食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

尿外泌体miR-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌临床结局的预测价值

目的 探讨尿外泌体微小RNA(miR)-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌(BUC)临床结局的预测价值。方法 2017年1月~2022年3月,从我院泌尿外科选取152例BUC病人作为验证集。另外,从我院体检中心选择了126例非癌对照。采用实时荧光定量PCR法检测尿外泌体miR-29c表达水平。结果 验证集BUC病人尿外泌体miR-29c水平低于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而尿外泌体miR-17-5p水平和miR-590-5p水平比较无明显差异(P>0.05)。尿外泌体miR-29c水平诊断BUC的ROC曲线下面积为0.969(95%CI:0.953~0.986),相应的敏感性和特异性分别为92.1%和90.2%。亚型分析中,非器官局限性BUC病人尿外泌体miR-29c水平较器官局限性BUC病人进一步降低(P=0.009)。预后分析中,尿外泌体miR-29c高表达组病人总生存期、无病生存期和疾病特异性生存期均更长(P<0.05)。结论 尿外泌体miR-29c低水平是BUC病人不利的预后因子,有希望作为器官和非器官局限性BUC不良临床结局的预测标志物。

miR-146a-5p miR-155-5p在寻常型银屑病不同体液外泌体中的表达

目的 探讨外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者血浆、唾液、尿液中的表达及意义。方法 采用超速离心法提取40例寻常型银屑病患者血浆、唾液和尿液中外泌体,利用投射电镜观察外泌体形态,并提取RNA,利用核酸测定仪检测RNA浓度,RT-qPCR检测miR-146a-5p、miR-155-5p的表达水平。结果 外泌体外形呈现圆形或椭圆形,直径均在60~200 nm;外泌体RNA在银屑病患者血浆、唾液、尿液中的浓度分别为3.9 ng/μl、61.6 ng/μl、0.57 ng/μl;外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者血浆、唾液、尿液中的表达分别为血浆(0.01±0.002)、(0.06±0.002),尿液(1.03±0.02)、(0.95±0.08),唾液(0.02±0.00)、(0.18±0.01)。结论 外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者不同体液中存在表达性差异,从微观角度研究银屑病,有利于为今后的诊断、治疗及发病机制的研究提供科研依据。

雪旺细胞来源的外泌体miR-21通过靶向SPRY2促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研究

目的:研究高表达miR-21的雪旺细胞(Schwann cells,SC)来源外泌体对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)的修复作用及机制。方法:分别采用空载慢病毒和高表达miR-21的慢病毒感染SC株,收集SC上清外泌体并进行鉴定。采用神经断端吻合术建立SNI大鼠模型,术后随机分为模型组、SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组(n=10)。其中,SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组分别采用体外收集的外泌体局部注射进行治疗,3周后行为学实验检测神经功能恢复,免疫荧光染色评价SNI后轴突髓鞘再生,RT-q PCR检测血清外泌体miR-21及神经组织中miR-21和SPRY2的表达水平,双荧光素酶报告基因实验体外验证miR-21和SPRY2之间的靶向互作。结果:与模型组相比,其余各组大鼠坐骨神经功能和神经再生情况均出现明显改善,RT-q PCR结果显示血清外泌体及神经组织中miR-21的表达水平显著升高,神经组织中SPRY2的表达水平显著降低,其中高表达miR-21的SC细胞来源外泌体组较SC来源外泌体组变化更显著;双荧光素酶报告基因实验表明miR-21靶向调节SPRY2的表达。结论:高表达miR-21的SC来源外泌体通过靶向SPRY2显著促进SNI后修复。

