外源性p16基因稳定转染对喉癌细胞周期和增殖的影响

目的 :探索p16基因在喉癌细胞内的表达作用及基因治疗方面的应用前景 .方法 :采用亚克隆技术 ,构建p16真核表达载体 pCDNA3 p16 .利用lipofectamine介导 ,将外源野生型 p16基因导入喉癌细胞系Hep 2 ,筛选阳性克隆 ,采用打点杂交技术、免疫荧光、免疫组化、图像分析法观察和分析p16基因的表达 .同时以空载体质粒pCDNA3为对照 ,用流式细胞仪分析瘤细胞生长周期、荧光染色检测细胞凋亡 .结果 :打点杂交、免疫荧光、免疫组化及图像分析法分析证实转染p16基因的Hep 2细胞有外源p16基因的表达 ,外源基因p16在Hep 2细胞系中的表达能抑制Hep 2细胞系的生长 .流式细胞仪计数和免疫荧光检测证实p16能诱导喉癌细胞系Hep 2发生凋亡并导致其发生G1期阻滞 .结论

腺病毒介导外源性p16基因对人膀胱癌细胞系RT112的作用

目的 通过包装腺病毒介导外源性 p16基因 ,导入内源 p16基因缺失的膀胱癌细胞系 RT112 ,观察对膀胱癌细胞的生长抑制作用 ,并探讨其作用机制 .方法 构建 p16腺病毒表达载体 ,通过 2 93细胞包装 ,产生假病毒 ;应用打点杂交技术及免疫细胞化学检测外源 p16基因的表达 ;流式细胞仪检测细胞周期 ;透射电镜观察细胞凋亡情况 .结果 p16基因克隆入腺病毒载体中 ,并经包装后产生腺病毒 .感染外源性 p16基因的肿瘤细胞生长速率明显下降 ,出现 G1期阻滞 ,并使部分细胞出现凋亡 .结论 外源性 p16基因重表达可抑制膀胱肿瘤细胞的恶性生长 .

稳定表达外源性p16基因肺癌A549细胞株的建立及鉴定

为构建稳定表达外源性抑癌基因 p16的肺癌 A5 49细胞株 ,用脂质体介导的基因转染方法 ,借助真核质粒表达载体 (pc DNA 3) ,将抑癌基因 p16转移入此基因缺失的人肺癌细胞株 A5 49细胞中 ,经 G418筛选 ,获得稳定表达的细胞克隆 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及免疫组织化学鉴定 p16基因的表达 ,同时对克隆细胞分泌蛋白进行活性检测。结果显示转染 p16基因的 A5 49细胞中可以检测到 p16 m RNA及蛋白的表达 ,说明建立的 p16真核表达载体能在肺肿瘤细胞中分泌表达蛋白 ,表达 P16抑癌蛋白的 A5 49细胞株的建立有助于研究抑癌基因

外源性P16基因导入对人膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 :将外源性P16基因导入该基因纯合性缺失的人膀胱癌细胞系 ,观察对肿瘤细胞增殖活性及凋亡的影响。方法 :构建P16逆转录病毒表达载体 ,转染膀胱癌细胞系 ;应用Northern杂交及免疫细胞化学检测外源性P16基因的表达 ;流式细胞仪检测细胞周期 ;原位细胞凋亡检测及透射电镜观察细胞凋亡。结果 :转染外源P16基因的肿瘤细胞生长速率明显降低 ,Ki6 7标记指数下降 ,大多数细胞被抑制在G0 和G1期 ,同时发现凋亡细胞的存在。结论 :外源性P16基因导入不仅抑制膀胱癌细胞的增殖 ,且可诱导其凋亡。

转染外源性p16基因对大鼠恶性胶质瘤的生长抑制作用

探讨p16基因在体内对恶性胶质瘤的生长抑制作用。将外源性p16基因导入C6细胞内 ,应用立体定向技术将C6细胞种植于SD大鼠颅内尾状核头部 ,用核磁共振 (MR)扫描技术 ,动态观察颅内肿瘤生长情况。并通过免疫组化、原位杂交和细胞凋亡检测肿瘤细胞的增殖活性。结果显示 ,转染组和治疗组大鼠生存期较对照组明显延长。治疗组肿瘤随时间的延长逐渐缩小。免疫组化显示转染组和治疗组p16蛋白表达明显增强。原位杂交和细胞凋亡检测表明 ,转染组和治疗组大鼠肿瘤细胞增殖活性降低。本实验表明 ,p16基因在体内有抑制恶性胶质瘤生长的作用 ;瘤体内注入p16cDNA质粒 脂质体复合物 ,可使肿瘤生长受到明显抑制 。

外源性p16基因对人肺癌细胞生物学特性的影响

目的 研究外源性p1 6基因对肺癌细胞生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导的基因转染方法将外源性p1 6基因转入p1 6基因缺陷的人肺腺癌细胞株A54 9中 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组化的方法检测p1 6基因的表达 ,同时观察转染后细胞恶性生长的变化。结果 外源性p1 6基因在A54 9细胞中能稳定表达 ,转染后A54 9细胞生长速度明显减慢 ,在软琼脂上形成克隆的能力降低。流式细胞仪检测显示A54 9细胞G1期阻滞并发生了凋亡 ,接种裸鼠后致瘤性降低 ,肿瘤生长明显减慢。结论 外源性p1 6基因导入人肺癌细胞株A54 9中可稳定表达并抑制细胞的恶性生长 ,同时诱导凋亡。

转染外源性p16基因对恶性胶质瘤生长抑制作用的动物体内实验研究

目的 :探讨p16基因在体内对恶性胶质瘤的生长抑制作用。方法 :将外源性p16基因导入C6 细胞内 ,应用立体定向技术将C6细胞种植于SD大鼠尾状核头部 ,用核磁共振 (MR)扫描技术 ,动态观察颅内肿瘤生长情况。并通过免疫组化、原位杂交和细胞凋亡检测肿瘤细胞的增殖活性。结果 :转染组和治疗组大鼠生存期较对照组明显延长。治疗组肿瘤随时间的延长逐渐缩小。免疫组化显示转染组和治疗组P16蛋白表达明显增强。原位杂交和细胞凋亡检测表明 ,转染组和治疗组大鼠肿瘤细胞增殖活性降低。结论 :p16基因在体内有抑制恶性胶质瘤生长的作用 ;瘤体内注入p16cDNA质粒 脂质体复合物 ,可使肿瘤生长受到明显抑制 。