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实时荧光定量PCR法检测外源性DNA在重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中的残留 被引量:1
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作者 梁凯歌 孙丹丹 《中国医药生物技术》 2023年第1期30-34,共5页
目的对实时荧光定量PCR(qPCR)法检测重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中的外源性DNA残留量进行探究和分析,确定该方法用于DNA质量控制的可行性。方法采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)提取DNA,利用E.coli残留DNA检测试剂盒(P... 目的对实时荧光定量PCR(qPCR)法检测重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中的外源性DNA残留量进行探究和分析,确定该方法用于DNA质量控制的可行性。方法采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)提取DNA,利用E.coli残留DNA检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行扩增反应,绘制标准曲线,建立重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中外源性DNA残留量的qPCR检测方法。结果对8批重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维进行测定,外源性DNA残留量在0.03~300 pg/μl内,重复性良好,均远低于每剂10 ng,线性良好(R^(2)>0.99),回收率均在50%~150%之间。结论该方法可用于重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中外源性DNA残留量的定量测定。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维 外源性dna残留
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门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光法检测 被引量:2
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作者 吕萍 王洪明 +2 位作者 辛中帅 李晶 梁成罡 《中国医药科学》 2012年第5期36-37,共2页
目的建立门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光检测方法,用于门冬胰岛素的质量控制。方法参照《中国药典》三部附录及相关资料方法,对门冬胰岛素外源性DNA残留的荧光检测法进行研究,确定检测方法的最适条件,并对方法的线性、加样回收率、精... 目的建立门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光检测方法,用于门冬胰岛素的质量控制。方法参照《中国药典》三部附录及相关资料方法,对门冬胰岛素外源性DNA残留的荧光检测法进行研究,确定检测方法的最适条件,并对方法的线性、加样回收率、精密度、耐用性、重复性等方面进行方法学验证。结果建立了门冬胰岛素原料药中外源性DNA残留量的荧光检测方法,并进行了方法学验证。结论该方法操作简便、准确快捷,且无需标准宿主DNA,可用于门冬胰岛素质量标准中外源性DNA残留量的检测方法。 展开更多
关键词 荧光法 外源性dna残留 门冬胰岛素 质量控制
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重组人胰岛素外源性DNA的荧光法测定 被引量:1
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作者 辛中帅 吕萍 +1 位作者 王洪明 梁成罡 《中国医药指南》 2012年第27期440-441,共2页
目的建立重组人胰岛素外源性DNA残留量的荧光检测方法,用于重组人胰岛素的质量控制。方法参照《中国药典》三部附录及相关资料方法,对样品的处理方法、测定方法等方面研究了外源性DNA残留的荧光法检测。从标准曲线、加样回收率、精密度... 目的建立重组人胰岛素外源性DNA残留量的荧光检测方法,用于重组人胰岛素的质量控制。方法参照《中国药典》三部附录及相关资料方法,对样品的处理方法、测定方法等方面研究了外源性DNA残留的荧光法检测。从标准曲线、加样回收率、精密度、耐用性、重复性等方面进行了荧光法的方法学研究。结果建立了重组人胰岛素原料药中外源性DNA残留量的荧光检测方法,并进行了方法学验证。结论该方法具有简便、快速、重复性好等特点,可用于重组人胰岛素的外源性DNA残留量检定。 展开更多
关键词 荧光法 外源性dna残留 质量控制
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外源性线粒体DNA在细胞内的重建(简报) 被引量:3
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作者 刘芳 张兰 李林 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期243-247,共5页
近年来发现人类多种神经肌肉疾病存在线粒体电子传递链(electron transport chain,ETC)缺陷[1-7].由于线粒体在遗传上受核基因和线粒体基因双重控制,给确定ETC缺陷的来源造成困难.转线粒体DNA技术是线粒体同无线粒体DNA的细胞(ρ0cells... 近年来发现人类多种神经肌肉疾病存在线粒体电子传递链(electron transport chain,ETC)缺陷[1-7].由于线粒体在遗传上受核基因和线粒体基因双重控制,给确定ETC缺陷的来源造成困难.转线粒体DNA技术是线粒体同无线粒体DNA的细胞(ρ0cells)融合[8,9],形成转线粒体DNA细胞系(mtDNA-transferted cell line,也称cytoplasmic hy-brids,简称cybrids),使病人的线粒体DNA(mito-chondrial DNA,mtDNA)同正常人的mtDNA在完全一致的细胞背景中表达,排除细胞内其它因素的干扰,单独研究mtDNA对细胞功能的影响. 展开更多
关键词 外源线粒体dna p^0细胞 转线粒体dna细胞 MTdna 细胞功能 细胞融合
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抗DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其抗体的鉴定 被引量:2
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作者 杨婉娟 高凯 +2 位作者 饶春明 叶波平 王军志 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期182-186,共5页
