循环外泌体miR-485-3p和miR-32-5p表达与早发冠心病发病的相关性研究

目的分析循环外泌体miR-485-3p、miR-32-5p表达和早发冠心病发病的相关性。方法回顾性纳入2023年10月至2024年5月确诊为早发冠心病的50例患者作为观察组,另外纳入同期检查排除冠心病诊断的50例健康体检者作为对照组,收集两组基本资料和临床资料,对存在差异的指标采取多元logistic回归模型分析早发冠心病的影响因素,采取Spearman相关分析法分析血浆外泌体miR-485-3p、miR-32-5p水平和早发冠心病发生及Gensini积分的相关性,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价血浆外泌体miR-485-3p、miR-32-5p单独或联合对早发冠心病的预测价值。结果观察组的冠心病家族史比例、吸烟史比例、低密度脂蛋白(LDL)、miR-485-3p、miR-32-5p及Gensini积分均高于对照组(P<0.05)。存在差异的指标采取多元logistic回归模型分析,发现吸烟史、冠心病家族史、LDL、miR-485-3p、miR-32-5p均为影响早发冠心病发生的主要因素,OR值分别为6.997(95%CI:1.578~31.027)、16.671(95%CI:1.666~166.799)、2.632(95%CI:1.060~6.537)、12.717(95%CI:2.629~61.505)、6.000(95%CI:1.839~19.571)。早发冠心病和循环外泌体miR-485-3p、miR-32-5p表达呈正相关关系(r=0.525、0.548,P<0.05);早发冠心病Gensini积分和循环外泌体miR-485-3p、miR-32-5p表达也呈正相关关系(r=0.485、0.506,P<0.05)。ROC曲线发现,循环外泌体miR-485-3p、miR-32-5p预测早发冠心病的ROC曲线下面积(AUC)值分别为0.927、0.936,联合预测的AUC值达到0.957。结论循环外泌体miR-485-3p、miR-32-5p在早发冠心病中表达均上调,二者与早发冠心病发病及冠脉病变程度呈正相关,均为疾病发生的影响因素,能当作预测疾病发生的潜在生物标志物,且联合两项指标的预测价值更高。

循环外泌体miR-485-3p和STYX表达与早发冠心病发病的相关性研究

目的研究循环外泌体miR-485-3p和丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸结合蛋白(STYX)表达与早发冠心病发病风险的相关性。方法选取2023年8-12月于新乡医学院附属濮阳市人民医院住院并经冠状动脉造影或CT血管造影(CTA)确诊的早发冠心病患者50例作为研究组,另外选取同期经检查排除冠心病诊断的患者50例作为对照组,收集两组患者的一般临床资料,检测血浆外泌体miR-485-3p、STYX水平。采用Gensini评分评估研究组患者的冠状动脉病变程度。采用Spearman相关分析研究血浆外泌体miR-485-3p、STYX与低密度脂蛋白(LDL)、Gensini评分的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆外泌体miR-485-3p、STYX对早发冠心病的诊断价值。采用多因素logistic回归确定早发冠心病的独立危险因素。结果与对照组比较,研究组冠心病家族史、吸烟史、LDL、血浆外泌体miR-485-3p水平均升高,血浆STYX水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,miR-485-3p与LDL(r=0.546)、Gensini评分(r=0.485)呈正相关,与STYX(r=-0.576)呈负相关(P<0.05);STYX与LDL(r=-0.389)、Gensini评分(r=-0.531)呈负相关(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-485-3p、STYX及两者联合诊断早发冠心病的曲线下面积分别为0.821(95%CI:0.736~0.906)、0.850(95%CI:0.772~0.927)、0.899(95%CI:0.837~0.960)。结论在早发冠心病中,循环外泌体miR-485-3p表达上调,STYX表达下调,两者与冠状动脉病变程度密切相关,可作为诊断早发冠心病的潜在生物学标志物。

