外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响

目的 :观察外源野生型PTEN基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系形态的影响。方法 :应用倒置显微镜观察法、HE染色观察、扫描电镜及透射电镜观察法 ,比较野生型PTEN抑癌基因转染的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 PTEN与对照的黏液表皮样癌细胞M 3SP2 pBp的形态学差异。 结果 :M 3SP2 pBp细胞体外生长活跃 ,细胞数量多 ,核分裂相多 ,细胞表面微绒毛丰富 ,细胞核切迹明显 ,细胞质中线粒体丰富 ;M 3SP2 PTEN细胞生长缓慢 ,分裂相很少 ,细胞数量少 ,部分细胞空泡变性 ,染色质凝集 ,细胞膜彭出 ,线粒体数量少并发生肿胀 ,较多的溶酶体融合。结论 :外源野生型PTEN基因的转染能导致体外培养的高转移性黏液表皮样癌细胞变性、坏死或凋亡。

抑癌基因PTEN和FHIT在口腔鳞癌中的表达及其与cyclin D1的相关性

目的检测抑癌基因PTEN、FHIT在正常口腔粘膜上皮和口腔鳞癌(OSCC)中的表达情况,并探讨其与cyclinD1的关系。方法采用免疫组化SP法检测62例OSCC中FHIT、PTEN、cyclinD1蛋白表达的情况,以12例正常口腔粘膜作对照。结果在正常口腔粘膜中PTEN均为强阳性表达(12/12),在OSCC中24.2%(15/62)表现为PTEN蛋白表达的缺乏或减少;而FHIT在正常口腔粘膜中也均为强阳性表达(12/12),在OSCC中17.7%(11/62)表现为FHIT蛋白表达缺乏或减少;cyclinD1在正常口腔粘膜中91.7%(11/12)表现为阴性或弱阳性表达,在OSCC中53.2%(33/62)表现为阳性或强阳性表达;PTEN与FHIT均为阳性或强阳性表达时,37.8%(28/74)cyclinD1表现为阴性或弱阳性,其中11例为正常口腔粘膜(占正常组的91.7%)。结论PTEN、FHIT在OSCC的发生过程中起着一定的作用;PTEN/FHIT的表达与cyclinD1有关,提示PTEN、FHIT能够下调cyclinD1的表达。

结直肠癌组织抑癌基因PTEN和癌基因C-myc蛋白表达及其相关性

目的:探讨抑癌基因PTEN和癌基因C-myc在结直肠癌发生、发展中的作用及其相关性。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(S-P法),检测60例结直肠癌组织、10例癌旁组织及8例正常结直肠黏膜中PTEN和C-myc蛋白表达。结果:结直肠癌组织中,C-myc蛋白表达阳性率为76.70%(46/60),显著高于正常(0)及邻近结直肠(癌旁)组织(10%),组间比较差异均有显著性(P<0.01);C-myc蛋白过度表达与结直肠癌肝转移呈正相关关系(r=5.540,P<0.05),与TNM分期无相关性(r=0.013,P>0.05);结直肠癌组织中,PTEN蛋白表达阳性率为25.00%(15/60),显著低于正常(100%)及邻近结直肠(癌旁)组织(90%)(P<0.01);PTEN蛋白表达与肿瘤分化程度呈正相关(r=0.869,P<0.05),与TNM分期、淋巴结转移和肝转移均呈负相关(r=-0.791,r=-0.741,r=-0.634,P<0.05);C-myc蛋白表达与PTEN蛋白表达水平呈负相关(r=-0.322,P<0.001)。结论:癌基因C-myc蛋白过度表达不能作为判断结直肠癌肿瘤状态的单独指标;抑癌基因PTEN蛋白的表达缺失在结直肠癌的发生、发展及转移过程中起促进作用,有望成为结直肠癌诊断和预后判断的标记物。

抑癌基因PTEN与非小细胞肺癌相关性研究进展

肺癌是当今世界严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤，也是世界范围内最常见的人类恶性肿瘤之一，发病率和死亡率呈逐年上升趋势，是发病率和死亡率最高的肿瘤之一。其中非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC）约占肺癌总数的80％-85％，主要为鳞癌和腺癌两种亚型。

