探究外泌体hsa-miR-377在糖尿病肾病中的表达及其相关临床意义

目的本研究旨在探究糖尿病肾病患者和健康体检者血液样本中外泌体hsa-miR-377的表达量,以表明其参与糖尿病肾病的致病过程中。方法本研究通过收集临床糖尿病肾病患者和健康体检者的血液样本进行外泌体分离鉴定,通过透射电子显微镜对血液样本获得的离心小球进行分析,再进行RT-PCR分析外泌体中小RNA分子的表达。结果TEM发现糖尿病肾病的血液样本中存在外泌体,且外泌体形态在镜下很明显,RT-PCR对外泌体中小RNA分子的表达结果显示外泌体中hsa-miR-377的表达量(0.65±0.05)普遍高于正常体检者血液样品(0.29±0.05)(P<0.01)。结论外泌体hsa-miR-377可能参与糖尿病肾病的致病过程,且可能是糖尿病肾病的一个潜在诊断标志物。

唾液腺腺样囊性癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞外泌体差异表达miRNAs的筛选及验证

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)外泌体miRNAs表达特征,分析其在SACC进展中的作用。方法:将SACC细胞与巨噬细胞共培养,获得SACC相关TAMs。应用超速离心法分别提取以上细胞外泌体,采用透射电镜、Western免疫印迹、外泌体纳米微粒追踪检测进行验证。对TAMs外泌体与对照组巨噬细胞外泌体进行RNA-seq测序,分析差异表达的miRNAs。利用miRanda和RNAhybrid软件对差异miRNAs进行靶基因预测,再对差异miRNAs作用的靶基因的集合分别进行GO和KEGG富集分析。利用qRT-PCR、CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验验证TAMs外泌体miRNAs表达及功能。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:筛选出1595个差异表达的miRNAs,其中15个miRNAs表达差异变化具有统计学意义(P<0.05)。差异miRNAs作用靶基因富集分析发现,TAMs外泌体miRNAs靶基因参与调控癌症相关信号通路。qRT-PCR结果显示,TAMs外泌体has-miR-21-5p表达上调最显著。CCK-8、细胞划痕实验和Transwell实验发现,TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞增殖、迁移与侵袭能力。结论:TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞恶性进展。TAMs外泌体miRNAs可能在SACC进展中发挥重要作用,有望为SACC的诊治提供新的策略。

外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌进程

目的:探讨外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生发展中的作用及其潜在机制。方法:采用荧光实时定量PCR检测hsa-miR-522-3p在组织和细胞中的表达水平。使用EdU、Transwell和流式细胞术检测外泌体hsa-miR-522-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过荧光素酶测定和蛋白质印迹评估hsa-miR-522-3p对CDK6表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型验证外泌体hsa-miR-522-3p对肿瘤生长的影响。结果:本研究发现hsa-miR-522-3p在卵巢癌组织、血浆外泌体及卵巢癌细胞的外泌体中表达显著升高。与NC组比较,hsa-miR-522-3p模拟物组细胞的迁移和侵袭能力显著增高且差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,hsa-miR-522-3p抑制剂组可以促进caspase3和Bax的表达并抑制Bcl2的表达。荧光素酶报告结果显示,hsa-miR-522-3p能够靶向结合CDK6的3′-非翻译区(3′-UTR)来抑制其表达。裸鼠成瘤结果表明,外泌体hsa-miR-522-3p可增加瘤的体积及重量。结论:外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌的进程。本研究的发现将为外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生中的机制提供新的见解。

血清外泌体微小RNA-338在食管癌中的表达及临床意义

目的观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平,并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组,另选取同期本院体检健康者40例作为对照组,RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平;采用χ^(2)检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系;Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性;受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。结果与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较,OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低(F=6.604,P<0.05);与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较,癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低(t=3.319,P<0.05);观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25,t=5.318,P<0.05),血清VEGF表达水平[(22.79±4.79)pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平(16.71±3.44)pg/ml,t=6.521,P<0.05;EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377:χ^(2)=6.172、8.780、13.864,P<0.05;VEGF:χ^(2)=6.839、5.402、6.114,P<0.05);EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关(r=-0.641,P<0.05);血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95%CI:0.684~0.933),灵敏度为69.50%,特异性为88.20%;血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95%CI:0.775~0.977),灵敏度为89.65%,特异性为76.50%;miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95%CI:0.829~0.994),灵敏度为95.70%,特异性为88.21%。