过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞外泌体调控小胶质细胞M2型极化对脑卒中的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)过表达miR-124-1基因(Exo/124-1)调控小胶质细胞(microglia,MG)的M2型极化对脑卒中的影响。方法分离培养大鼠BMMSCs,收集其Exo(BMMSCs-Exo),采用流式细胞术、Western blot与透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)分别对其进行检测鉴定。30只大鼠简单随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、Exo移植组(Exo组)、空病毒(Empty lentivirus,Elv)转染Exo移植组(Exo-Elv组)及Exo/124-1移植组(Exo/124-1组),每组6只。Sham组仅行假手术,其余各组均复制大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R)模型。模型复制1 d与14 d后,各移植组动物于右侧脑室植入相应移植物,Sham组、模型组注入相同剂量生理盐水作对照。术后2 h及1、3、7、14、21、28 d,分别对各组动物行改良神经系统严重程度评分(modified neurological severity scores,mNSS)。三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色检测其梗死体积。在基因与蛋白水平分别检测各组28 d脑组织MG的M1型分子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]、M2型分子(CD206)的表达情况。结果成功获取并鉴定了BMMSCs及其Exo。Exo/124-1显著表达miR-124-1。所有动物(假手术组除外)术后出现神经功能缺损。术后7~28 d,Exo/124-1组的mNSS明显低于MCAO/R组(P<0.05)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01);术后28 d,Exo/124-1组的脑梗死体积、TNF-α的表达明显小于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01),CD206的表达显著高于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01)。结论BMMSCs-Exo携带miR-124-1基因可能调控MG的M2型极化,抑制M1型介导的炎症反应,促进脑卒中大鼠神经功能的恢复。

龙钻通痹方对类风湿关节炎外泌体miR-155的作用机制研究

目的本研究从分子生物学水平探讨龙钻通痹方对类风湿关节炎(RA)外泌体miR-155的影响,以揭示龙钻通痹方如何干预其表达,从而为治疗RA夯实理论基础。方法本研究以胶原诱导型(CIA)的造模方式建立RA模型大鼠为研究对象,采用随机数字表法的方式将其分为正常组、模型组、龙钻通痹方组,经壮药龙钻通痹颗粒灌胃给药后,测定大鼠踝关节的肿胀指数;运用Elisa法检测血清肿瘤免疫因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子水平;并运用实时荧光定量PCR法检测血清外泌体中miR-155水平。结果不同组大鼠的踝关节肿胀程度不尽相同,正常组大鼠关节未见肿胀;而相较于治疗组,模型组大鼠未经治疗,关节肿胀程度更高(P<0.05)。治疗组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平均低于模型组(P<0.05)。治疗组大鼠血清外泌体miR-155水平高于正常组,但低于模型组(P<0.05)。结论壮药龙钻通痹方可调控miR-155的表达,抑制炎症因子的表达,进而发挥抗炎作用。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。

地塞米松干预的间充质干细胞来源外泌体中miR-708对成骨分化、增殖和迁移的影响

目的探讨用地塞米松干预的间充质干细胞(MSC)来源外泌体中miR-708对MSC成骨分化、增殖和迁移的影响。方法通过超速离心获得未被和被地塞米松干预的MSC外泌体Exo-1和Exo-2,透射电镜观察外泌体形态,Wsetern印迹检测外泌体标志蛋白CD63,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两种外泌体中miR-708表达。将MSC分为对照组、Exo-1组和Exo-2组,并进行成骨诱导分化培养,外泌体处理组分别加入20μg/ml Exo-1或Exo-2,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)。茜素红染色观察细胞成骨分化能力。CCK-8检测细胞增殖活力。划痕实验评估细胞迁移能力。结果MSC外泌体有典型的茶托样结构且检测到CD63表达;用地塞米松干预的MSC外泌体中miR-708高表达。与对照组和Exo-1组相比,Exo-2组MSC成骨分化能力、增殖活力和迁移能力显著降低(P<0.05)。结论用地塞米松干预的MSC来源外泌体中miR-708可抑制MSC成骨分化、增殖和迁移。

