外泌体MicroRNA在抗病毒免疫中的功能分析

外泌体是一种细胞外囊泡,内含有多种蛋白质和细胞调节因子,参与细胞间的信息传递并调控细胞的生长和生理过程。由于外泌体的功能差异性与分泌其细胞的类型和状态密切相关,因此在细胞水平的免疫研究中,外泌体可在一定程度上反映细胞的基因表达水平。病毒个体微小、结构简单,在感染宿主细胞,完成自身复制以及逃逸宿主免疫等过程中涉及到复杂的免疫调控网络,其中外泌体作为信息交流的新兴关注点,在这一免疫调控网络中的“使者”作用值得关注。MicroRNA在细胞间信息交流中也具有重要的调控作用,作为外泌体装载的货物,被选择性的分选到外泌体后,外泌体microRNA能够更加稳定的靶向调节生物功能,参与调控病毒免疫。本文介绍了外泌体的组成、发生机制以及内容物的成分,并以其中研究范围较广,研究内容较多的外泌体miRNA为出发点,重点阐述其在病毒免疫中的双重作用,通过了解外泌体miRNA在同种病毒或不同病毒中的调控作用,对进一步解析病毒入侵宿主的机理具有重要意义。

外泌体microRNA在糖尿病性心脏病中的研究进展

外泌体微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是由外泌体介导分泌的一类非编码单链RNA,通过抑制信使RNA的翻译在转录后改变蛋白质表达。糖尿病时,基因编码区发生的改变会导致miRNA表达的变化,这些变化诱导诸如氧化应激、线粒体功能障碍、心肌细胞凋亡与焦亡、血管重塑、纤维化等一系列病理生理改变,进而参与糖尿病性心脏病的发生发展。文章就外泌体miRNA的特性,及其在糖尿病性心脏病中的作用和治疗潜力进行综述。

血浆外泌体microRNA-29c在阿尔茨海默病早期诊断价值的初步研究

目的初步探讨血浆外泌体内microRNA-29c(miR-29c)在阿尔茨海默病(AD)早期诊断种的价值。方法明确血浆外泌体内miR-29c提取和检测过程的稳定性;检测202例轻度认知障碍(MCI)和痴呆期(DAT)AD患者及120例表面健康受试者的血浆外泌体内miR-29c,建立其生物参考区间,确定截断值,比较其诊断效能。结果对照组、帕金森患者、血管性痴呆患者、MCI和DAT患者miR-29c的回收率均在95%-105%之间,且各组受试者间的回收率无统计学差异(P>0.05);MCI和DAT患者血浆外泌体内miR-29c均显著低于对照组、帕金森患者和血管性痴呆患者(P<0.05),且DAT患者显著低于MCI患者(P<0.05);对照组、帕金森患者和血管性痴呆患者血浆外泌体内miR-29c水平无显著性差异(P>0.05);使用截断值诊断MCI和DAT的灵敏度高于生物参考区间法(P>0.05)。结论外泌体内miR-29c可作为AD诊断,特别是早期诊断的候选生物标志物,且应使用其截断值而不是生物参考区间对AD进行早期诊断。

心力衰竭患者血浆外泌体microRNA检测及其功能分析

目的明确心力衰竭(心衰)患者血浆外泌体microRNA(miRNA)表达谱的差别,寻找其在心衰早期诊断和预后评估中的价值。方法应用外泌体提取试剂盒抽提10例心衰患者及10例非心衰对照者外周血浆外泌体,对血浆外泌体miRNA进行高通量测序,初步筛选差异表达miRNA,并通过实时荧光定量PCR方法验证,分析差异表达miRNA的功能及其与NT-proBNP的相关性。结果 miRNA高通量测序共筛选出24条显著差异表达的血浆外泌体miRNA。其中14条miRNA表达显著上调,10条miRNA表达明显下调。定量PCR验证和高通量测序筛选结果一致。差异表达miRNA的功能涉及炎性反应、细胞凋亡、增值、自噬等。相关性分析提示miR-122-5p与NT-proBNP具有相关性(r=0.537,P=0.015)。结论血浆外泌体来源miRNA可能成为潜在的辅助诊断心力衰竭和评估预后的一类新型生物标志物。

