相关。相较于M0组,TAM组外泌体干预的胃癌细胞IDH1泛素化水平升高,α-KG、NADPH/NADP^(+)及GSH/GSSG水平明显增加,ROS含量降低(P<0.05),而TAM+健脾养正外泌体则可逆转上述现象。结论 健脾养正方通过调控TAM外泌体使胃癌细胞IDH1发生泛素降解,降低胃癌细胞三羧酸循环代谢水平,促进ROS积累,诱发胃癌失巢凋亡,进而抑制胃癌发展。

肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控KRAS信号通路影响胰腺癌细胞糖酵解功能

目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体对胰腺癌细胞糖酵解的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化为M0型和M2型巨噬细胞,并提取二者分泌的外泌体(M0 exo和M2 exo)。将胰腺癌细胞CAPAN-2和ASPC-1分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组、M2 exo+siKRAS组,分别与等体积PBS、10μg/mL M0 exo、10μg/mL M2 exo、转染KRAS siRNA+10μg/mL M2 exo共孵育。透射电镜观察外泌体结构;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成水平;Western blot检测外泌体标志物、KRAS蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果 THP-1诱导分化为表达标志蛋白Arg-1和IL-10的M2型巨噬细胞,M0 exo和M2 exo具有双层膜结构,粒径100 nm左右,表达外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101。与PBS组比较,M2 exo组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率力、乳酸生成水平显著增加(P<0.05),KRAS表达以及ERK1/2磷酸化水平显著增加(P<0.001)。与M2 exo组比较,M2 exo+siKRAS组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率以及乳酸生成水平均显著下降(P<0.05)。结论 肿瘤相关巨噬细胞外泌体可通过激活KRAS信号通路促进胰腺癌细胞糖酵解。

胸腺瘤相关重症肌无力患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对Treg细胞功能的影响

目的:探讨胸腺瘤相关重症肌无力(TAMG)患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对调节T细胞(Treg)叉状头转录因子P3(FOXP3)表达及分泌转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-10功能的影响。方法:收集TAMG患者及先天性心脏病无胸腺疾病的患者(对照组)胸腺组织,分离培养胸腺上皮细胞,使用广谱角蛋白(p-CK)和波形蛋白(Vimentin)染色行免疫荧光鉴定;膜亲和柱法提取胸腺上皮细胞外泌体并行透射电子显微镜(TEM)、粒径分析(NTA)及western blotting检测鉴定;磁珠分选法分离胸腺上皮细胞中Treg细胞,流式细胞术检测纯度;Treg细胞与外泌体共培养,行外泌体染色示踪实验,检测FOXP3表达及培养上清液TGF-β1、IL-10水平。结果:分离细胞呈长梭形,生长良好,免疫荧光p-CK呈阳性,Vimentin呈阴性,细胞为胸腺上皮细胞。TEM、NTA、western blotting结果提示提取物为外泌体。流式细胞术检测Treg细胞纯度>90%,纯度较好。外泌体染色示踪结果提示Treg细胞可吞噬胸腺上皮细胞外泌体,与TAMG组胸腺上皮细胞外泌体共培养后Treg细胞FOXP3表达减少(P<0.01),TGF-β1、IL-10分泌减少(P<0.01)。结论:Treg细胞可吞噬TAMG瘤旁胸腺上皮细胞外泌体,导致FOXP3表达减少、分泌TGF-β1、IL-10减少,免疫抑制功能减弱,其可能参与TAMG的发病过程。