血浆外泌体miR-19b、miR-126检测鉴别肺结节良恶性的临床研究

目的利用液态活检技术,寻找合适的外泌体miRNA肿瘤生物标志物,用于肺结节良恶性鉴别诊断。方法选取2019年1月—12月安徽省第二人民医院初诊肺癌术后的24对肺癌组织及癌旁组织样本,筛选出差异性表达的miRNA标志物miR-19b和miR-126。选取2020年1月—2022年12月初诊肺恶性结节患者58例为观察组,良性结节患者31例为对照组,检测血浆外泌体miR-19b、miR-126在两组的表达量,以miR-16为内参,分析血浆外泌体miR-19b和miR-126表达量差异在肺结节良恶性鉴别中的应用价值。结果肺癌组织中miR-19b表达水平为(45.91±13.73),与癌旁组织(11.61±3.87)相比显著升高(P<0.05);miR-126表达水平为(0.70±0.22),与癌旁组织(2.56±0.75)相比显著降低(P<0.05)。miR-19b和miR-126在观察组血浆外泌体表达水平分别为(1.83±0.49)和(0.83±0.26),显著高于对照组[(0.93±0.31)和(0.40±0.12)](P<0.05);血浆外泌体miR-19b在观察组和对照组鉴别的曲线下面积[AUC:0.808(95%CI:0.718~0.898,P<0.001)],取cutoff值为0.936,灵敏度为82.8%,特异性为64.5%,高于miR-126的检测。对miR-19b和miR-126相对定量值进行秩和检验,按肿瘤大小和肿瘤浸润性分组,miR-19b表达水平有显著性差异(P<0.05),按肿瘤浸润性分组,miR-126表达水平有显著性差异(P<0.05)。结论血浆外泌体miR-19b、miR-126的表达量值可辅助鉴别肺结节良恶性。

宫颈癌源外泌体miR-191-5p通过靶向TJP1调控血管内皮细胞层通透性促癌细胞转移的分子机制研究

目的探讨宫颈癌细胞分泌的外泌体miR-191-5p对血管内皮细胞层的通透性影响,为肿瘤血管相关的基因靶点研究提供理论依据。方法提取并鉴定宫颈癌细胞(SiHa/HeLa)培养上清来源的外泌体。将宫颈癌细胞源外泌体与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养,检测外泌体的摄取。跨内皮电阻(TEER)测定HUVEC单层细胞形成时间。内皮细胞层通透性测定HUVEC细胞层通透性。qRT-PCR检测宫颈癌细胞、外泌体及与外泌体共培养48 h的HUVEC中miR-191-5p表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-191-5p与TJP1的靶向关系。qRT-PCR、Western blot检测miR-191-5p、TJP1表达。内皮细胞层穿透实验检测miR-191-5p对HUVEC细胞层通透性的影响以及能否促进宫颈癌转移。恢复实验、qRT-PCR、Western blot检测TJP1的表达。结果提取的微小囊泡确是宫颈癌源外泌体。宫颈癌源外泌体可被HUVEC细胞摄取。TEER随时间增加而增大,在培养3 d时细胞形成单层,TEER达到最大值;外泌体共培养的HUVEC细胞层通透性增大,差异有统计学意义(P<0.0001)。miR-191-5p在宫颈癌源外泌体中富集,并被转运至HUVEC细胞中,miR-191-5p与TJP1存在靶向关系。与PBS组比较,miR-191-5p mimics组的miR-191-5p相对表达水平升高,TJP1的相对表达水平下降,而miR-191-5p inhibitor组的miR-191-5p相对表达水平下降,TJP1的相对表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与PBS组比较,miR-191-5p mimics组通透性增加,而miR-191-5p inhibitor组通透性减弱,差异有统计学意义(P<0.0001)。在SiHa细胞中,与PBS组比较,miR-191-5p mimics组穿透的平均细胞数增加,miR-191-5p inhibitor组穿透的平均细胞数下降,差异有统计学意义(P<0.05)。在HeLa细胞中,与PBS组比较,miR-191-5p mimics组穿透的平均细胞数增加,miR-191-5p inhibitor组穿透的平均细胞数下降,差异有统计学意义(P<0.05)。恢复实验结果显示,与PBS组比较,miR-191-5p mimics组TJP1的相对表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-191-5p mimics组比较,pCMV-T+mimics组中TJP1的表达量增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论宫颈癌源外泌体miR-191-5p通过靶向调控TJP1导致血管内皮细胞层通透性增加,进而促进宫颈癌细胞转移。

幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)诱导的人胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响及机制,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索。方法:超高速离心法和试剂盒提取H.pylori刺激组和对照组AGS细胞释放的外泌体,采用透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)和Western blot对外泌体进行鉴定;qRT-PCR检测H.pylori诱导的胃癌细胞AGS源性外泌体中miR-382-5p表达;将miR-382-5p mimic转染至THP-1巨噬细胞,Western blot检测巨噬细胞自噬标志物LC3Ⅱ、P62、Beclin-1的表达,免疫荧光检测自噬小体数量;Western blot检测PTEN蛋白、其下游蛋白PI3K、AKT、mTOR及其磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平;流式细胞术检测巨噬细胞表型分子CD206和HLA-DR表达水平;ELISA检测巨噬细胞上清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10和精氨酸酶1表达水平。结果:提取的外泌体符合外泌体形态,且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101;与空白对照组相比,H.pylori感染组AGS源性外泌体中miR-382-5p表达显著升高;miR-382-5p mimic转染导致巨噬细胞LC3、Beclin-1表达降低,P62表达升高,自噬小体数量降低;PTEN蛋白表达降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达明显增加。转染同时导致巨噬细胞M2型标志蛋白CD206表达增加,M1型标志蛋白HLA-DR表达降低;IL-10和精氨酸酶1表达增加,IL-6和TNF-α表达降低。抑制剂BEZ235预处理可部分逆转miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响。结论:H.pylori诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN基因,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化。

PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化修复牙槽骨缺损

目的:探究PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化对牙槽骨缺损的修复作用。方法:培养骨髓间充质干细胞,(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),并转染anti-miR-132、anti-miR-NC质粒。制备BMSCs来源外泌体(bone mesenchymal stem cells-exosomes,BMSCs-exo),蛋白质印迹法鉴定表达标志物。制备PF-127水凝胶和BMSCs-Exo复合物,PKH67标记法检测BMSCs的摄取;茜素红染色检测BMSCs的成骨能力;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测细胞中miR-132表达和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)mRNA表达。建立牙槽骨缺损大鼠模型,将大鼠随机分为PF-127水凝胶组、PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组。微型计算机断层扫描(Micro-computed tomography,micro-CT)评估牙槽骨缺损情况;蛋白质印迹法检测牙槽骨组织中ALP、OCN、Runx2蛋白表达。结果:anti-miR-132组BMSCs中miR-132表达明显低于anti-miR-NC组(P<0.05),提示anti-miR-132成功转染至BMSCs中。BMSCs-exo-anti-miR-NC组和BMSCs-exo-anti-miR-132组中外泌体标志物CD9和CD63显著表达。和BMSCs-exo-anti-miR-NC组相比,BMSCs-exo-anti-miR-132组中miR-132表达明显降低(P<0.05)。和PF127水凝胶组相比,BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组中miR-132表达均明显降低,茜素红染色相对活性、细胞中Runx2、ALP和OCN mRNA表达均明显增加,且PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组BV/TV比值、BMD、Tb.N和Tb.Th及细胞中Runx2、ALP、OCN蛋白表达均明显升高,Tb.Sp明显降低(P<0.05),且PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组变化最显著。结论:PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞来源外泌体来源干扰miR-132表达可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而促进牙槽骨缺损大鼠的修复。

温阳贴贴敷涌泉穴对慢性心力衰竭病人血清UCP2、外泌体及外泌体内miR-320水平的影响

目的:探讨温阳贴贴敷涌泉穴对慢性心力衰竭(CHF)病人解偶联蛋白-2(UCP2)、血清外泌体及外泌体内miR-320水平的影响,挖掘其作用机制。方法:选取60例CHF病人,随机分为对照组、电针组、穴位贴敷组,每组20例。对照组以西药治疗,电针组、穴位贴敷组分别在西药治疗的基础上加用电针、温阳贴刺激涌泉穴。试剂盒法提取血清外泌体,免疫印迹(Western Blot)法检测CD63、CD81、TSG101、Alix蛋白表达,纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测径粒大小。使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测病人血清中UCP2、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)表达水平及外泌体分泌量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外泌体内miR-320水平。对NT-proBNP、UCP2、外泌体分泌量、miR-320进行相关性分析。结果:CD63、CD81、TSG101、Alix蛋白阳性表达,NTA径粒分析显示符合外泌体径粒大小。穴位贴敷组NT-proBNP、UCP2、miR-320表达水平高于电针组与对照组(P<0.05);穴位贴敷组外泌体分泌量高于电针组与对照组(P<0.05)。NT-proBNP与UCP2、miR-320呈正相关(P<0.01),与外泌体分泌量呈负相关(P<0.01);UCP2与miR-320呈正相关(P<0.01),与外泌体分泌量呈负相关(P<0.01);外泌体分泌量与miR-320呈负相关(P<0.01)。结论:温阳贴的治疗CHF的机制可能与外泌体、miR-320的调控以及UCP2介导的心肌能量代谢相关。

