外源性Egr—1基因对人食管癌细胞系Eca109的转染效应

目的：观察外源性Egr-1基因的导入对食管癌细胞系Eca109的生长抑制作用，探讨该基因在恶性肿瘤基因治疗中的潜在价值。方法：应用脂质体基因转染法将真核表达载体PCMV－Egr-1质粒导入Egr-1表达消失的Eca109细胞，经G418筛选培养，形成抗生克隆，用PCR扩增质粒载体中的neo基因，证明质粒PCMV－Egr-1成功地导入Eca109细胞，用Westernblot和免疫细胞化学方法证实外源性Egr-1基因在Eca109细胞中获得稳定表达。细胞生长曲线测定、软琼脂集落形成率及Scid小鼠成瘤试验，观察外生Egr-基因对该细胞的生长抑制作用。结果：外源性Egr-1基因以功地民地入Eca109细胞并获得稳定的表达，细胞生长曲线表明，转梁Egr-1基因的Eca109细胞在Scid小鼠内肿瘤生长速率平均为30．5mg/day,未转染组为65．8mg/day(P<0.05).

外源性Nurr1基因过表达对SK-N-SH细胞分化作用的研究

为研究外源性Nurr1基因过表达对转染细胞的作用,探讨Nurr1基因调控多巴胺能神经元分化的机制。本研究应用:(1)pBK- RSV -Nurr1质粒经脂质体法转染SK- N- SH细胞,G418筛选;用RT PCR和免疫细胞化学方法检测基因转染细胞Nurr1mRNA及Nurr1蛋白的表达; (2)all- trans- RA、9- cis- RA、forskolin诱导基因转染细胞,RT PCR及免疫荧光细胞化学方法检测基因转染细胞MAP2 和TH的表达。结果显示: (1)经RT -PCR检测,基因转染细胞表达Nurr1mRNA;免疫细胞化学染色结果显示基因转染细胞表达Nurr1蛋白,说明外源性Nurr1基因在转染细胞内过表达;基因转染细胞形态与正常细胞相比没有明显变化,生长速度略有降低并表达成熟神经元的特异性标识物MAP2,但不表达多巴胺能神经元的特异性标识物TH。(2)尽管RA、forskolin诱导可促进Nurr1基因转染的SK- N- SH细胞进一步向成熟神经元分化,但不能诱导基因转染细胞表达TH。结论:单纯的Nurr1过表达可以促进SK- N- SH细胞向成熟神经元方向分化,但不足以激活TH基因转录。TH基因的转录激活还需要除Nurr1以外的其它细胞(或神经元)的环境或因子的共同作用。

bFGF,bFGFR及Egr-1基因蛋白在大鼠局灶性脑缺血后的表达

观察持续性局灶性脑缺血 (permanentmiddlecerebralarteryocclusion ,pMCAO)损伤后表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的细胞种类、时相与不同细胞之间的相互影响 ,并探讨Egr 1基因蛋白对bFGF表达的影响。结果表明 :在持续性局灶性脑缺血后 ,缺血梗死灶周边区免疫组化结果显示bFGF表达出现双相增强。缺血 1h缺血边缘区主要在星形胶质细胞 (Astrocyte,As)中bFGF出现一过性增强 ,并见细胞外基质中出现bFGF点状着色。缺血 6h～ 1d时bFGF染色再次增强 ,神经元及各类胶质细胞中的表达均有增强。但是经Western blot定量测定发现脑组织bFGF含量仅在缺血后 6h～ 1d时出现增强。缺血 1h时 ,bFGF可能经缺血细胞受损的细胞膜到达细胞外 ,与细胞外硫酸肝素或相关分子结合 ,内化进入缺血边缘区细胞 ,从而造成bFGF免疫组化染色一过性增强。第二次增强可能是缺血损伤刺激及内化的bFGF诱导的蛋白合成的增加。缺血 2～ 6hbFGFR在神经元及各类胶质细胞中的表达均增强 ,主要位于缺血区的边缘。由于bFGFR表达时程早于bFGF转录合成增加 ,因此限制了内源性bFGF发挥保护缺血损伤神经元的作用 ,这使得外源应用bFGF成为必要。Egr 1基因蛋白的表达在缺血损伤后 1～ 6h增强 ,其表达增高的时相早于bFGF?