外泌体MicroRNA在抗病毒免疫中的功能分析

外泌体是一种细胞外囊泡,内含有多种蛋白质和细胞调节因子,参与细胞间的信息传递并调控细胞的生长和生理过程。由于外泌体的功能差异性与分泌其细胞的类型和状态密切相关,因此在细胞水平的免疫研究中,外泌体可在一定程度上反映细胞的基因表达水平。病毒个体微小、结构简单,在感染宿主细胞,完成自身复制以及逃逸宿主免疫等过程中涉及到复杂的免疫调控网络,其中外泌体作为信息交流的新兴关注点,在这一免疫调控网络中的“使者”作用值得关注。MicroRNA在细胞间信息交流中也具有重要的调控作用,作为外泌体装载的货物,被选择性的分选到外泌体后,外泌体microRNA能够更加稳定的靶向调节生物功能,参与调控病毒免疫。本文介绍了外泌体的组成、发生机制以及内容物的成分,并以其中研究范围较广,研究内容较多的外泌体miRNA为出发点,重点阐述其在病毒免疫中的双重作用,通过了解外泌体miRNA在同种病毒或不同病毒中的调控作用,对进一步解析病毒入侵宿主的机理具有重要意义。

肿瘤相关成纤维细胞外泌体对乏氧条件下肺腺癌细胞自噬的影响及其机制研究

目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞外泌体对乏氧条件下肺腺癌A549细胞自噬的影响及其机制。方法 选取手术的肺癌标本及癌旁组织标本,进行肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)和成纤维细胞(NFs)的原代分离和鉴定;收集CAFs和NFs细胞培养上清,利用差速离心法从细胞培养上清液中分离出外泌体(exo),并通过电子显微镜和Western Blot对分离出的外泌体进行鉴定;采用CoCL_(2)体外构建乏氧微环境,将A549细胞复苏并传代后,把外泌体与A549细胞共培养,共分为4组:常氧A549组、乏氧A549组、乏氧A549+CAFs-exo组、乏氧A549+NFs-exo组;利用Western印迹法检测不同细胞组中LC3Ⅱ、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达变化,并通过Western Blot确定各组中AMPK、p-AMPK、mTOR和p-mTOR的表达水平;采用CCK8法、划痕实验、Transwell法,研究外泌体在不同环境中与细胞共同培养后对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 Western Blot显示CAFs中FSP-1、FAP、a-SMA蛋白高表达,透射电镜观察到提取的外泌体具备典型的结构特征。与常氧A549组相比,乏氧A549各组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.001),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,p-AMPK/AMPK比值上升,p-mTOR/mTOR比值下降(P<0.001);与乏氧A549组相比,乏氧A549+NFs-exo组细胞增殖、迁移、侵袭能力无明显变化,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值均无明显变化;与乏氧A549组相比,乏氧A549+CAFs-exo组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显强于乏氧A549组且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,p-AMPK/AMPK比值上升,p-mTOR/mTOR比值下降。结论 在乏氧微环境下,肿瘤相关成纤维细胞外泌体基于AMPK/mTOR信号通路,增强A549细胞自噬,可能是A549细胞抵抗乏氧环境、维持细胞增殖的机制之一。

肿瘤相关巨噬细胞来源的外泌体在消化系统肿瘤中的作用机制及治疗进展

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境中的重要细胞群,分泌多种细胞因子促进肿瘤进展。肿瘤相关巨噬细胞通过向肿瘤细胞递送包含蛋白质、脂质和多种类型核糖核酸的外泌体促进肿瘤增殖、侵袭、转移、血管生成,并增强肿瘤细胞的耐药性。本研究综述肿瘤相关巨噬细胞分泌的外泌体对消化系统肿瘤的调节作用及其分子机制,并从外泌体角度介绍防治消化系统肿瘤的策略,为临床药物的开发提供新思路。