血浆外泌体miR-155预测急性胰腺炎严重程度及预后的研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)严重程度及预后与血浆外泌体miR-155表达水平的相关性。方法选取2022年1-11月宜春市人民医院消化内科入院诊治的100例AP患者作为研究对象,根据AP亚特兰大分类标准分为轻度AP组(n=35)、中度AP组(n=33)与重度AP组(n=32)。比较3组中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)、AP严重程度相关评分[重症胰腺炎病情评估Ranson量表、改良CT严重指数评分(MCTSI)、AP严重程度床边评分(BISAP)]、血浆外泌体miR-155,建立Logistic回归模型分析AP病情严重程度的影响因素;分析血浆外泌体、ApoA-Ⅰ表达与Ranson评分、MCTSI评分、BISAP评分的相关性;绘制ROC曲线分析血浆外泌体miR-155、NLR、ApoA-Ⅰ预测AP严重程度的价值。结果重度、中度AP组血浆外泌体miR-155水平、NLR及BISAP、MCTSI、Ranson评分均高于轻度AP组,ApoA-Ⅰ水平均低于轻度AP组,且重度AP组血浆外泌体miR-155水平、NLR及BISAP、MCTSI、Ranson评分均高于中度AP组,ApoA-Ⅰ水平低于中度AP组,差异有统计学意义(P<0.05)。血浆外泌体miR-155、NLR、BISAP评分、MCTSI评分、Ranson评分是AP病情严重程度的独立危险因素(P<0.05),ApoA-Ⅰ是AP病情严重程度的保护因素(P<0.05)。血浆外泌体miR-155、NLR与BISAP、MCTSI、Ranson评分均呈正相关(P<0.05),ApoA-Ⅰ与BISAP、MCTSI、Ranson评分均呈负相关(P<0.05)。血浆外泌体miR-155、NLR、ApoA-Ⅰ联合预测AP严重程度的AUC(0.863)、灵敏度(87.69%)、特异度(94.29%)均高于单独指标检测(P<0.05)。结论外泌体miR-155、NLR、ApoA-Ⅰ水平与AP严重程度密切相关,病情越严重外泌体miR-155表达与NLR水平越高,ApoA-Ⅰ水平越低,三者联合检测能有效预测和评估AP患者预后。

宫颈癌患者血清外泌体miR-185-5p表达水平变化及临床应用价值

目的:探究宫颈癌患者血清微小RNA-185-5p表达水平及临床应用价值。方法:选取113例宫颈癌患者(宫颈癌组)、101例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者(CIN组)和95例健康体检女性(健康对照组),采用实时荧光定量PCR法检测三组血清外泌体miR-185-5p的表达水平,比较各组血清外泌体miR-185-5p水平差异,并探讨其与宫颈癌患者临床病理特征的关系。采用Cox回归模型对血清外泌体miR-185-5p水平及临床病理资料进行多因素分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体miR-185-5p对宫颈癌的诊断价值。结果:与健康对照组比较,宫颈癌组和CIN组患者血清外泌体miR-185-5p表达水平显著降低(P<0.01),且宫颈癌组更低于CIN组(P<0.01)。在FIGO分期Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴结转移和有阴道壁累及的宫颈癌患者其血清外泌体miR-185-5p水平分别显著低于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期、无淋巴结转移和无阴道壁累及的患者(P<0.05或P<0.01)。血清外泌体miR-185-5p的水平(HR=0.260,P<0.01)与淋巴结转移(HR=1.572,P<0.05)是宫颈癌患者预后的独立影响因素。血清外泌体miR-185-5p鉴别宫颈癌的ROC曲线下面积为0.796,敏感度为67.26%,特异度为81.05%。结论:血清外泌体miR-185-5p水平有助于宫颈癌的临床诊断和早期预后评估。