清肾颗粒通过调控外泌体、miR-330-3p以及CREBBP表达抑制小鼠肾纤维化

目的探讨清肾颗粒对腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型及尿酸刺激下NRK-49F细胞的作用及其调控外泌体、miR-330-3p和CREBBP的机制。方法动物实验:构建腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型,分为正常组、模型组和清肾颗粒组(8.0 g·kg^(-1)·d^(-1)),6只/组,灌胃12周。采用尾静脉注射腺相关病毒载体,实验结束后收集双侧肾组织。观察小鼠肾组织外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测小鼠肾组织Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化;HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理学变化。细胞实验:构建尿酸刺激下的NRK-49F细胞模型(尿酸400μmol/L),SD大鼠灌胃制备清肾颗粒含药血清用于细胞实验,分为正常组、模型组和清肾颗粒含药血清组。观察NRK-49F细胞中外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测NRK-49F细胞中Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化;双荧光素酶报告基因检测miR-330-3p与CREBBP靶向关系;RT-qPCR和Western blotting检测NRK-49F细胞中miR-330-3p与CREBBP表达变化。结果动物实验中,Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平降低(P<0.05)。Western blotting及免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组Col-III、α-SMA、FN表达增加,E-cad表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组Col-III、α-SMA、FN表达减少,E-cad表达增加(P<0.05)。肾脏病理检查显示,清肾颗粒可以明显减轻小鼠肾组织纤维化(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,尾静脉注射腺相关病毒病毒载体抑制miR-330-3p表达,增加CREBBP水平,减轻肾纤维化(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,CREBBP是miR-330-3p的靶点(P<0.05)。RT-qPCR和Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组miR-330-3p表达增加,CREBBP表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组miR-330-3p表达减少,CREBBP表达增加(P<0.05)。细胞实验结果与动物实验结果趋势一致。结论清肾颗粒通过干预外泌体,降低miR-330-3p水平,增加CREBBP表达抑制肾纤维化。

miR-210-3p、miR-126-3p在子痫前期患者血浆外泌体中的表达及意义

目的 比较子痫前期孕妇与正常妊娠孕妇孕晚期外周血血浆外泌体中的miR-126-3p、miR-210-3p表达水平,探究其在子痫前期早期预测和临床诊断中的意义。方法 收集30例子痫前期孕晚期孕妇(观察组)和30例健康孕晚期孕妇(对照组)的病历资料,采集孕妇外周静脉血,提取血浆内外泌体及外泌体总RNA,通过实时荧光定量PCR检测外泌体miR-210-3p、miR-126-3p的相对表达水平,并采用ROC曲线评价目标miRNA在子痫前期临床诊断中的价值。结果 子痫前期组孕妇血浆外泌体中的miR-126-3p相对表达量(0.74±0.39)低于正常妊娠组(1.05±0.47),miR-210-3p的相对表达量(1.72±0.62)高于正常妊娠组(1.35±0.38),差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,孕妇血浆外泌体miR-126-3p联合miR-210-3p诊断子痫前期的AUC为0.775(95%CI:0.629~0.921,P=0.003)。结论 与健康孕妇相比,子痫前期孕妇的血浆外泌体中miR-126-3p水平升高、miR-210-3p水平降低,两者联合检测对子痫前期有较好的诊断效能。

非小细胞肺癌患者血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p表达与病理特征的关系

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体长链非编码核糖核酸母系表达基因8(lncRNA MEG8)、微小核糖核酸-363-3p(miR-363-3p)表达与病理特征的关系。方法 选取2021年1月至2023年5月四川大学华西医院收治的93例NSCLC患者为NSCLC组,另选取同期43例健康志愿者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p水平。通过StarBase数据库预测lncRNA MEG8与miR-363-3p的关系。采用Pearson相关法分析NSCLC患者血清外泌体lncRNA MEG8与miR-363-3p水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p水平对NSCLC的诊断价值。结果 与对照组比较,NSCLC组血清外泌体lncRNA MEG8水平升高(P<0.05),miR-363-3p水平降低(P<0.05)。经StarBase数据库预测,lncRNA MEG8与miR-363-3p存在互补序列。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者血清外泌体lncRNA MEG8与miR-363-3p水平呈负相关(r=-0.730,P<0.001)。不同分化程度(低分化与中/高分化)、TNM分期(Ⅰ~Ⅱ期与Ⅲ~Ⅳ期)、淋巴结转移(有与无)NSCLC患者血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p水平比较有差异(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p水平联合诊断NSCLC的曲线下面积为0.965,大于血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p水平单独诊断的0.908、0.904(P<0.05)。结论 NSCLC患者血清外泌体lncRNA MEG8水平升高,miR-363-3p水平降低,与分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关,血清外泌体lncRNA MEG8、miR-363-3p水平联合诊断NSCLC的价值较高。