外泌体miRNA-126对缺血性脑卒中合并代谢相关脂肪性肝病患者的相关性研究

脑卒中(cerebral stroke)又称为“中风”、“脑血管意外”,是全球第二大死亡原因及第三大致残原因。根据临床表现和病因分为:缺血性卒中和出血性卒中,前者约占全球所有卒中的71%。代谢相关脂肪性肝病(metabolic related fatty liver disease, MAFLD)曾用名为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD),已经取代病毒性肝炎,成为我国慢性肝病的第一大病因。MAFLD作为多系统代谢功能紊乱疾病,可通过代谢相关的多种机制增加2型糖尿病(T2DM)、缺血性脑卒中和心血管疾病的风险。近年来的研究以外泌体的物质构成、运输、细胞间通讯多个功能为出发点,为临床疾病诊断及预后、治疗靶点提供了新手段。外泌体天然存在于各类型体液中,也可被所有类型细胞分泌,目前对外泌体的探究趋势已经从集中于肿瘤源性转变至对自身免疫性疾病、代谢疾病和缺血性疾病等非肿瘤性疾病的研究。外泌体的高度特异性和敏感性,使其可以作为一种疾病早期非侵入性新型诊断指标,本文就外泌体miRNA-126与缺血性脑卒中合并MAFLD患者的相关性作一综述。

前列腺癌“劫持”肿瘤相关成纤维细胞通过外泌体MALAT1调控糖代谢重编程的机制研究

目的:阐明外泌体转移性肺腺癌相关转录因子1(MALAT1)介导的前列腺癌(PCa)细胞与癌相关成纤维细胞(CAFs)间相互作用,探究CAFs来源的外泌体MALAT1在PCa糖代谢重编程中的作用及其机制。方法:分析肿瘤基因组图谱(TCGA)资料,探讨MALAT1在多种肿瘤中的表达模式,尤其是其与PCa的临床关联性。运用单细胞RNA测序(scRNA-seq)及相关技术,研究MALAT1在介导PCa细胞与CAFs之间相互作用的机制。过表达CAFs细胞中的MALAT1,提取上清外泌体,并与PCa细胞共培养,通过RNA纯化的染色质分离—质谱(ChIRP-MS)等方法,研究外泌体MALAT1在PCa进展中的功能及作用机制。结果:利用TCGA数据集进行分析,观察到MALAT1与前列腺腺癌、乳腺浸润癌、胆管癌等多种肿瘤恶性程度相关,且与PCa不良预后相关。scRNA-seq分析显示,PCa肿瘤微环境细胞中的CAFs不仅存在PCa分子标记物KLK3,而且MALAT1在CAFs中的表达显著高于PCa细胞,提示PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs中MALAT1促进PCa进展。进一步地,共培养和ChIRP-MS实验发现外泌体MALAT1通过与PCa糖代谢关键酶的直接结合调控PCa的能量代谢。ChIRP-MS和RNAseq联合分析发现外泌体MALAT1能够与4个糖酵解关键基因(GPI、ALDOC、PGK1、ALDOA)直接结合,从而调控PCa细胞的糖代谢重编程。结论:PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs释放外泌体MALAT1直接作用于PCa糖酵解关键分子,从而调控糖代谢重编程加速PCa发展。

唾液腺腺样囊性癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞外泌体差异表达miRNAs的筛选及验证

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)外泌体miRNAs表达特征,分析其在SACC进展中的作用。方法:将SACC细胞与巨噬细胞共培养,获得SACC相关TAMs。应用超速离心法分别提取以上细胞外泌体,采用透射电镜、Western免疫印迹、外泌体纳米微粒追踪检测进行验证。对TAMs外泌体与对照组巨噬细胞外泌体进行RNA-seq测序,分析差异表达的miRNAs。利用miRanda和RNAhybrid软件对差异miRNAs进行靶基因预测,再对差异miRNAs作用的靶基因的集合分别进行GO和KEGG富集分析。利用qRT-PCR、CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验验证TAMs外泌体miRNAs表达及功能。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:筛选出1595个差异表达的miRNAs,其中15个miRNAs表达差异变化具有统计学意义(P<0.05)。差异miRNAs作用靶基因富集分析发现,TAMs外泌体miRNAs靶基因参与调控癌症相关信号通路。qRT-PCR结果显示,TAMs外泌体has-miR-21-5p表达上调最显著。CCK-8、细胞划痕实验和Transwell实验发现,TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞增殖、迁移与侵袭能力。结论:TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞恶性进展。TAMs外泌体miRNAs可能在SACC进展中发挥重要作用,有望为SACC的诊治提供新的策略。

