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腺病毒载体携外源基因转染人培养静脉的实验研究 被引量:2
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作者 罗涛 张强 +2 位作者 杜世新 刁彦鹏 段志泉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期266-267,共2页
目的 :探讨经腺病毒载体介导的标记基因转染人培养大隐静脉后 ,标记基因表达的效率、转染靶细胞表达时相。方法 :从临床手术患者取得大隐静脉后 ,浸于含AdCMV/LacZ或AdCMV的病毒液中 (5× 10 9pfu) ,孵育 1h ,将静脉剪成静脉片 ,分... 目的 :探讨经腺病毒载体介导的标记基因转染人培养大隐静脉后 ,标记基因表达的效率、转染靶细胞表达时相。方法 :从临床手术患者取得大隐静脉后 ,浸于含AdCMV/LacZ或AdCMV的病毒液中 (5× 10 9pfu) ,孵育 1h ,将静脉剪成静脉片 ,分别培养 2 ,7,14d。对转基因静脉片进行组织学检查。结果 :腺病毒载体可有效地将标记基因 (LacZ基因 )转入培养大隐静脉。转染后 2d内皮细胞和外膜细胞即有表达 ,β 半乳糖苷酶组织化学染色可见胞核蓝染阳性细胞 ,7d时表达最高 ,持续表达到第 14d。对照大隐静脉无β 半乳糖苷酶表达。 结论 :腺病毒载体能高效转染人大隐静脉 ,其靶细胞以内皮细胞为主 ,外源性基因的表达至少维持 展开更多
关键词 腺病毒载体 外源基因转染 实验研究 基因治疗 移植静脉 血管内膜增生
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阳离子脂质体介导的外源基因转染小鼠脾细胞的方法学探讨
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作者 何承伟 梁念慈 +3 位作者 朱振宇 何晓顺 黄洁夫 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期87-89,93,共4页
【目的】探讨高效阳离子脂质体介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的方法。【方法】用新型阳离子脂质体DOSPER包裹携带lacZ报告基因的质粒 pCAGGS lacZ按 3种方法转染小鼠脾细胞 ,①常规方法直接转染 ;②脾细胞经刀豆球蛋白A(ConA)... 【目的】探讨高效阳离子脂质体介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的方法。【方法】用新型阳离子脂质体DOSPER包裹携带lacZ报告基因的质粒 pCAGGS lacZ按 3种方法转染小鼠脾细胞 ,①常规方法直接转染 ;②脾细胞经刀豆球蛋白A(ConA)活化后再按常规方法转染 ;③用黏附辅助脂质体法 (adhesion assistedlipofection ,AAL)转染脾细胞。转染效率用X gal染色法测定。【结果】上述 3种方法的转染效率依次为 <0 0 10 ,0 0 5 7及 0 199,经方差分析 ,3种方法转染效率的差异有显著性 (P <0 0 1,n =3)。【结论】AAL法介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的转染效率最高。 展开更多
关键词 细胞学 脂质体 遗传学 阳离子 外源基因转染 小鼠 脾细胞
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脂质体介导外源基因体外转染牛胎儿成纤维细胞条件的优化 被引量:23
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作者 李扬 吴凯峰 +2 位作者 郭旭东 郭继彤 旭日干 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期653-655,共3页
通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(... 通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。 展开更多
关键词 脂质体介导 外源基因体外 牛胎儿成纤维细胞 优化 绿色荧光蛋白 条件
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低氧对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响 被引量:1
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作者 石雪峰 王立生 格日力 《中国医药生物技术》 2016年第3期259-262,共4页
近年来,大量研究表明骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)是一群具有多向分化潜能、低免疫原性的多能干细胞,在一定的诱导条件下能最终分化成心肌、骨、软骨、神经等多种组织,易于在体外分离培养,... 近年来,大量研究表明骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)是一群具有多向分化潜能、低免疫原性的多能干细胞,在一定的诱导条件下能最终分化成心肌、骨、软骨、神经等多种组织,易于在体外分离培养,并易于为外源基因转染和表达。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞生物学特性 多向分化潜能 低氧 体外分离培养 外源基因转染 cells 多能干细胞
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腺病毒-BMP7载体的包装与纯化
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作者 刘德莉 《组织工程与重建外科杂志》 2007年第4期226-227,共2页
腺病毒(Adeno)基因组为线状双链DNA,长度大约36kb.适合于容纳较大片段外源基因。与逆转录病毒载体相比,腺病毒载体能有效地将外源基因转染到各种靶细胞中。其宿主范围广,感染性强,尤其能感染分化后的非分裂期细胞。在Adeno生活... 腺病毒(Adeno)基因组为线状双链DNA,长度大约36kb.适合于容纳较大片段外源基因。与逆转录病毒载体相比,腺病毒载体能有效地将外源基因转染到各种靶细胞中。其宿主范围广,感染性强,尤其能感染分化后的非分裂期细胞。在Adeno生活周期中,其基因不整合到宿主细胞DNA中,故无插入突变激活癌基因的危险,外源基因能游离地表达。商品化的腺病毒载体一般剔除了其基因组的E1区,经体外重组后,产生可复制缺陷型腺病毒。 展开更多
关键词 录病毒载体 腺病毒载体 外源基因转染 复制缺陷型腺病毒 双链DNA 纯化 包装 宿主细胞
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绿色荧光蛋白基因标记骨髓间充质干细胞的研究进展 被引量:1
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作者 杨艳丽 李小峰 张莉芸 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期130-132,共3页
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是具有自我复制、多向分化潜能的成体干细胞。其体外分离培养易取,细胞免疫原性低,易于被外源基因转染且表达稳定,已成为组织工程、基因治疗和再生医学研究中理想的种子细胞。且近... 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是具有自我复制、多向分化潜能的成体干细胞。其体外分离培养易取,细胞免疫原性低,易于被外源基因转染且表达稳定,已成为组织工程、基因治疗和再生医学研究中理想的种子细胞。且近年研究发现MSCs具有免疫调节和组织修复作用,故其在风湿病领域的研究渐受到重视。然而.干细胞移植后在体内的迁移、定植、分布、分化等有赖于对干细胞的示踪和定量技术。因此,寻找一种稳定、高效、持续的标记分子成为MSCs的研究热点。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 绿色荧光蛋白 基因标记 多向分化潜能 体外分离培养 外源基因转染 组织修复作用 MSCS
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