外泌体中miR-181a-3p通过UPR/ERAD通路轴调控肺癌对安罗替尼的耐药性

目的探讨外泌体中miR-181a-3p通过未折叠蛋白反应(UPR)/内质网相关蛋白降解(ERAD)通路轴调控肺癌对安罗替尼的耐药性。方法选取人非小细胞肺癌细胞HCC827进行培养,并使用梯度浓度的安罗替尼持续处理诱导安罗替尼耐药性HCC827细胞(HCC827/Anl细胞),对细胞进行转染,分为空白组、对照组及miR-181a-3p inhibitor组。qRT-PCR检测miR-181a-3p表达。MTT法检测HCC827/Anl细胞活性。流式细胞术检测HCC827/Anl细胞凋亡情况。Transwell法检测HCC827/Anl细胞迁移、侵袭情况。Western blot检测UPR/ERAD通路相关蛋白表达。双荧光素酶报告检测miR-181a-3p、eIF2α、HRD1关系。结果空白组与对照组细胞增殖率、侵袭、迁移细胞数比较,差异无统计学意义(P>0.05);与空白组、对照组比较,miR-181a-3p inhibitor组细胞增殖率、侵袭、迁移细胞数明显较低(P<0.05)。对照组与miR-181a-3p inhibitor组eIF2α-MUT、HRD1-MUT无明显差异(P>0.05);但与对照组对比,miR-181a-3p inhibitor组eIF2α-WT、HRD1-WT明显降低(P<0.05)。结论肺癌耐安罗替尼细胞中miR-181a-3p表达明显上调,而miR-181a-3p可能通过外泌体包裹转运激活UPR/ERAD通路轴调控肺癌耐药细胞的增殖、侵袭及迁移,从而增强肺癌对安罗替尼的耐药性。

COPD患者肺泡灌洗液来源外泌体通过miR-223-3p/FOXO3通路抑制成骨细胞成骨分化的作用

目的探索慢性阻塞性肺病患者肺泡灌洗液来源的外泌体(COPD-bronchoalveolar lavage fluid-exosome,COPD-Exo)调控成骨细胞分化的作用及机制。方法选取2023年6月于陆军军医大学第一附属医院就诊的6例COPD患者和6例非COPD患者(对照),在临床肺泡灌洗过程中收集肺泡灌洗液,提取COPD-Exo、非COPD患者肺泡灌洗液来源的外泌体(ctrl-bronchoalveolar lavage fluid-exosome,Ctrl-Exo),使用电镜和Western blot进行鉴定。使用茜素红染色、qRT-PCR检测COPD-Exo干预成骨细胞后成骨分化水平的改变。对GEO数据库数据集(GSE218571)中COPD-Exo的微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱进行生物信息学分析,获得COPD-Exo中差异表达的miRNA,使用Antagomir阻碍MircoRNA功能,明确具有成骨分化调控功能的miRNA,使用Targetscan软件预测miRNA的下游靶基因并进行验证。结果COPD患者和非COPD患者的肺泡灌洗液内均可提取出外泌体。茜素红染色及PCR结果表明,COPD-Exo可以抑制人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化(P<0.05)。生物信息学分析显示,COPD-Exo中miR-223-3p表达水平显著上调。使用Antagomir阻碍miR-223-3p可减轻COPD-Exo对于人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化抑制(P<0.05)。Targetscan预测和Western blot结果显示miR-223-3p可能靶向抑制成骨分化相关因子FOXO3的表达(P<0.05)。结论COPD-Exo可能通过miR-223-3p抑制人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化,该过程与miR-223-3p抑制FOXO3表达有关。

幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)诱导的人胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响及机制,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索。方法:超高速离心法和试剂盒提取H.pylori刺激组和对照组AGS细胞释放的外泌体,采用透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)和Western blot对外泌体进行鉴定;qRT-PCR检测H.pylori诱导的胃癌细胞AGS源性外泌体中miR-382-5p表达;将miR-382-5p mimic转染至THP-1巨噬细胞,Western blot检测巨噬细胞自噬标志物LC3Ⅱ、P62、Beclin-1的表达,免疫荧光检测自噬小体数量;Western blot检测PTEN蛋白、其下游蛋白PI3K、AKT、mTOR及其磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平;流式细胞术检测巨噬细胞表型分子CD206和HLA-DR表达水平;ELISA检测巨噬细胞上清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10和精氨酸酶1表达水平。结果:提取的外泌体符合外泌体形态,且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101;与空白对照组相比,H.pylori感染组AGS源性外泌体中miR-382-5p表达显著升高;miR-382-5p mimic转染导致巨噬细胞LC3、Beclin-1表达降低,P62表达升高,自噬小体数量降低;PTEN蛋白表达降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达明显增加。转染同时导致巨噬细胞M2型标志蛋白CD206表达增加,M1型标志蛋白HLA-DR表达降低;IL-10和精氨酸酶1表达增加,IL-6和TNF-α表达降低。抑制剂BEZ235预处理可部分逆转miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响。结论:H.pylori诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN基因,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化。

膀胱癌患者尿液外泌体中miR-494-3p,LncRNA MAGI2-AS3表达水平及临床价值研究

目的探讨膀胱癌患者尿液外泌体中微小核糖核酸(microRNA,miR)-494-3p,长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)MAGI2-反义RNA 3(MAGI2-antisense RNA 3,MAGI2-AS3)表达水平及临床应用价值。方法选取重庆两江新区第一人民医院2021年7月~2023年6月收治的105例膀胱癌患者为癌变组,另选取同期膀胱良性疾病患者101例作为良性组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平。Kappa检验分析尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3与病理活检诊断膀胱癌的一致性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平对膀胱癌的诊断价值。结果癌变组尿液外泌体miR-494-3p水平(1.41±0.32)高于良性组(1.02±0.24),LncRNA MAGI2-AS3水平(0.79±0.19)低于良性组(1.05±0.22),差异具有统计学意义(t=9.866,9.089,均P<0.05)。miR-494-3p高表达组肿瘤直径>3 cm,T3~T4期以及淋巴结转移的占比显著高于miR-494-3p低表达组,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.806,6.999,8.289,均P<0.05)。LncRNA MAGI2-AS3低表达组T3~T4期及发生淋巴结转移的比例明显高于LncRNA MAGI2-AS3高表达组,差异具有统计学意义(χ^(2)=9.244,7.795,均P<0.05)。尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3联合与病理活检诊断膀胱癌的一致性较高(Kappa值=0.718,P<0.05)。ROC曲线显示,尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平单独诊断膀胱癌的AUC(95%CI)分别为0.812(0.752~0.863)和0.779(0.716~0.833),尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平联合诊断膀胱癌的AUC(95%CI)[0.877,(0.824~0.918)]显著高于两者分别单独诊断(Z=2.053,2.647,P=0.040,0.008)。结论膀胱癌患者尿液外泌体中miR-494-3p水平升高,LncRNA MAGI2-AS3水平下降,二者联合对膀胱癌的诊断价值较高。

胸腔积液外泌体miR-506-3p联合腺苷脱氨酶检测在结核性胸膜炎的早期诊断及预后评估中的价值

目的 分析胸腔积液外泌体miR-506-3p联合腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)在结核性胸膜炎的早期诊断及预后评估中的价值。方法 选取2021年8月至2023年3月就诊于沧州市人民医院的90例结核性胸膜炎患者作为结核组,另选同期于沧州市人民医院就诊的50例非结核性胸膜炎(肺炎旁胸腔积液、恶性胸腔积液等)患者作为非结核组,对比两组临床资料与胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平,经多因素Logistic回归分析影响结核性胸膜炎发生的危险因素。根据治疗3个月后患者预后情况,将结核组分为预后良好组(72例)、预后不良组(18例),对比两组胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平。经Pearson相关性分析,并绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线),分析胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平及二者联合预测结核性胸膜炎发生及患者预后的价值。结果 结核组患者胸腔积液ADA水平比非结核组高,胸腔积液外泌体miR-506-3p水平比非结核组低(P<0.05);经多因素Logistic回归分析发现,胸腔积液ADA水平高[OR=1.205(95%CI 1.105~1.313)]是结核性胸膜炎发生的危险因素(P<0.05),外泌体miR-506-3p水平高表达[OR=0.320(95%CI 0.158~0.658)]是结核性胸膜炎发生的保护因素(P<0.05);预后不良组患者胸腔积液ADA水平比预后良好组高,胸腔积液外泌体miR-506-3p水平比预后良好组低(P<0.05);绘制ROC曲线发现,胸腔积液ADA、外泌体miR-506-3p水平及二者联合预测结核性胸膜炎发生的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.729(95%CI 0.640~0.818)、0.810(95%CI 0.738~0.883)、0.874(95%CI 0.818~0.930),预测结核性胸膜炎患者不良预后的AUC为0.892(95%CI 0.806~0.978)、0.924(95%CI 0.868~0.981)、0.942(95%CI 0.875~1.000);Pearson相关性显示,胸腔积液ADA与外泌体miR-506-3p水平呈负相关(r=-0.335,P=0.001)。结论 结核性胸膜炎患者胸腔积液外泌体miR-506-3p呈低表达、ADA呈高表达,二者之间为负相关,且miR-506-3p联合ADA可有效预测结核性胸膜炎患者不良预后的发生。