circRNA SIPA1L1修饰牙髓干细胞来源外泌体促血管生成能力的机制

目的 探究环状RNA(circRNA)信号诱导增殖相关蛋白1样蛋白1(SIPA1L1)修饰的人牙髓干细胞(hDPSC)来源外泌体(Exo)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成能力的影响及机制。方法 从牙髓组织分离培养hDPSC,将circSIPA1L1过表达质粒载体转染至hDPSC后,分离Exo并进行鉴定。将HUVEC分为对照组、hDPSC Exo组、circSIPA1L1-hDPSC Exo组,培养48 h后,Matrigel基质胶血管形成实验检测血管形成能力,qRT-PCR和Western blot测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、胎盘生长因子(PGF)的表达水平。结果 从未转染的hDPSC与转染circSIPA1L1的hDPSC中成功分离出Exo,且相较于h DPSC来源的Exo,转染circSIPA1L1的hDPSC来源的Exo中circSIPA1L1相对表达量显著上调(P <0.05)。与hDPSC Exo组比较,circSIPA1L1-hDPSC Exo组HUVEC的管样结构形成数目显著增加(P <0.05),VEGF、VEGFR2、PGF mRNA与蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05)。结论 circRNA SIPA1L1修饰hDPSC来源的Exo能够促进血管生成,其机制可能与上调VEGF、VEGFR2、PGF的表达水平有关。

骨源性外泌体microRNAs与骨质疏松症相关研究进展

骨质疏松症作为老年疾病中的一种代谢性疾病,对它的研究一直被认为是重点和难点,因此如何延缓骨质疏松症的进展成为最主要的问题。骨源性外泌体microRNAs作为骨科疾病的关键调节因子,其表达的变化对延缓骨质疏松症的进展具有调节作用。microRNAs通过调节相关因子的表达可延缓骨质疏松症的发生及进展。该文就骨源性外泌体microRNAs与骨质疏松症的相关性进行综述,以期为骨源性外泌体microRNAs在治疗骨质疏松症方面提供一些新的治疗思路。

血清外泌体SUMO1P3和MALAT1对三阴性乳腺癌患者术后复发转移的预测价值

目的探讨血清外泌体小泛素样修饰子1伪基因3(SUMO1P3)和肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对三阴性乳腺癌(TNBC)患者术后复发转移的预测价值。方法选取2016年至2020年行手术切除的224例TNBC患者作为研究对象,根据随访期内复发及转移情况分为非复发转移组和复发转移组,收集两组患者的临床病历资料。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测术前血清外泌体SUMO1P3和MALAT1表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价SUMO1P3和MALAT1对TNBC术后复发转移的预测价值。采用多因素Logistic回归模型分析影响TNBC术后复发转移的因素。结果共72例患者出现复发或转移。224例TNBC患者SUMO1P3和MALAT1相对表达量分别为3.06±0.68和2.75±0.66,其中复发转移组SUMO1P3和MALAT1相对表达量为3.44±0.67和3.46±0.80,均显著高于非复发转移组的2.88±0.61和2.33±0.48(P<0.001)。ROC曲线结果显示,血清外泌体SUMO1P3和MALAT1联合检测的曲线下面积(AUC)=0.842(95%CI:0.787~0.887),特异度为0.790,灵敏度为0.806,且两指标联合预测的效能优于SUMO1P3和MALAT1单独预测(P<0.05)。多因素Logistic回归模型结果显示,SUMO1P3(OR=4.463,95%CI:2.125~9.372)和MALAT1(OR=9.103,95%CI:4.462~18.573)表达是影响TNBC术后复发转移的独立因素(P<0.05)。结论血清外泌体SUMO1P3和MALAT1与TNBC患者预后密切相关,两指标联合检测对TNBC术后复发或转移具有较高的预测价值。