目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DN... 目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 dna 单克隆抗体 外源性dna残留 鉴定
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DNA双链断裂损伤修复的随机模型研究 被引量:1
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作者 孙廷哲 崔隽 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期109-114,共6页
DNA双链断裂是一种非常严重的DNA损伤。对DNA双链断裂有效的修复对于维持基因组的稳定至关重要。对DNA双链断裂修复的动力学研究一直得到了广泛的关注。然而,以往的模型研究都没有充分考虑外源性和内源性DNA损伤修复之间的关联。因此,... DNA双链断裂是一种非常严重的DNA损伤。对DNA双链断裂有效的修复对于维持基因组的稳定至关重要。对DNA双链断裂修复的动力学研究一直得到了广泛的关注。然而,以往的模型研究都没有充分考虑外源性和内源性DNA损伤修复之间的关联。因此,通过在细胞周期重启后引入自发生成的随机DNA双键断裂损伤,并设定触发细胞周期阻滞的阈值,一个精细化的Monte Carlo模型被构建并可以更好的模拟受迫状态下的损伤修复过程。细胞首先修复辐射刺激造成的DNA损伤,接着在总损伤水平低于特定阈值后产生内源性的DNA损伤并可能在某特定时间段内对两种来源损伤同时进行修复。本模型综合考虑了外源性和内源性DNA损伤修复的整合效应,为其它涵盖DNA损伤修复模块的模型研究提供了基础。 展开更多
关键词 dna双链断裂 MONTE CARLO模拟 外源性dna损伤 内源dna损伤 修复
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Changes in Physiological Properties and Respiratory Pathway of the New Lines of Wheat Introduced Exogenous DNA Under Salt Stress 被引量:6
7
作者 孔英珍 周功克 +1 位作者 崔凯荣 王亚馥 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第3期249-255,共7页
New lines of wheat ( Triticum aestivum L.) was obtained by introducing the DNA of sorghum (Sorghum vulgare Pers.) into wheat cultivar 'Longchun 13'. The changes of respiratory pathway, contents of protein, Na+... New lines of wheat ( Triticum aestivum L.) was obtained by introducing the DNA of sorghum (Sorghum vulgare Pers.) into wheat cultivar 'Longchun 13'. The changes of respiratory pathway, contents of protein, Na+ and K+ in the leaves and roots of the new lines of wheat under salt stress were determined and compared with the control cultivar, 'Longchun 13'. The decrease of the content of K+ was observed with the increase of NaCl concentrations, but the decrease was more in the control than that in the new lines, and more in roots than in leaves. Content of proline and Na+ in both two wheats lines increased greatly, but the former increased more significantly in the new lines and the latter more significantly in control both in leaves and roots. The operation of the cyanide-resistant pathway of respiration was enhanced at different degrees after salt stress and it increased much more in roots and leaves of the control plant than that in the new lines, but the cytochrome pathway of electron transport was still the main one consistently. The possible significance of these changes was discussed. 展开更多
关键词 salt stress salt-tolerant wheat respiratory pathway
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聚合酶链反应(PCR)技术在肉制品检验中的应用
8
作者 芦荣华 杨雯雯 《肉类工业》 2015年第12期38-39,共2页
聚合酶链反应技术具有极高的特异性,操作简便,快速有效,被广泛应用于食品药品检测领域。介绍聚链酶反应这种技术的原理以及这种技术在肉制品检验中的应用。方法:通过查阅大量国内外文献对聚合酶链反应的原理和在肉制品检验中的应用做一... 聚合酶链反应技术具有极高的特异性,操作简便,快速有效,被广泛应用于食品药品检测领域。介绍聚链酶反应这种技术的原理以及这种技术在肉制品检验中的应用。方法:通过查阅大量国内外文献对聚合酶链反应的原理和在肉制品检验中的应用做一综述。结论:聚合酶链反应技术是一种将特定DNA序列在体外快速扩增的技术,具有特异,高速,便捷等优点,在肉制品检验中发挥重要作用。 展开更多
关键词 聚合酶链反应技术 外源性dna 肉制品检测
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Advantages and Disadvantages of Transgenic Animal Technology with Genetic Engineering
9
作者 Mine Dosay-Akbulut 《Journal of Agricultural Science and Technology(A)》 2014年第2期177-187,共11页