miR-146a-5p miR-155-5p在寻常型银屑病不同体液外泌体中的表达

目的 探讨外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者血浆、唾液、尿液中的表达及意义。方法 采用超速离心法提取40例寻常型银屑病患者血浆、唾液和尿液中外泌体,利用投射电镜观察外泌体形态,并提取RNA,利用核酸测定仪检测RNA浓度,RT-qPCR检测miR-146a-5p、miR-155-5p的表达水平。结果 外泌体外形呈现圆形或椭圆形,直径均在60~200 nm;外泌体RNA在银屑病患者血浆、唾液、尿液中的浓度分别为3.9 ng/μl、61.6 ng/μl、0.57 ng/μl;外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者血浆、唾液、尿液中的表达分别为血浆(0.01±0.002)、(0.06±0.002),尿液(1.03±0.02)、(0.95±0.08),唾液(0.02±0.00)、(0.18±0.01)。结论 外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者不同体液中存在表达性差异,从微观角度研究银屑病,有利于为今后的诊断、治疗及发病机制的研究提供科研依据。

miR-192-5p及TAMs源性外泌体对人子宫内膜癌细胞裸小鼠成瘤性的影响

目的探究miR-192-5p及肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)源性外泌体对人子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞增殖及成瘤性的影响。方法采用TAMs、阴性模拟物NC转染的TAMs以及miR-192-5p转染的TAMs源性外泌体刺激子宫内膜癌细胞,并分别注入裸小鼠体内,进行肿瘤细胞移植瘤实验。然后测量各组移植瘤的体积,分别采用RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织内miR-192-5p、相关激酶(IRAK1)和下游核因子-κB(NF-κB)表达情况,评估上调miR-192-5p的表达水平对EC细胞增殖及IRAK1和NF-κB表达水平的影响。结果TAMs源性外泌体促进肿瘤生长,miR-192-5p过表达可明显缩小肿瘤体积;miR-192-5p过表达抑制了肿瘤组织中IRAK1和NF-κB的表达。结论上调TAMs中的miR-192-5p的表达水平可能通过IRA K1和NF-κB信号通路抑制EC细胞的增殖及成瘤性。

过表达miR-486-5p的骨髓间充质干细胞通过外泌体来保护缺氧损伤心肌细胞

目的探讨过表达miR-486-5p小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)来源外泌体(Exo)对缺氧损伤心肌细胞的影响及机制。方法通过慢病毒转染来构建过表达miR-486-5p的小鼠BMSC。提取转染成功的BMSC所分泌的Exo,包括空载体BMSC分泌的Exo(Exo-NC)、miR-486-5p过表达BMSC分泌的Exo(Exo-miR-486)及未处理BMSC分泌的Exo(Exo-Control)。取12~18 d胎鼠原代心肌细胞,将其分为常氧培养组(Normoxia组)、缺氧培养组(Hypoxia组)、Hypoxia+Exo-NC组及Hypoxia+Exo-miR-486组,并给予不同时间的缺氧处理来模拟心肌细胞缺氧状态,检测细胞增殖状态、凋亡率,以及活性氧(ROS)、核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)和裂解的胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)的表达水平。结果Hypoxia组心肌细胞增殖能力低于Normoxia组,而凋亡率及ROS、NLRP3和cleaved caspase-1的表达水平均高于Normoxia组(P<0.05);Hypoxia+Exo-NC组心肌细胞增殖能力高于Hypoxia组,凋亡率及ROS、NLRP3和cleaved caspase-1的表达水平低于Hypoxia组(P<0.05);Hypoxia+Exo-miR-486组心肌细胞增殖能力高于Hypoxia+Exo-NC组,凋亡率及ROS、NLRP3和cleaved caspase-1表达水平低于Hypoxia+Exo-NC组(P<0.05)。结论来自miR-486-5p过表达BMSC的Exo能减少缺氧导致的ROS的产生及其引起的心肌细胞凋亡,并改善缺氧引起的心肌细胞增殖缓慢的问题。