miR-192-5p及TAMs源性外泌体对人子宫内膜癌细胞裸小鼠成瘤性的影响

目的探究miR-192-5p及肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM s)源性外泌体对人子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞增殖及成瘤性的影响。方法采用TAMs、阴性模拟物NC转染的TAMs以及miR-192-5p转染的TAMs源性外泌体刺激子宫内膜癌细胞,并分别注入裸小鼠体内,进行肿瘤细胞移植瘤实验。然后测量各组移植瘤的体积,分别采用RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织内miR-192-5p、相关激酶(IRAK1)和下游核因子-κB(NF-κB)表达情况,评估上调miR-192-5p的表达水平对EC细胞增殖及IRAK1和NF-κB表达水平的影响。结果TAMs源性外泌体促进肿瘤生长,miR-192-5p过表达可明显缩小肿瘤体积;miR-192-5p过表达抑制了肿瘤组织中IRAK1和NF-κB的表达。结论上调TAMs中的miR-192-5p的表达水平可能通过IRA K1和NF-κB信号通路抑制EC细胞的增殖及成瘤性。

脂肪间充质干细胞外泌体调控心脏成纤维细胞自噬和NLRP3炎症小体平衡抑制心肌梗死后不良心室重塑

[目的]探讨脂肪间充质干细胞(ADMSC)外泌体(Exo)对心肌梗死(MI)后不良心室重塑的抑制作用和机制。[方法]观察心脏成纤维细胞经过氧化氢(H_(2)O_(2))处理后自噬和炎症表型的改变。MI大鼠经尾静脉注射等体积的生理盐水、ADMSC外泌体(MSC-Exo)、成纤维细胞外泌体(MEF-Exo),观察心脏成纤维细胞自噬相关16样蛋白1(ATG16L1)、自噬相关蛋白7(ATG7)和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达,炎症反应,心肌纤维化程度以及心功能。[结果]心脏成纤维细胞经H_(2)O_(2)处理后,自噬相关蛋白ATG16L1和ATG7表达显著降低(P<0.001),NLRP3表达显著升高(P<0.001),促炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平显著增加(P<0.001)。MI大鼠经MSC-Exo干预后,自噬相关蛋白ATG16L1和ATG7表达显著上调(P<0.001),NLRP3表达显著下调(P<0.001),血清IL-1β和IL-18水平显著降低(P<0.001),纤维化相关蛋白胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ显著减少(P<0.001),心肌纤维化程度显著减轻(P<0.001),心功能明显改善(P<0.001)。[结论]脂肪MSC-Exo通过调控心脏成纤维细胞自噬和NLRP3炎症小体的平衡,发挥抑制MI后不良心室重塑的作用。

外泌体相关作用因子在结直肠癌诊治中的研究进展

结直肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,且近年来呈现上升和年轻态趋势。针对结直肠癌的治疗,除传统的手术、放疗、化疗等手段外,免疫治疗和靶向治疗已成为当前临床的研究热点,其中肿瘤源性外泌体在结直肠癌诊治过程中的优势逐渐凸显,参与了肿瘤的发生发展、侵袭和转移过程,可作为结直肠癌的诊断标志物、细胞间信息媒介和药物载体,在结直肠癌的免疫治疗和靶向治疗中发挥重要作用。但外泌体(exosome,Exo)在临床应用中还面临着诸多挑战和问题。本文将对Exo在结直肠癌诊治过程中相关因子的作用,包括作为生物标志物、载体功能、介导耐药、免疫调节、促血管生成等功能进行系统性综述,使其更好应用于结直肠癌的早期诊断、治疗和预后监测等,也为其他肿瘤的诊治提供借鉴。

