外源性硫化氢对创伤失血性休克继发肺损伤的保护作用

目的:研究外源性硫化氢对创伤失血性休克大鼠模型继发性肺损伤的影响。方法:选择成年雄性SD大鼠24只,随机分为3组:假手术组(Sham组)、对照组(R组)、NaHS处理组(NaHS组)。采用创伤失血性休克模型,Sham组完成所有手术操作,但不放血和复苏,R组放血后在Ringer′s液复苏前腹腔注射与NaHS等容量的生理盐水,NaHS组在复苏前给予腹腔注射28μmol/kgNaHS。实验结束后监测动脉血气分析及肺系数与肺湿/干重比等指标变化,并通过测定血浆中H2S、肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)的变化,肺损伤组织学定量评价指标(IQA)改变来观察外源性硫化氢对创伤失血性休克大鼠模型继发肺损伤的作用。结果:与R组相比,NaHS组pH、PaO2值明显升高,BE值降低(P<0.05)。肺系数、肺湿/干重比及IQA减少(P<0.05)。血浆中H2S浓度R组明显降低(P<0.05),NaHS组与Sham组间无统计学意义(P>0.05)。与R组相比NaHS组MDA、MPO明显降低,SOD活性升高(P<0.05)。肺组织病理学形态也有明显改善。结论:外源性硫化氢对创伤失血性休克大鼠继发肺损伤具有保护作用。

超声心动图评价外源性硫化氢对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响

目的:采用超声心动图来检测外源性硫化氢(H_2S)对糖尿病大鼠心功能的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组5只。一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。治疗组腹腔注射Na HS,对照组和模型组给予等量生理盐水。12周后通过超声心动图进行检测。结果:与模型组比较,治疗组的收缩期室间隔厚度(IVSd)、舒张期室间隔厚度(IVSs)、收缩期左室内径(LVIDs)和舒张期左室后壁厚度(LVPWd)明显降低(P<0.01),收缩期左室后壁厚度(LVPWs)明显降低(P<0.05),治疗组心功能指标射血分数(EF)和缩短分数(FS)明显升高(P<0.01)。结论:通过超声心动图证明,外源性H_2S能够有效减少糖尿病心肌病大鼠心肌重构,改善糖尿病心肌病大鼠心功能。

延迟给予外源性硫化氢加剧脂多糖引起的大鼠肝细胞损伤

目的:探讨延迟给予外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝细胞损伤的影响。方法:培养大鼠肝细胞系BRL细胞,用10μg/mL LPS或不同剂量的H2S供体NaHS(50、100、200μmol/L)单独或共同处理BRL细胞12 h,共同处理时LPS作用细胞1 h后再给予NaHS。锥虫蓝拒染法检测细胞存活率的变化;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标志蛋白GRP78及其凋亡相关蛋白CHOP和caspase-12蛋白表达变化。结果:与溶剂对照组相比,LPS引起BRL细胞存活率明显下降(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.01),GRP78、CHOP和caspase-12表达上调(P<0.01);与LPS组相比,延迟给予NaHS导致LPS引起的BRL细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01),GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),NaHS的效应具有量效关系;NaHS单独作用对BRL细胞无明显影响。结论:延迟给予外源性H2S可加重LPS诱导的大鼠肝细胞损伤,机制与上调ERS有关。

外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的观察外源性硫化氢(H2S)对嗜铬细胞瘤细胞(PC12)β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)表达的影响,并探讨可能涉及的细胞信号机制。方法用不同浓度的硫氢化钠(NaHS)处理体外培养的PC12细胞,利用RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1mRNA及蛋白表达;继以LY294002和PD98059分别阻断磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Ak)t及丝裂酶原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2(MAPK/ERK1/2)通路,Western blot法检测其对NaHS诱导的通路下游蛋白Akt1和ERK1/2磷酸化的影响及其对BACE1蛋白表达变化的调节;ELISA法检测细胞培养液中Aβ42水平的变化。结果 NaHS在实验浓度范围内呈剂量依赖性下调BACE1mRNA及蛋白表达,200μmol/L时最明显,各NaHS组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);LY294002抑制NaHS诱导的Akt1蛋白磷酸化,削弱NaHS对BACE1蛋白的下调作用,其表达在LY294002预处理组与NaHS200μmol/L组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);而PD98059虽能抑制NaHS导致的ERK1/2蛋白磷酸化,但对其调节BACE1蛋白表达无影响,PD98059预处理组与NaHS200μmol/L组相比,差异无统计学意义(P>0.05);不同处理条件下的Aβ42表达与BACE1变化趋势基本一致。结论外源性H2S下调PC12细胞BACE1表达,其机制可能与PI3-K/Akt信号通路的激活有关,而与MAPK/ERK1/2通路无关。