内皮祖细胞外泌体中miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的了解内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exo)中的miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法采用荧光染色法对C57BL/6小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)进行鉴定。对从EPCs培养基中分离出的EPCs-Exo进行鉴定以及miRNA高通量测序。建立糖尿病小鼠皮肤损伤模型,随机分为5组:PBS组、EPCs-Exo组、空白组、agomiR-222-3p组、antagomiR-222-3p组。根据不同分组,连续处理14 d,观察创面愈合率,免疫荧光方法了解治疗前后创缘组织中活性氧(ROS)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31表达水平变化。结果EPCs-Exo促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。高通量测序提示miRNA-222-3p在EPCs-Exo中高度表达。创缘组织局部皮下注射miRNA-222-3p可显著促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。结论miRNA-222-3p促进糖尿病小鼠伤口愈合,在EPCs-Exo促进创面愈合过程中发挥重要作用。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。

胃癌外泌体来源的miR-151-3p诱导巨噬细胞M2型极化并促进肿瘤生长

目的 探索胃癌细胞来源的外泌体是否可以通过微小RNA-151-3p(miR-151-3p)来影响肿瘤微环境中的巨噬细胞极化。方法 采用实时定量PCR检测胃癌患者癌组织和正常组织miR-151-3p的表达,实时定量PCR检测手术后胃液中miR-151-3p水平;构建过表达miR-151-3p的胃癌细胞系,分离外泌体并进行鉴定;流式细胞术检测与携带miR-151-3p的外泌体共孵育的RAW264.7细胞上CD11b和CD163的表达;在裸鼠移植瘤模型中评价携带miR-151-3p的外泌体对肿瘤生长的影响及对肿瘤相关巨噬细胞CD86和CD163的影响。结果 与正常组织相比,胃癌患者癌组织miR-151-3p高表达,且多数患者手术后的胃液中miR-151-3p的含量较术前有所降低;所分离的过表达miR-151-3p的肿瘤细胞外泌体中miR-151-3p的含量也较未转染细胞显著升高;携带miR-151-3p的外泌体与RAW264.7细胞共孵育可以诱导其向M2型极化,同样的,裸鼠皮下移植瘤实验也显示携带miR-151-3p的外泌体可以诱导肿瘤相关巨噬细胞向M2型极化,并促进肿瘤生长。结论 胃癌外泌体来源的miR-151-3p可以诱导巨噬细胞M2型极化,促进胃癌的生长。

血清外泌体miR-21靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路诱导肺癌细胞的生长和转移的机制分析

目的探讨肺癌患者血清外泌体miR-21对肺癌细胞生长和转移的影响及机制。方法收集18例健康志愿者和20例肺癌患者的血清,提取并鉴定血清外泌体(记为Normal exo和LCA exo),qRT-PCR检测Normal exo和LCA exo中miR-21的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-21与PTEN的靶向关系,肺癌细胞A549中转染miR-NC(miR-NC组)、miR-21 mimic(miR-21组)、miR-21 mimic+PTEN质粒(miR-21+PTEN组)后,CCK8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测PTEN蛋白表达。将10μg/mL时Normal exo和LCA exo及等体积的PBS(Normal exo组、LCA exo组、PBS组)与A549细胞共孵育,检测细胞中miR-21表达,PTEN蛋白表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力。A549细胞与10μg/mL时LCA exo共孵育后转染PTEN质粒(LCA exo+PTEN组),然后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。Western blot检测PBS组、Normal exo组、LCA exo组和LCA exo+PTEN组A549细胞中磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果Normal exo和LCA exo符合外泌体的结构及生物学特征。LCA exo组中miR-21表达显著高于Normal exo组(P<0.001)。PTEN为miR-21的靶基因,与miR-NC组比较,miR-21组A549细胞PTEN表达下调(P<0.001),细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05)。与miR-21组比较,miR-21+PTEN组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05)。相比于PBS组,LCA exo组细胞PTEN表达显著下调(P<0.001),细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05),PI3K和AKT磷酸化水平显著增加(P<0.001);与LCA exo组比较,LCA exo+PTEN组A549细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),PI3K和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.001)。结论肺癌患者血清外泌体传递miR-21靶向PTEN促进肺癌细胞的生长和转移。