抑癌基因PTEN在急性白血病发病中临床意义的探讨

目的:研究抑癌基因PTEN在恶性血液病中的表达情况,探讨其与急性白血病(AL)的相关性。方法:选取恶性血液病74例[AL35例,骨髓增生异常综合征(MDS)20例,慢性粒细胞白血病(CML)13例,骨髓增殖性疾病(MPD)6例]。另取非恶性血液病24例及正常骨髓10例作为对照。采用S-P免疫组织化学检测骨髓单个核细胞中的PTEN表达情况,同时分析PTEN与临床指标的相关性,并对疾病转归进行跟踪随访。结果:PTEN阳性表达率在对照组中非恶性血液病患者(83.33%)低于正常人(90.0%),但差异无统计学意义(P>0.05),恶性血液病AL组(57.14%)与对照组差异有显著性(P<0.05);AL-完全缓解(AL-CR)组(63.16%)与对照组差异有显著性(0.05>P>0.01),AL-初治组(55.17%)与AL-CR组无显著差异(P>0.05),MDS组难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)为53.33%,CML组为53.85%。MDS-RAEB组和CML组与对照组相比均有显著性差异(均P<0.05),但与AL-初治组相比差异无显著性(P>0.05)。PTEN低表达与外周血中白细胞计数及发病时骨髓中原始细胞比例有一定相关性(r≈0.50),与MDS-RAEB转化AL、慢性粒细胞白血病急性变(CML-AL)呈正相关性(r≈0.53)。结论:AL存在PTEN表达异常,PTEN与AL的发病可能有一定的关系,提示PTEN在AL的发病中有一定意义。

抑癌基因PTEN在非小细胞肺癌中表达及其与非小细胞肺癌的相关性

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中PTEN的表达情况,探讨PTEN与NSCLC发生发展的相关性。方法收集29例有完整临床资料的NSCLC组织及癌旁正常组织标本,应用免疫组化法检测PTEN的表达情况并进行相关性分析。结果PTEN在NSCLC组织和相应癌旁正常组织中阳性率分别为34.48%和68.97%,有统计学差异(P<0.005),PTEN表达与NSCLC分化程度呈显著相关性(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤分期与组织学分型未见统计学差异。结论PTEN水平对NSCLC患者病情发展及预后判断具重要意义。

抑癌基因PTEN在口腔涎腺腺样囊性癌组织中的表达

目的 从蛋白水平研究抑癌基因 10号染色体缺失的磷酸酯酶及张力蛋白同源物 (PTEN ) ,在口腔涎腺腺样囊性癌中表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 3 4例腺样囊性癌 (其中筛孔型 14例 ,管状型 11例 ,实体型 9例 )组织中PTEN的表达。结果 3 4例腺样囊性癌PTEN蛋白表达阴性率为 17.6% ( 6/ 3 4) ,筛孔型、管状型、实体型表达阳性率分别为 14 .3 % ( 2 /14 ) ,18.2 % ( 2 / 11)和 2 2 .2 % ( 2 / 9) ,各型之间阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 涎腺腺样囊性癌组织中存在抑癌基因PTEN表达缺失 ,PTEN在部分腺样囊性癌病变发展中起作用 。

抑癌基因PTEN在腮腺多形性腺瘤中的突变与缺失

目的探讨抑癌基因PTEN在腮腺多形性腺瘤的发生、发展过程中的作用。方法应用聚合酶链反应(PCR)及克隆、基因测序的方法来分析腮腺多形性腺瘤及正常腺体组织中PTEN基因第5、第6及第8外显子有无突变及缺失。结果通过对PTEN基因三个外显子的克隆测序,发现有2例外显子8发生突变,其中一例引起编码的氨基酸发生变化。结论初步判断,在DNA水平抑癌基因PTEN在腮腺多形性腺瘤中存在突变,在其发生发展过程中可能起到一定的作用。