胸腔积液外泌体miR-506-3p联合腺苷脱氨酶检测在结核性胸膜炎的早期诊断及预后评估中的价值

目的 分析胸腔积液外泌体miR-506-3p联合腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)在结核性胸膜炎的早期诊断及预后评估中的价值。方法 选取2021年8月至2023年3月就诊于沧州市人民医院的90例结核性胸膜炎患者作为结核组,另选同期于沧州市人民医院就诊的50例非结核性胸膜炎(肺炎旁胸腔积液、恶性胸腔积液等)患者作为非结核组,对比两组临床资料与胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平,经多因素Logistic回归分析影响结核性胸膜炎发生的危险因素。根据治疗3个月后患者预后情况,将结核组分为预后良好组(72例)、预后不良组(18例),对比两组胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平。经Pearson相关性分析,并绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线),分析胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平及二者联合预测结核性胸膜炎发生及患者预后的价值。结果 结核组患者胸腔积液ADA水平比非结核组高,胸腔积液外泌体miR-506-3p水平比非结核组低(P<0.05);经多因素Logistic回归分析发现,胸腔积液ADA水平高[OR=1.205(95%CI 1.105~1.313)]是结核性胸膜炎发生的危险因素(P<0.05),外泌体miR-506-3p水平高表达[OR=0.320(95%CI 0.158~0.658)]是结核性胸膜炎发生的保护因素(P<0.05);预后不良组患者胸腔积液ADA水平比预后良好组高,胸腔积液外泌体miR-506-3p水平比预后良好组低(P<0.05);绘制ROC曲线发现,胸腔积液ADA、外泌体miR-506-3p水平及二者联合预测结核性胸膜炎发生的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.729(95%CI 0.640~0.818)、0.810(95%CI 0.738~0.883)、0.874(95%CI 0.818~0.930),预测结核性胸膜炎患者不良预后的AUC为0.892(95%CI 0.806~0.978)、0.924(95%CI 0.868~0.981)、0.942(95%CI 0.875~1.000);Pearson相关性显示,胸腔积液ADA与外泌体miR-506-3p水平呈负相关(r=-0.335,P=0.001)。结论 结核性胸膜炎患者胸腔积液外泌体miR-506-3p呈低表达、ADA呈高表达,二者之间为负相关,且miR-506-3p联合ADA可有效预测结核性胸膜炎患者不良预后的发生。

骨髓间充质干细胞来源外泌体调节大鼠肝细胞凋亡的机制

背景:骨髓间充质干细胞可释放大量外泌体,关于骨髓间充质干细胞来源外泌体对肝细胞凋亡的影响以及具体机制还没有完全阐明。目的:探索骨髓间充质干细胞来源外泌体所携带的miR-21-5p对大鼠肝脏细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞,将miR-21-5p NC或miR-21-5p inhibitor转染到骨髓间充质干细胞中,采用超速离心法提取外泌体,命名为(BMSCs+miR-21-5p NC)-Exos,(BMSCs+miR-21-5p inhibitor)-Exos,将外泌体与BRL大鼠肝细胞共培养,观察抑制miR-21-5p表达后对大鼠肝细胞凋亡的影响。通过双荧光素酶报告基因检测验证外泌体中miR-21-5p和PIK3R1之间的靶向关系;TUNEL检测外泌体中miR-21-5p直接靶向PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路对BRL大鼠肝细胞凋亡的影响。结果与结论:①双荧光素酶报告系统证实,PI3KR1野生型载体与miR-21-5p mimics共转染293T细胞时的荧光素酶活性显著低于PI3KR1突变型载体共转染组,表明miR-21-5p可靶向结合PIK3R1;②TUNEL检测结果显示:相比于(BMSCs+miR-21-5p NC)-Exos组,(BMSCs+miR-21-5p inhibitor)-Exos处理后BRL肝细胞凋亡率显著增加;与(BMSCs+miR-21-5p NC)-Exos组相比,加入AKT抑制剂LY294002之后,细胞凋亡率显著增加;③结果提示:外泌体可能通过miR-21-5p直接靶向PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路抑制BRL大鼠肝细胞凋亡。