外源性p21^(WAF1/CIP1)基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的 :探讨外源性 p2 1 WAF1 /CIP1 基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响 .方法 :采用脂质体介导法将p2 1 WAF1 /CIP1 基因质粒转导入人胶质瘤细胞系SHG44细胞 ,然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察 .结果 :酶切电泳和斑点杂交显示p2 1 WAF1 /CIP1 基因成功的转染至SHG44细胞 .转染p2 1 WAF1 /CIP1 基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生 ;生长速度明显慢于亲代细胞 ,其倍增时间约是对照细胞的二倍 ;细胞周期发生明显改变 ,G1 期明显增多 ,S期明显减少 .结论 :外源性 p2 1 WAF1 /CIP1 基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用 。

外源性转化生长因子β1对口腔鳞癌细胞中相关基因表达的影响

目的 :探讨TGF β1在口腔鳞癌发生发展中的作用。 方法 :采用免疫组化法观察不同浓度的TGF β1作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系中相关基因c myc、c erbB2和TGF β1及EGFR蛋白表达 ,同时运用图象分析技术对蛋白表达的表达动态进行了相对定量分析。结果 :相同浓度的TGF β1对两细胞系作用不同 ;TGF β1可促进GNM细胞中C myc和C erbB2蛋白表达明显上调 ,对TGF β1和EGFR蛋白表达有轻微的促进作用 ;而TGF β1作用于TSCCa细胞后C myc、CerbB2、TGF β1和EGFR蛋白表达明显下调 ,并与TGF β1有剂量依赖关系。 结论 :TGF

转染外源性转化生长因子β_1基因对兔髓核细胞凋亡的影响

①目的 探讨转染转化生长因子 β1 (hTGF β1 )基因对兔髓核细胞凋亡的影响 ,为活化椎间盘细胞功能、预防椎间盘组织退变提供依据。②方法 取成年新西兰大白兔 5只 ,将外源性hTGF β1 基因直接注射于L3～ 4椎间隙 ,以注射同样剂量磷酸缓冲液的L4～ 5作为实验对照。术后 3周取出相应椎间盘组织 ,利用TUNEL免疫荧光组织化学方法观察髓核细胞凋亡情况。应用Vidas图像分析系统进行免疫阳性细胞半定量分析。③结果 注射hTGF β1 基因的椎间盘凋亡细胞数明显少于对照组 ,测得OPTDM值分别为 0 .0 0 2± 0 .0 0 1、0 .1 5 9± 0 .0 4 1 ,二者差异有显著性 (t=2 7.83,P <0 .0 1 )。④结论 转染hTGF β1

外源性p27^(KIP1)基因抑制SGC7901细胞的增殖

研究p2 7KIP1基因对胃癌细胞的细胞周期及细胞增殖的影响。采用脂质体转染法将p2 7KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SGC790 1中 ,通过免疫印迹分析以及RNA斑点杂交方法检测p2 7KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达 ;细胞活力实验及软琼脂集落形成实验显示转染p2 7KIP1基因对细胞增殖的作用 ;流式细胞仪观察目的基因对该细胞的细胞周期的影响。结果显示 ,转染p2 7KIP1的SGC790 1细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p2 7KIP1的表达 ;细胞活力检测显示在外加Zn离子 4 8h后细胞生长被抑制 4 2 % ;转染p2 7KIP1的SCG790 1细胞的集落形成率较对照组明显减少(P <0 0 1) ;p2 7KIP1的过表达能够显著地增加G1期的细胞数 ,由 33 6 8%增加到6 9 2 9% (P<0 0 1)。研究表明 ,p2 7KIP1基因可抑制SGC790 1细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖。