芯片技术分析卵巢子宫内膜异位症外泌体microRNA表达差异

目的:探讨卵巢子宫内膜异位症(ovarian endometriosis,OEM)外泌体微小RNA(microRNA,miRNA)的表达谱。方法:采用芯片技术对3例OEM患者及3例健康对照者的在位内膜间质细胞外泌体miRNA进行分析,筛选出组间差异miRNA。结果:获得存在差异表达miRNA共12条,其中hsa-miR-6829-5p、hsa-miR-5188、hsa-miR-4430、hsa-miR-584-5p、hsa-miR-4485-5p、hsa-miR-4257在实验组表达上调,hsa-miR-188-5p、hsa-miR-4741、hsa-miR-4516、hsa-miR-1229-5p、hsa-miR-7150、hsamiR-5787表达下调。对表达差异较大的外泌体miRNA进行靶基因预测及其基因功能(gene ontology,GO)分析和信号通路(pathway)分析,发现靶基因聚集的生物学功能多数参与生物进展过程的调控。结论:OEM患者与健康对照者的在位内膜间质细胞外泌体miRNA存在着差异性表达。差异性表达的miRNA特异性很高,对进一步阐明该疾病的发病机制和寻找新的诊断标记物具有重要意义。

固肺消积饮上调外泌体microRNA-186-5p表达抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的:研究外泌体途径在固肺消积饮抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭中的作用,及microRNA-186-5p(miR-186-5p)在其中的作用机制。方法:制备固肺消积饮含药血清和无药血清,分别诱导A549细胞、转染miR-186-5p NC的A549细胞、转染miR-186-5p inhibitor的A549细胞,获得4种外泌体,即NC-Exo、XJD-Exo、XJD-miR-186-5p NC-Exo、XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo。透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测CD63、TSG101和Calnexin表达;荧光标记法检测A549细胞摄取外泌体情况;RT-qPCR检测外泌体中miR-186-5p表达。实验分为:A组(A549细胞+PBS)、B组(A549细胞+NC-Exo)、C组(A549细胞+XJD-Exo)、D组(A549细胞+XJD-miR-186-5p NC-Exo)、E组(A549细胞+XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo)。Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白表达。结果:外泌体呈典型囊泡状,高表达表面标志物CD63和TSG101,低表达Calnexin,荧光标记的外泌体可被A549细胞大量摄取至胞浆内。NC-Exo、XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo细胞miR-186-5p表达低于XJD-Exo、XJD-miR-186-5p NC-Exo细胞(P<0.05)。A、C、D组迁移、侵袭能力低于B、E组(P<0.05)。A、C、D组E-cadherin表达高于B、E组,N-cadherin、vimentin表达低于B、E组(P<0.05)。结论:固肺消积饮可通过上调外泌体miR-186-5p表达抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭。

血清外泌体microRNAs单一及组合panel对结直肠癌的诊断价值

目的 检测血清外泌体miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31在结直肠癌患者中的表达水平,并评估其对结直肠癌的诊断价值。方法 选取2018年3月至2022年5月本院收治的123例直肠癌患者(结直肠癌组)及117例大肠腺瘤患者作为研究对象(结直肠癌组),并纳入150例健康对照者作为对照(健康对照组)。提取血清外泌体中miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31,qRT-PCR比较4种miRNA在各组中表达水平差异。受试者工作特征(ROC)曲线评价4种miRNA单一及组合panel对结直肠癌的诊断价值。结果 结直肠癌组血清miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31水平高于健康对照组(P <0.05),且miR-15b、miR-21和miR-31水平高于结直肠腺瘤组(P <0.05)。Ⅲ-Ⅳ期、伴淋巴结浸润、低分化程度结直肠癌组患者血清miR-15b、miR-21和miR-31水平分别高于Ⅰ-Ⅱ期、不伴淋巴结浸润、中-高分化程度患者,miR-15b、miR-21和miR-31水平与临床TNM分期、伴淋巴结浸润呈正相关,与分化程度呈负相关。4种miRNA中诊断价值最高的指标是miR-15b,其敏感度和特异度分别为81.33%和91.80%(P <0.05);且miR-15b、miR-21和miR-31的组合panel具有更好的诊断价值,其敏感度和特异度分别为95.06%和94.44%(P <0.05)。结论 miR-15b、miR-16、miR-21和miR-31在结直肠癌患者外周血血清中异常表达,miR-15b、miR-21和miR-31水平与结直肠癌的发病及进展密切相关,且miR-15b、miR-21和miR-31组合panel具有作为结直肠癌的新型诊断模型的潜力。