外源性硫化氢对大鼠深Ⅱ°烧伤创面巨噬细胞数量和微血管数量的影响

目的初步研究外源性硫化氢对大鼠深II°烧伤创面巨噬细胞含量和微血管形成的影响,探讨其在大鼠烧伤创面愈合中的相关作用。方法将大鼠分为正常对照组、烧伤组、H2S干预组、PAG干预组。烧伤及干预组制成5%TBSA深II°烫伤模型。H2S干预组腹腔注射硫氢化钠(NaHS,H2S供体)56μmol·(Kg·d)-1、PAG干预组腹腔注射DL-炔丙基甘氨酸(PAG,H2S合成酶抑制剂)45 mg·(kg·d)-1,分别于伤后1、4、7、14、21、28 d切取创面皮肤组织。用免疫组织化学法检测创面巨噬细胞数量和微血管数量;对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果 (1)伤后烧伤各组创面巨噬细胞数量持续增多,伤后21 d开始下降。各时相点烧伤各组间比较,在伤后4、14、21、28 d时,F值分别为107.50、195.65、16.21、4.25,P<0.05或P<0.01;与单纯烧伤组比较,H2S干预组各个时相点创面浸润巨噬细胞数量均减少,伤后4、14、21 d时,两组比较有统计学意义(P<0.05);与单纯烧伤组比较,除伤后第1 d外,PAG干预组其余各个时相点巨噬细胞浸润数量均增多,伤后4 d和14 d组比较有统计学意义(P<0.05)。(2)伤后烧伤各组创面MVD持续增多,伤后14 d开始下降。各时相点烧伤各组间比较,在伤后7、14 d时F值分别为94.32、72.15,P<0.01;与单纯烧伤组比较,在伤后1、4、7 d和14 d时,H2S干预组创面微血管数较单纯烧伤组数量多,伤后7 d和14 d组比较有统计学意义(P<0.05)。与单纯烧伤组比较,在伤后4、7和14 d PAG干预组创面微血管数较单纯烧伤组数量少,伤后7 d时,两组比较有统计学意义(P<0.05)。结论外源性硫化氢对大鼠深II°烧伤创面巨噬细胞含量和微血管的形成存在影响,其可能通过降低创面巨噬细胞数量和促进血管形成参与创面愈合。

外源性硫化氢对颅脑创伤后应激障碍模型大鼠的神经保护作用及其对NF-κB/IκB调节机制研究

目的研究外源性硫化氢对颅脑创伤后应激障碍模型大鼠的神经保护作用及其对核因子Kappa B/抑制蛋白(NF-κB/IκB)调节机制。方法60只雄性SD大鼠简单随机化法分为对照组、模型组、低/中/高剂量硫化氢组,每组各12只。对照组常规管理,模型组构建PTSD动物模型。低剂量硫化氢组以幽闭电击法建立PTSD模型,电击前20 min给予1.68 mg/kg硫氢化钠(NaHS)腹腔注射处理;中剂量硫化氢组以幽闭电击法建立PTSD模型,电击前20 min给予3.20 mg/kg NaHS腹腔注射处理;高剂量硫化氢组以幽闭电击法建立PTSD模型,电击前20 min给予6.40 mg/kg NaHS腹腔注射处理。比较各组Morris水迷宫(MWM)评分、大鼠神经损伤严重缺损评分标准(NSS)评分、海马区细胞凋亡灰度值、NF-κB/IκB通路p65、pIκBα/IκBα表达情况,并观察各组海马区细胞形态学特征。结果模型组逃避潜伏期、NSS评分高于对照组,穿越平台位置次数、在原平台所在象限的时间占比低于对照组(P<0.05);硫化氢组以上指标改善显著(P<0.05);高剂量硫化氢组与对照组逃避潜伏期、穿越平台位置次数、在原平台所在象限的时间占比、NSS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);模型组海马区细胞凋亡灰度值高于其他各组(P<0.05);硫化氢组灰度值改善显著(P<0.05)。模型组p65、pIκBα/IκBα高于对照组(P<0.05),硫化氢组改善明显(P<0.05)。结论外源性硫化氢对颅脑创伤后应激障碍模型大鼠具有神经保护作用,可减少海马区细胞的凋亡,抑制NF-κB/IκB通路表达,并呈现出剂量依赖性,NF-κB/IκB丰富生理功能为PTSD多靶点治疗提供了新思路。