脂质体介导外源性基因TGF-β1治疗缺血性脑损伤的临床效果观察

目的研究脂质体介导外源性基因转化生长因子-β1(TGF-β1)治疗缺血性脑损伤的临床疗效。方法从2012年3月到2013年1月,选取治疗缺血性脑损伤的病患共78例。以数字法随机分为对照组39例,观察组39例。观察组采用脂质体介导外源性基因TGF-β1治疗,对照组则常规注射生长因子治疗。观察两组病患的脑神经功能评价和细胞凋亡数情况。结果观察组神经恢复成功率高于对照组,Bederson评分低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论脂质体介导外源性基因TGF-β1治疗缺血性脑损伤能有效地降低术后的并发症,基因的多功能可以较好地保护病患神经功能。

转RD29A:DREB1A融合基因小麦的获得及其抗旱性研究

为了提高小麦的抗旱能力,通过转基因将拟南芥RD29A:DREB1A转入到小麦品种陇春30中,成功获得三个单拷贝本底DREB1A蛋白低表达水平的纯合转基因家系,并在干旱胁迫下测定了其生理指标及产量相关农艺性状。结果表明,与陇春30相比,转基因小麦的脯氨酸和可溶性糖含量以及SOD、CAT和POD活性都显著提高,H2O2含量、MDA含量和相对导电率均显著降低,株高、穗长、穗粒数、千粒重、地上生物量显著增加,说明RD29A:DREB1A外源基因的导入能够显著增强陇春30的抗旱性。

Egr-1基因的辐射生物学效应研究进展

Egr- 1(Earlygrowthresponse - 1)基因是一系列“立即早期基因 (Immediateearlygene)”中的重要一个 ,参与细胞的多种辐射生物效应。研究表明 ,Egr- 1在多种正常细胞和肿瘤细胞受到电离辐射后的早期就能被激活 ,它的激活表达与辐照后细胞的生长、周期、凋亡等的改变密切相关。另外 ,Egr - 1基因调控序列具有辐射可诱导特性 ,这一特点使其有了潜在的临床和基因工程生产应用前景。

脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果:限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX 1基因;克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致;质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳;细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX 1基因表达。结论:成功构建了含有PDX 1基因的真核表达载体;通过优化转染条件提高了pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

CYP1A1基因多态性与动脉粥样硬化疾病相关性的研究进展

细胞色素P450（Cytochrome P450,CYP）是一含血红素的单加氧酶超家族,广泛存在于机体组织中,是外源性化学物质在体内转化第一时相最主要的代谢酶。研究显示,其亚家族成员CYP1A1参与了香烟中最重要的致癌物苯并芘B[a]P和亚硝胺的代谢激活,与吸烟诱导的肿瘤易感性增加密切相关,而Isner[1]研究发现动脉硬化与吸烟相关肿瘤的发生有相似的分子生物学机制,导致不同个体对动脉硬化及其相关疾病的易感性不同。现就CYP1A1基因多态性与吸烟相关的动脉粥样硬化疾病的易感性综述如下。

Egr-1基因的辐射生物学效应研究进展

Egr-1(earlygrowthresponse-1)基因是一系列“立即早期基因(immediateearlygene)”之一,参与细胞的多种辐射生物效应。研究表明,Egr-1在多种正常细胞和肿瘤细胞受到电离辐射后的早期就能被激活,它的激活表达与辐照后细胞的生长、周期、凋亡等的改变密切相关。另外,Egr-1基因调控序列具有辐射可诱导特性,这一特点使其具有潜在的临床和基因工程生产应用前景。