外泌体microRNAs在恶性血液系统疾病中的研究进展

外泌体（exosome）是一类脂质双分子层结构的封闭性膜性囊泡，直径约为30~150nm，外泌体的形成最初是由于细胞内吞，细胞膜内化产生核内体，随后在核内体膜的入鞘部分形成许多小囊泡，这样的核内体称之为多泡体，最后多泡体与细胞膜融合，并释放核内体小囊泡到细胞外间隙成为外泌体。

特发性肺纤维化患者血清外泌体microRNA表达谱的变化及临床意义

目的探讨特发性肺纤维化(IPF)患者血清外泌体microRNA表达谱的变化及其临床意义。方法选择2019年1月至2021年1月就诊于新乡医学院第一附属医院的24例初诊IPF患者作为IPF组,另选择24名年龄、性别与IPF组匹配的健康体检者为对照组。应用肺功能检测仪检测2组受试者肺总量(TLC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%pred)、一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO%pred)等肺功能指标。分离提取2组受试者血清外泌体进行microRNA高通量测序。分析IPF患者外泌体microRNA表达谱变化及其与肺功能的相关性。结果IPF组患者的TLC、FEV_(1)%pred、DLCO%pred均显著低于对照组(P<0.05)。2组受试者间共有168种差异表达的microRNA,其中3种microRNA(miR-1-3p、miR-99a-5p、miR-411-5p)涉及磷脂酰肌醇激酶/丝氨酸/苏氨酸激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路且与IPF患者DLCO%pred呈正相关(r=0.575、0.617、0.825,P<0.05)。结论IPF患者血清外泌体microRNA表达谱与健康人群相比发生变化,异常表达的外泌体microRNA可能通过活化PI3K/Akt/mTOR信号通路参与IPF的发生。

外泌体microRNAs在阿尔茨海默病中的潜在诊断价值

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)作为一类复杂的神经退行性疾病,其临床潜伏期长发病治愈率低等特点使得该病的早期诊断具有重要意义。脑脊液和外周血理化分析等手段可以对具有指示神经功能受损情况作用的生物标记物进行评估以用于AD的早期临床诊断。神经细胞分泌的外泌体中含有与其细胞功能改变密切相关的蛋白质和核酸,在疾病的早期临床诊断中具有潜在价值。本文总结了AD患者脑内外泌体microRNAs的研究进展,探讨外泌体microRNAs是否可作为AD早期生物诊断标志物。

外泌体microRNA的生物学特征及在肝纤维化发生发展中的作用

外泌体作为人体内多种细胞分泌的微型多囊泡体,存在于机体的多种体液当中,由脂质双层膜结构来保护其内含物的结构与功能稳定,携有大量microRNA(miRNA)、mRNA等活性物质。研究表明外泌体及内含物miRNA与肝纤维化的发生进展密切相关,其通过对肝星状细胞(HSC)的作用,改变HSC活化、增殖、凋亡、漂移等来调节肝纤维化的发生发展过程。通过对外泌体miRNA的生物学特点以及与肝纤维化关系的阐述,分析了其在肝纤维化发生发展、诊治及预后评估中的重要作用,指出外泌体miRNA可能成为肝纤维化诊治与预后评估的潜在新靶点。

尿外泌体microRNA与肾脏疾病相关性的研究进展

微小RNA(miRNA)是真核动物的一类内源性有调控作用的非编码RNA。miRNA通过阻断蛋白翻译或诱导mRNA的降解来抑制靶基因的表达,具有调节生理和病理过程的潜力。miRNA以稳定的形式存在于血浆、血清和体液中。在体液中miRNA以外泌体包裹的形式存在。尿液miRNA在肾脏疾病的改变或许可以成为新的疾病诊断生物标志物。本文对尿液外泌体miRNA与肾脏疾病的相关性研究进展作一综述。