外源性H_2S供体GYY4137对骨质疏松大鼠OPG和RANKL表达的影响

目的:观察H2S供体GYY4137对骨质疏松大鼠的防治作用及机制。方法:选取6月龄的SPF级健康雌性SD大鼠随机分成5组,每组8只,假手术组(SHAM组)、模型对照组(OVX组)、GYY4137低、中、高剂量组。假手术组大鼠行双侧卵巢探查术,其他大鼠行双侧卵巢摘除术以建立骨质疏松模型。随后GYY4137低、中、高剂量组大鼠分别给予10 mg·kg^(-1),30 mg·kg^(-1)和50 mg·kg^(-1) GYY4137。12周后测定血清中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的含量。Western blot和实时定量聚合酶链式反应(PCR)检骨组织中护骨素(OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达。结果:OVX组大鼠血清中ALP、OC含量明显低于假手术组,而TRACP有所升高(P <0.05)。经GYY4137处理后,ALP和OC增高,TRACP降低;OVX组中OPG mRNA和蛋白表达水平降低,GYY4137处理后,其水平有所增高(P <0.05);而RANKL mRNA和蛋白表达水平增高,但GYY4137处理可降低其表达水平(P <0.05)。结论:GYY4137可以改善骨转换标志物水平,其机制与影响RANKL表达、增加OPG/RANKL的比值有关。

外源性H_2 S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP/Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白/β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H_2S供体,实验设空白对照组、NaHS 50 μmol/L组、NaHS 100μmol/L组和NaHS 200 μmol/L组,按分组浓度处理PC12细胞24 h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,ELISA法检测细胞培养液中Aβ40和Aβ42水平。结果 NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Aβ40和Aβ42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义(P<0.05),而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性(P>0.05)。结论外源性H_2S具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP/Aβ代谢的作用。

H2S气体吸入对骨骼肌缺血再灌注大鼠肝损伤的影响

【摘要】目的观察大鼠骨骼肌缺血再灌注过程中肝脏功能的变化及外源性H。S吸人对其产生的影响。方法雄性Wistar大鼠69只，应用结扎止血带法复制大鼠双下肢缺血再灌注模型，随机分为10组。①c组（正常对照组，n=8）；②12组（缺血2h组，n=4）；③14组（缺血4h组，n=8）；@IR0．5组（缺血再灌注0．5h组，n=8）；⑤IR2组（缺血再灌注2h组，n=8）；@IR4组（缺血再灌注4h组，n=8）；（7）IR6组（缺血再灌注6h组，n=8）；（8）IR12组（缺血再灌注12h组，n=4）；（9）IR24组（缺血再灌注24h组，n=6）；⑩H2S吸入组（大鼠肢体缺血4h后，再灌注时给予含80ppmH2S的合成空气持续吸入4hn=7）。观察各组大鼠血浆GPT、GOT、H2S水平的变化。结果与正常对照组比较，缺血4h组血浆GPT、GOT水平开始上升，P〈0．05，再灌注后继续上升并于4—6h达峰值，明显高于缺血4h组P〈0．05。给予外源性H2S吸入后血浆H2S含量明显升高，P〈0．05，同时血浆GPT、GOT含量明显降低，P〈O．05。结论骨骼肌缺血再灌注可导致肝功能损伤，外源性H2S吸入对其具有保护作用。

H_2S对噻环乙胺全麻大鼠血流动力学的影响

动态观察外源性H_2S对噻环乙胺全麻大鼠血流动力学的影响。选取SD大鼠32只,随机分为H_2S预先干预麻醉组、单纯麻醉组。预先干预麻醉组在噻环乙胺麻醉前30 min腹腔注射NaHS的剂量为14μmol/kg体重。单纯麻醉组在麻醉前30 min腹腔注射与NaHS等量的生理盐水。之后麻醉分离右股动脉,插管测量不同时间点SAP、DAP、MAP、HR。结果表明,在噻环乙胺麻醉前给予14μmol/kg体重NaHS,可显著地降低HR和血压的上升幅度,使血流动力学指标在麻醉过程中趋于平稳,提高了噻环乙胺麻醉安全性。