骨肉瘤患者血清外泌体中miR-193a和miR-21-5p表达水平及其临床意义

目的:探讨血清外泌体中miR-193a和miR-21-5p在骨肉瘤患者中的表达水平及其与骨肉瘤临床病理指标的关系和对预后的影响。方法:收集2016年1月—2021年12月于枣阳市第一人民医院就诊的112例骨肉瘤患者临床资料,另取100例健康体检者为对照组。采集受试者外周血5 mL,制备血清并分离提纯血清外泌体,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-193a和miR-21-5p的表达水平。利用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-193a和miR-21-5p在骨肉瘤组和健康对照组患者血清中的表达差异,并分析其与临床病理指标和预后的相关性。结果:与健康对照组相比,骨肉瘤患者血清外泌体miR-193a和miR-21-5p表达水平均显著升高(P<0.01)。miR-193a和miR-21-5p对骨肉瘤诊断效能的曲线下面积(AUC)分别为0.811和0.880,灵敏度分别为89.2%和90.2%,特异度分别为75.0%和84.0%。二者联合诊断的AUC为0.901,高于单一指标的诊断效能,灵敏度为92.1%,特异度为86.5%。骨肉瘤患者血清外泌体miR-193a和miR-21-5p表达升高与TNM分期、远处转移和更差的预后相关(均P<0.05)。结论:miR-193a和miR-21-5p表达水平在骨肉瘤患者血清外泌体中显著升高,且提示更差的预后。血清外泌体miR-193a和miR-21-5p有望成为骨肉瘤诊断和预后预测的生物标志物。

人骨髓间充质干细胞外泌体来源的miR-335-5p促进人牙周膜干细胞的成骨分化:基于下调DKK1表达

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)外泌体来源的miR-335-5p调控DKK1对人牙周炎中牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法提取hBMMSCs外泌体,通过透射电镜、Western blot以及PKH67标记鉴定外泌体,通过TNF-α诱导PDLSCs构建牙周炎细胞模型。提取的外泌体与TNF-α诱导的PDLSCs共同培养。qRT-PCR检测miR-335-5p,促炎因子IL-1β、IL-6、IL-8和成骨标志基因RunX2、OCN、BMP-2 mRNA表达。茜素红和ALP染色检测钙结节,Western blot检测DKK1蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与DKK1的靶向关系。结果提取的hBMMSCs外泌体中CD9和CD81显著表达(P<0.05)。hBMMSC外泌体降低TNF-α诱导的hPDLSCs中促炎细胞因子IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.05)的mRNA表达并促进成骨标志基因RunX2(P<0.01)、OCN(P<0.05)、BMP-2(P<0.001)mRNA和钙结节生成。miR-335-5p在hBMMSCs外泌体中高表达,过表达miR-335-5p靶向下调DKK1(P<0.001),抑制促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8的表达(P<0.001),促进成骨标志物BMP-2、OCN、RunX2的mRNA表达以及钙结节生成(P<0.001)。结论hBMMSC外泌体来源的miR-335-5p靶向下调DKK1,促进hPDLSCs成骨分化,抑制牙周炎的发展进程。

血清外泌体miR-20b-5p miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用

目的探究血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用价值。方法选取2015年12月至2018年12月河南科技大学第一附属医院胸外科收治的124例非小细胞肺腺癌患者为观察组,另选取120例同期于本院接受体检的健康体检者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链法(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-20b-5p、miR-107表达水平,受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-20b-5p、miR-107水平检测对非小细胞肺腺癌的早期诊断价值,Kaplan-Meier生存分析研究miR-20b-5p、miR-107水平与患者预后的关系。结果观察组的血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体miR-20b-5p、miR-107检测诊断非小细胞肺腺癌的AUC值分别为0.766、0.821,最佳截断值分别为1.81、1.27。观察组患者中,117例完成随访,7例失访。随访3年后,64例患者死亡,53例患者存活。根据患者的生存状态绘制ROC曲线,确定miR-20b-5p、miR-107预测患者预后的最佳截断值分别为1.95、1.60;miR-20b-5p高表达与低表达、miR-107高表达与低表达患者的TNM分期和淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-20b-5p、miR-107高表达患者的中位生存时间均低于低表达患者(P<0.05)。结论外泌体miR-20b-5p、miR-107在非小细胞肺腺癌患者血清中呈高表达状态,其表达水平与患者的预后相关,在疾病诊断与预测患者累计生存率方面具有一定的参考意义。