血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值。方法纳入2018年10月至2020年3月该院收治的早期结直肠癌患者120例为肿瘤组,结直肠良性疾病患者120例为良性组,体检健康者120例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测患者血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量。用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析miR-125a-3p、miR-192、miR-223在早期结直肠癌中的诊断价值。结果肿瘤组、良性组和对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组与良性组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为92%、92%、91%,特异度分别为92%、91%、92%。肿瘤组与对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为99%、99%、97%,特异度分别为92%、93%、94%。血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测诊断早期结直肠癌的灵敏度为95%,特异度为92%,准确度为93%。结论血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223检测可作为诊断早期结直肠癌的潜在标志物。

骨肉瘤患者血清外泌体中miR-193a和miR-21-5p表达水平及其临床意义

目的:探讨血清外泌体中miR-193a和miR-21-5p在骨肉瘤患者中的表达水平及其与骨肉瘤临床病理指标的关系和对预后的影响。方法:收集2016年1月—2021年12月于枣阳市第一人民医院就诊的112例骨肉瘤患者临床资料,另取100例健康体检者为对照组。采集受试者外周血5 mL,制备血清并分离提纯血清外泌体,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-193a和miR-21-5p的表达水平。利用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-193a和miR-21-5p在骨肉瘤组和健康对照组患者血清中的表达差异,并分析其与临床病理指标和预后的相关性。结果:与健康对照组相比,骨肉瘤患者血清外泌体miR-193a和miR-21-5p表达水平均显著升高(P<0.01)。miR-193a和miR-21-5p对骨肉瘤诊断效能的曲线下面积(AUC)分别为0.811和0.880,灵敏度分别为89.2%和90.2%,特异度分别为75.0%和84.0%。二者联合诊断的AUC为0.901,高于单一指标的诊断效能,灵敏度为92.1%,特异度为86.5%。骨肉瘤患者血清外泌体miR-193a和miR-21-5p表达升高与TNM分期、远处转移和更差的预后相关(均P<0.05)。结论:miR-193a和miR-21-5p表达水平在骨肉瘤患者血清外泌体中显著升高,且提示更差的预后。血清外泌体miR-193a和miR-21-5p有望成为骨肉瘤诊断和预后预测的生物标志物。

人脐间充质干细胞外泌体通过miR-126-3p抑制前列腺癌生长的相关研究

目的探究人脐间充质干细胞外泌体(hucMSCs exo)miR-126-3p对前列腺癌生长的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RWPE.1､LNCaP､PC-3､C4-2中miR-126-3p表达水平。C4-2细胞中转染miR-126-3p mimic､inhibitor､negative control后检测细胞的增殖水平。提取并鉴定hucMSCs exo,将hucMSCs exo与C4-2细胞共孵育后检测C4-2细胞中miR-126-3p表达水平和细胞的增殖能力,并且将hucMSCs转染miR-126-3p mimic､inhibitor､negative control后提取外泌体,将外泌体与C4-2共孵育后检测miR-126-3p表达水平及细胞的增殖能力。结果miR-126-3p低表达于LNCaP､PC-3､C4-2细胞。miR-126-3p mimic可显著抑制C4-2细胞的增殖能力。与hucMSCs exo共孵育后C4-2 miR-126-3p表达水平显著上调,细胞增殖能力下降,hucMSCs exo可传递miR-126-3p至C4-2细胞,并且外泌体miR-126-3p可显著抑制C4-2细胞的增殖能力。结论hucMSCs exo可通过递送miR-126-3p而抑制前列腺癌细胞的生长。