肿瘤细胞外泌体microRNA调控血管生成机制的研究进展

外泌体在促进肿瘤细胞生长和转移的过程中发挥着非常重要的作用。肿瘤细胞分泌的外泌体包含了来自肿瘤细胞的信息,其中包括蛋白质、脂类以及微小RNA(microRNA,miRNA)在内的核酸物质等。在肿瘤的发生发展过程中,肿瘤细胞会将对自己有利的信息通过外泌体分泌到周围的微环境中,从而促进肿瘤细胞的生长和转移,这也是肿瘤患者高死亡率的原因之一。肿瘤细胞为了维持自身的生长和转移,需要更多的氧气和营养物质的供应,因此新生血管的生成具有重要的意义,肿瘤来源的外泌体在其中发挥着重要作用。肿瘤细胞能够通过分泌外泌体作用于血管内皮细胞,从而促进血管的新生,这对肿瘤的发生发展和转移至关重要。本文对肿瘤组织细胞所分泌的外泌体的结构与功能进行阐述,并对外泌体中的miRNA对血管生成的调控及促进肿瘤细胞转移作用的研究进展进行归纳和总结。

从病毒性肝炎到肝细胞癌:外泌体microRNA的作用

外泌体是一种纳米级的磷脂双分子层小囊泡,内含丰富而复杂的生物分子,如DNA、mRNA、microRNA(miRNA)、脂质和蛋白质。外泌体可由大多数种类细胞分泌和摄取,通过细胞间运输的方式完成信息传递。外泌体被受体细胞摄取后,释放其中所含生物活性物质,用以调节受体细胞生物过程,如促进肿瘤的生长和转移。外泌体及其内容物的变化与多种疾病有着重要联系。近年来,关于外泌体miRNA在病毒性肝炎所致肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用已经受到广泛关注,并且不同来源的外泌体miRNA在此过程中发挥的作用也有所不同。本文简要回顾了外泌体miRNA在病毒性肝炎相关HCC发生发展中的作用研究,并提出外泌体miRNA可能是针对HCC微环境的免疫治疗靶点。

重症肌无力患者血浆外泌体microRNA表达谱的初步研究

目的:分析重症肌无力患者(MG)血浆外泌体microRNA(miRNA)的表达谱,寻找诊断重症肌无力的潜在生物标志物。方法:应用深度测序联合芯片技术比较眼肌型重症肌无力(OMG)患者(4例)、全身型重症肌无力(GMG)患者(4例)与正常对照者(2例)血浆外泌体miRNA表达谱,筛选出在血浆中表达差异的外泌体源性miRNA。结果:OMG组较正常对照组显著差异表达的血浆外泌体miRNA共有4个,分别为上调的hsa-miR-3667-5p和下调的hsa-miR-3182、hsa-miR-6843-3p、hsa-miR-1273f;GMG组较正常对照组显著差异表达的miRNA共有48个,其中下调者16个,下调最显著的为hsa-miR-516a-5p,上调者32个,上调最显著的为hsa-miR-1273f。OMG组中差异表达的4个miRNA,在GMG中均有一致的差异表达,两者可能存在共同的发病机制。结论:差异表达的血浆外泌体miRNA可能在MG疾病的发生机制中起作用,并有可能作为诊断MG的生物标志物。

尿外泌体microRNAs在肾脏疾病中的研究进展

肾脏疾病的发病率和死亡率在全球范围内呈上升趋势[1]。早发现、早干预和早治疗对改善预后至关重要。但目前临床广泛应用的血清肌酐和血尿素氮等指标受到的影响因素多,且缺乏足够的灵敏性。研究表明只有当肾小球滤过率降低50%以上时,血清肌酐水平才有明显上升.

外泌体microRNAs作为心血管疾病生物标志物的研究进展

心血管疾病诊断的生物标志物主要是对已知心肌蛋白的靶向分析和对心血管疾病的诊断变得越来越重要。肌酸激酶同工酶、肌红蛋白及肌钙蛋白等生物标志物目前已被广泛应用于临床,且肌钙蛋白被认为是急性心肌梗死诊断的金标准,但对其他心血管疾病的诊断缺乏特异性。外泌体的成分和生物学内容物对细胞激活和损伤具有特异性.