癌相关成纤维细胞外泌体通过抑制铁死亡促进前列癌恶性侵袭

目的研究癌相关成纤维细胞(CAFs)外泌体通过抑制铁死亡对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法原代培养源于人前列腺癌基质CAFs及癌旁基质NFs(正常成纤维细胞),超速离心法提取CAFs外泌体(CAFs-exo)和NFs外泌体(NFs-exo),并通过透射电镜和Western blot进行鉴定。将外泌体分别和前列腺癌22rv1细胞和PC-3细胞共培养,观察细胞增殖、迁移和侵袭能力变化,检测细胞活性氧(ROS)水平、铁死亡及其相关蛋白表达。结果CAFs高表达α-SMA、FAP和FSP-1。与NFs-exo相比,CAFs-exo可促进22rv1细胞和PC-3细胞增殖及迁移、侵袭(P<0.05),并抑制脂质ROS累积和细胞死亡,铁死亡相关蛋白呈现GPX4表达增高和NRF2、ACSL4水平下调,迁移相关蛋白N-cadherin水平增高而E-cadherin表达下调。结论CAFs外泌体可以通过抑制铁死亡促进前列腺癌细胞增殖和侵袭。

老年脓毒症相关性脑病患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT表达及对临床预后评价

目的分析老年脓毒症相关性脑病(SAE)患者血清外泌体长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(LncNEAT1)、长链非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(LncSOX2OT)的表达及对临床预后意义。方法选择2020年2月—2022年2月就诊于成都中医药大学附属第五人民医院重症医学科的老年SAE患者96例为SAE组,根据28 d内生存状态再分为生存亚组(n=50)和死亡亚组(n=46),以同期诊治的无SAE的脓毒症患者60例为非SAE组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清外泌体中LncNEAT1、LncSOX2OT的表达水平。多因素Logistic回归分析老年SAE患者预后的影响因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT对老年SAE患者预后的诊断价值。结果SAE组血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT的相对表达高于非SAE组(t/P=16.726/<0.001、21.803/<0.001)。死亡亚组SAE患者C反应蛋白、降钙素原、神经元特异性烯醇化酶、APACHEⅡ评分、SOFA评分、LncNEAT1、LncSOX2OT均高于生存亚组(t/P=14.197/<0.001,4.535/<0.001,19.253/<0.001,8.442/<0.001,5.670/<0.001,9.861/<0.001,6.931/<0.001)。SAE患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT与APACHEⅡ评分、SOFA评分呈正相关(r/P=0.812/<0.001,0.761/<0.001,0.833/<0.001,0.598/<0.001)。降钙素原高、C反应蛋白高、神经元特异性烯醇化酶高、APACHEⅡ评分高、SOFA评分高、LncNEAT1高及LncSOX2OT高是影响SAE患者28 d生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.459(1.195~1.782)、1.464(1.164~1.841)、1.334(1.086~1.639)、1.644(1.223~2.210)、1.779(1.295~2.444)、1.347(1.050~1.728)、1.578(1.122~2.219)]。血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT二者联合预测SAE患者28 d生存预后诊断的AUC为0.914,高于单项指标的0.846、0.834(Z/P=3.864/<0.001、3.915/<0.001)。结论老年SAE患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT表达升高,是影响老年SAE患者预后的独立危险因素,并对老年SAE患者生存预后具有较高的评估价值。