Transgenic animal technology has been one of the fastest growing biotechnology areas. The exogenous genes have been introduced into the animal genome by genetic engineering, so that these genes can be inherited and ex... Transgenic animal technology has been one of the fastest growing biotechnology areas. The exogenous genes have been introduced into the animal genome by genetic engineering, so that these genes can be inherited and expressed by offspring to produce desired traits or evaluate function in elite livestock breeds. There are several methodologies for the production of transgenic animals, i.e., (1) microinjection of genes into pronuclei of fertilized ova; (2) DNA transfer by retroviruses; (3) injection of embryonic germ (EG)/embryonic stem (ES) cells previously treated with foreign DNA; (4) DNA transfer into cells and embryos with using liposomes; (5) exogenous DNA transfer while in vitro fertilization by using sperm; (6) electroporation of DNA into sperm, embryos or ova; (7) biolistics; (8) nuclear transfer (NT) with somatic cells, EG or ES cells; (9) germ line stem cell-mediated; (10) gene targeting; (! 1) gene silencing technology with RNA interference; (12) induced pluripotent stem cell; (13) zinc-finger nuclease gene targeting technology. Gene farming is one of the newest and most promising areas in modern biotechnology. Cattle, goats, sheep, pigs and rabbits are the main farm livestock species and fish is also used in transgenic technology. The question of "why make transgenic animals?" is very important. Some of the answers to this question are: (1) to obtain new knowledge; (2) to solve the genetic code; (3) to create genetic disease models; (4) to study the genetic control of physiological systems; (5) to improve animal production traits; (6) to produce new animal products. Transgenic technology is one of the main and important tools in the finding solutions to problems of growing population with their applications to different organisms, and takes more attention and interest every day. Transgenic technology creates opportunities and areas to play with organisms to fulfill the demands of people. Because of this, this paper based on mainly transgenic applications to take people's attention and exhibit its importance. 展开更多
关键词 BIOTECHNOLOGY bioreactors LIVESTOCK TRANSGENIC ANIMAL genetic engineering
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Serratia marcescens非特异性核酸内切酶的原核表达及其应用 被引量:3
10
作者 张开俊 杨莉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期667-670,共4页
目的在大肠杆菌中表达Serratia marcescens非特异性核酸内切酶(SMNE),并进行纯化、活性检测及应用。方法合成smne基因,应用PCR技术在基因的5′端引入6个组氨酸标签序列,将其插入分泌表达载体pET-20b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,I... 目的在大肠杆菌中表达Serratia marcescens非特异性核酸内切酶(SMNE),并进行纯化、活性检测及应用。方法合成smne基因,应用PCR技术在基因的5′端引入6个组氨酸标签序列,将其插入分泌表达载体pET-20b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。表达产物经镍离子螯合琼脂糖凝胶一步纯化后,检测其活性并计算比活。将纯化的SMNE用于重组腺病毒的制备,对外源性核酸进行降解,并采用Southern blot对外源性DNA残留量进行测定。结果重组表达质粒pET-20b-smne经PCR、双酶切和测序证明构建正确。重组蛋白的表达量为8.0 mg/L,纯化后纯度达95%,比活达1.1×106 U/mg。在重组腺病毒制备过程中使用后,成品中的外源性DNA残留量≤10 ng/5.0×1011 VP。结论已成功地在大肠杆菌中表达了SMNE,纯化的SMNE活性高,有望应用于重组生物制品制备过程中外源性核酸的去除。 展开更多
关键词 SERRATIA marcescens 非特异核酸内切酶 原核表达 外源性dna
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