肾病综合征患者尿液外泌体microRNA-146a、microRNA-200p表达与肾损伤的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患者尿液外泌体microRNA-146a(miR-146a)、microRNA-200p(miR-200p)表达与肾损伤的关系。方法选取2019年8月—2022年8月成都大学附属医院收治的106例NS患者为观察组,另选取120例同期来医院体检的健康者为对照组。根据NS患者是否发生肾损伤分为非损伤组74例和损伤组32例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象的尿液外泌体miR-146a、miR-200p表达。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-146a、miR-200p对NS患者肾损伤的诊断效能;采用Pearson法分析尿液外泌体miR-146a、miR-200p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic逐步回归模型分析影响NS患者肾损伤的相关因素。结果观察组尿液外泌体miR-146a表达高于对照组(P<0.05),miR-200p表达低于对照组(P<0.05)。非损伤组尿液外泌体miR-146a表达低于损伤组(P<0.05),miR-200p表达高于损伤组(P<0.05)。miR-146a、miR-200p诊断NS患者肾损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.873(95%CI:0.822,0.924)、0.844(95%CI:0.793,0.895),最佳截断值分别为4.08和1.99,特异性分别为67.57%和60.81%,敏感性分别为93.75%和93.75%,两者联合诊断的AUC为0.927(95%CI:0.896,0.958),特异性为85.14%,敏感性为87.50%。非损伤组与损伤组的尿蛋白量、白蛋白、肾小球滤过率、尿素氮、血肌酐、血尿酸比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,尿液外泌体miR-146a表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈正相关(r=0.402、0.447和0.613,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈负相关(r=-0.369和-0.415,均P=0.000);尿液外泌体miR-200p表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈负相关(r=-0.357、-0.405和-0.534,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈正相关(r=0.428和0.513,P=0.000)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,肾小球滤过率降低[OR=2.591(95%CI:1.687,3.980)]、血肌酐升高[OR=2.342(95%CI:1.576,3.480)]、miR-146a≥4.08[OR=3.050(95%CI:1.913,4.862)]、miR-200p≤1.99[OR=3.347(95%CI:2.083,5.378)]是NS患者肾损伤的危险因素(P<0.05)。结论尿液外泌体miR-146a、miR-200p异常表达与NS患者肾损伤有关,可作为诊断NS患者肾损伤的生物学指标,且两者联合的诊断效能更好,具有临床推广价值。

外泌体MicroRNA在动脉硬化中调控机制及中医药干预进展

外泌体是一类源于细胞内膜,大小在30~100 nm的囊泡。囊泡内包含多种蛋白质和核酸等。其在细胞之间的信息通讯中具有关键的作用。在包含的多种RNA中,MicroRNAs(miRNAs)是一类高度保守的,长度由19~25个核苷酸组成的微小内源性非编码RNA。它可通过靶向mRNA的3’非翻译区(3’UTR)来介导靶基因转录后的基因沉默,从而起到调节基因表达的作用。近年来的研究表明,miRNAs参与了动脉粥样硬化的形成。它们通过多靶点、多途径的特点影响体内脂肪代谢、炎症反应以及细胞的增殖、分化、凋亡和自噬,从而促进或抑制疾病的发生发展。中医学凭借多靶点、多环节的调节特点,在动脉粥样硬化的临床治疗中具有可观的疗效。中医药基于调控miRNAs表达量对动脉硬化的防治受到广泛关注。文章就miRNAs在动脉粥样硬化形成过程的机制,以及中医学干预动脉硬化的发生发展进行综述。

外泌体microRNA在血管老化及其相关性疾病中的作用

血管老化是指血管结构和功能随增龄而发生的退行性改变,其影响多种疾病的发生、进展和预后。血管内皮细胞和血管平滑肌细胞是构成血管壁的主要细胞,是血管老化的重要细胞生物学基础。近年来,外泌体微小RNA(miRNA)与血管老化的关系成为研究热点。本综述将总结外泌体miRNA在血管内皮细胞和平滑肌细胞衰老过程中的作用,同时讨论外泌体miRNA在血管老化相关性疾病中的功能。