不同碘水平下甲状腺结节患者血清外泌体中miRNA生物学标志物的筛选

目的比较不同碘水平下甲状腺结节患者与健康人血清外泌体微小核糖核酸(microRNA,miRNA)表达谱的差异,分析其共同点,为筛选不同碘水平下甲状腺结节早期诊断标志物提供参考依据。方法收集10例不同碘水平下甲状腺结节患者及体检健康者的外周血样本,采用砷铈催化分光光度法测定各组血清碘水平;提取外泌体miRNA,利用高通量测序技术测定血清miRNA的表达水平;预测差异靶基因,并进一步进行GO(Gene ontology)分析和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析。结果在不同碘水平的甲状腺结节患者与健康人群中存在6个表达下调的miRNA,分别为miR-324-5p、miR-6511b-3p、miR-9903、miR-550a-3p、miR-5001-3p、miR-3688-3p。差异表达的外泌体miRNA可调控MAPK信号通路、PI3K-AKT信号通路、VEGF信号通路及NF-κB信号通路。结论筛选出6个差异表达miRNA,有望作为不同碘水平下甲状腺结节早期诊断的生物学标志物。

星形胶质细胞来源外泌体对氧糖剥夺再复氧后PC12细胞线粒体功能损伤的保护作用

外泌体可以改善由缺氧缺血引起的神经细胞损伤,但星形胶质细胞来源的外泌体(astrocyte-derived exosomes,As-exo)与线粒体功能、线粒体相关内质网膜(mitochondrial associated ER membrane,MAM)的功能及线粒体自噬是否相关目前尚未明确。本研究旨在探究星形胶质细胞来源外泌体对氧糖剥夺再复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后PC12细胞线粒体功能、MAM以及线粒体自噬的调控作用。超速离心法提取星形胶质细胞培养基上清中的外泌体并对其进行鉴定。利用活细胞工作站观察到荧光标记后的外泌体在24 h时即在PC12细胞内出现明显的富集现象,同时在激光共聚焦扫描显微镜下观察到外泌体与线粒体出现共定位现象;采用Seahorse细胞能量代谢分仪检测线粒体压力变化:与Control组相比,OGD/R组的基础呼吸、质子漏、最大呼吸和ATP相关呼吸都有明显降低(P<0.05或P<0.01),OGD/R+exo组与OGD/R组相比4项指标都升高且差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);线粒体和内质网共定位结果表明,MAM受到氧糖剥夺再复氧伤害时,结构出现距离减小的聚合现象,而As-exo处理后MAM聚合现象减弱;流式结果表明,As-exo,一定程度恢复由氧糖剥夺损伤带来的线粒体膜电位降低和ROS升高;Western印迹结果显示,As-exo能显著抑制由OGD/R引起的线粒体自噬相关蛋白张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PTEN induced kinase 1,PINK1)和Parkin蛋白(parkin RBR E3 ubiquitin protein ligase,Parkin)升高,加入As-exo可降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量,升高P62蛋白的表达水平,降低OGD/R引起的线粒体自噬水平。由此可见,OGD/R处理能引起PC12细胞的线粒体功能紊乱、MAM结构改变及线粒体自噬增加,As-exo处理后能改善细胞的线粒体功能、减弱MAM的形成和降低线粒体自噬,从而具有预防缺血性脑卒中再灌注损伤的治疗潜力。

湖羊围着床期血浆外泌体miRNA差异分析

本研究从围胚胎着床期的湖羊血浆中提取外泌体并进行miRNA测序,发现在着床前、着床期、着床后的湖羊血浆外泌体中存在显著差异表达的miRNA。着床期与着床前有36个差异表达miRNA,其中17个上调,19个下调;着床后与着床期有23个差异表达miRNA,其中7个上调,16个下调。通过BLAST软件比对GO、KEGG等数据库信息,对差异表达的miRNA靶基因进行注释,分析差异表达miRNA靶基因及其相关生物过程,发现富集的生物过程与胚胎着床的过程相关。其中miR-451的表达量较高且在胚胎着床期、着床后与着床前相比差异显著,可能在胚胎着床过程中发挥作用。通过荧光定量PCR检测证明miR-451表达量变化趋势与测序结果一致。本研究提示血浆外泌体miRNA可能参与了湖羊胚胎着床过程的调控。本研究为绵羊胚胎着床调控过程提供了新见解,可能有助于设计绵羊妊娠识别手段,并提高绵羊繁殖效率。