APE1/Ref-1基因结构及功能的研究进展

APEl／Ref-1（又称APEXl或Ref-1，本文统称APEl），是大肠杆菌Xth（ExoⅢ）哺乳类同源物、细胞对氧化应激主要反应因子，DNA在各种内源性或外源性物质包括化疗药物引起损伤后，APEl通过DNA碱基切除修复通路中脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶发挥重要的作用。当受损的碱基去除后，APEl主要切断脱碱基位点以利于修复功能。

细胞色素P450基因多态性与妇科肿瘤易感性

细胞色素P450(CYP)是微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族氧化酶,在生物体内分布广泛,CYP参与多种外源性化合物的代谢及内源性物质的生成。同种CYP在人群中可以表现为不同表型,这种遗传多态现象决定了CYP对特定的外来化合物及内源性物质在反应上的差异,即表现为个体对致癌物的不同易感性。就近年来CYP基因、基因多态性的研究现状及CYP1A1、CYP1B1、CYP17和CYP19的多态性与妇科肿瘤易感性的研究进展综述。

外源性人胰岛素样生长因子-1基因在关节软骨细胞中的表达

目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性,建立IGF1基因工程化的关节软骨细胞。方法利用基因重组技术,将GFPcDNA片段插入pcDNA3.1hIGF1载体中,构建重组载体pcGI。然后采用脂质体方法,转染原代关节软骨细胞,经G418筛选后,继续体外单层培养4周。原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF1的表达,荧光显微镜观察GFP的表达,Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测软骨细胞表型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞增殖能力。结果根据重组载体pcGI内的酶切位点,设计采用BamHI酶切显示为线性化,XbaI酶切显示为512bp、1768bp、5915bp三个片段,HindⅢ则酶切下3023bp、5172bp二个片段,证明所构建的质粒方向及大小正确,含有GFP和hIGF1cDNA片段。稳定转染pcGI的软骨细胞原位杂交、免疫细胞化学和荧光显微镜证实了hIGF1和GFP的表达,同时MTT显示转染后的软骨细胞增殖能力增强,并能维持Ⅱ型胶原的表达。结论外源性hIGF1和GFP基因在关节软骨细胞内获得稳定表达,体外单层培养的转染关节软骨细胞增殖能力增强,同时维持软骨细胞表型。

Egr-1基因与肿瘤腺癌放射敏感性关系的研究

目的:研究Egr-1基因在2种腺癌细胞A549和Hela放射前后的表达变化及对放射敏感性的影响。方法:培养肺腺癌A549细胞和宫颈腺癌Hela细胞,分别提取4 GyX射线照射前及照射后不同时间点的细胞的总RNA行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Egr-1表达水平;收获4 GyX射线照射前及照射后不同时间点的细胞处理行流式细胞术检测其凋亡;对照射不同剂量的细胞继续培养10-14天,进行克隆形成计数,计算克隆形成率及存活分数。结果:FQ-PCR结果显示,放射后Egr-1基因表达水平在2种细胞中均明显升高且于放射后1 h达到峰值,A549细胞的峰值明显高于Hela细胞;流式细胞术检测结果显示,A549细胞凋亡明显高于Hela细胞;克隆形成实验结果显示,A549细胞存活分数明显低于Hela细胞。结论:Egr-1基因在不同腺癌细胞表达水平不同并影响其放射敏感性。

外源性降钙素基因相关肽对脑死亡大鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响

降钙素基因相关肽（CGRP）是一种具有肺保护以及免疫调节作用等多种生物学功能的多肽，并可促进水肿液回流入血管，减轻肺水肿程度。本实验旨在观察外源性CGRP对脑死亡大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP-1）表达的影响。一、资料与方法1．一般资料：60只由河南省实验动物中心提供的SPF级健康Wistar大鼠，雌雄不限，体质量250～300g。CGRP购自Sigma公司，抗AQP-1多克隆抗体购自SantaCruz公司，聚合酶链反应（PCR）引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。Trizol试剂购自Invitrogen公司，