抑癌基因PTEN在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义

目的检测抑癌基因PTEN在鼻腔、鼻窦内翻性乳头状瘤(Nasalinvertedpapilloms,NIP)组织的表达情况,探讨PTEN与NIP发生发展和癌变之间的关系。方法采用免疫组织化学SABC染色法观察鼻腔正常组织、NIP组织和癌变NIP组织中PTEN蛋白的表达,并分析其与增生状态、病理组织类型的关系。结果PTEN在鼻腔正常组织的表达阳性率(100%)高于NIP组织的表达阳性率(69.4%),其差异有统计学意义(P<0.05);不典型增生NIP表达阳性率(75.0%)与良性NIP表达阳性率(81.3%)之间无显著性差异(P>0.05);癌变NIP表达阳性率(37.5%)和不典型增生NIP(75.0%)、良性NIP(81.3%)相比具有极显著性差异(P<0.01)。结论抑癌基因PTEN在NIP瘤细胞增生、增殖过程作用和意义不明显;而在控制NIP瘤细胞转化恶变过程有重要作用,对其表达缺失的检测可以作为判断NIP癌变的客观生物指标。

抑癌基因PTEN依赖其磷酸酶活性诱导人膀胱癌细胞BIU-87失巢凋亡机制

目的研究抑癌基因PTEN对人膀胱癌细胞株BIU-87失巢凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法将携有野生型PTEN基因及2种突变型基因C124A-PTEN和G129E-PTEN的真核表达载体转染BIU-87细胞,利用West-ernblot法,检测PTEN蛋白表达与蛋白激酶B(PKB/Akt)、焦点黏附激酶(FAK)磷酸化水平的变化,并应用流式细胞仪技术和激光共聚焦显微镜技术,分析各种细胞在黏附与失黏附状态下的凋亡。结果与对照组相比,转染野生型PTEN的BIU-87细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平分别降低了59%(P<0.01)和89%(P<0.01),且失巢凋亡率由(8.32±0.57)%增至(37.62±2.12)%;G129E-PT/87细胞内磷酸化FAK和磷酸化Akt的水平分别下降了62%(P<0.01)和46%(P<0.05)且失巢凋亡率为(32.57±1.72)%;而转染C124A-PTEN的BIU-87细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平及失巢凋亡率均无明显变化。结论抑癌基因PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制FAK和Akt的磷酸化,并诱导膀胱癌细胞发生失巢凋亡。

葛花解酲汤对脾虚湿热型溃疡性结肠炎“炎-癌转化”中相关原抑癌基因表达的影响

探讨葛花解酲汤对脾虚湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)-溃疡性结肠炎相关癌变(ulcerative colitis associated carcinogenesis, UCAC)的“炎-癌转化”小鼠结肠组织中相关原抑癌基因表达的影响。80只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机选出10只为空白组(K组),其余70只建立脾虚湿热模型。脾虚湿热模型建立后,将其随机分为模型1、2、3周期组(M1、M2、M3组)、葛花解酲汤高、中、低剂量组(G、Z、D组)和阳性对照美沙拉嗪组(Y组),10只/组,以氧化偶氮甲烷(azoxymethane, AOM)/葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)继续建立UC-UCAC的“炎-癌转化”模型。各组给予对应药物治疗4周。观察小鼠一般状态;统计小鼠体重变化;电镜下观察小鼠结肠黏膜超微结构;WB和RT-qPCR分别检测小鼠结肠组织中c-jun、c-fos、c-myc、p53、RB1蛋白及基因的表达。与K组比,M3组小鼠一般状态差,体重增长量显著下降(P<0.01),结肠黏膜上皮细胞核染色不均匀,细胞内线粒体等见大量增生肿胀,c-jun、c-fos、c-myc蛋白及基因表达显著升高(P<0.01),p53、RB1蛋白及基因表达显著降低(P<0.01);与M3组比,各治疗组小鼠一般状态改善,体重增长量升高,结肠黏膜上皮细胞核染色较均匀,细胞内线粒体等增生肿胀情况改善,c-jun、c-fos、c-myc蛋白及基因表达降低,p53、RB1蛋白及基因表达升高,以G、Z和Y组最为显著(P<0.01,P<0.05)。葛花解酲汤可能通过抑制原癌基因c-jun、c-fos、c-myc的激活,促进抑癌基因p53、RB1的表达,调控细胞增殖与凋亡,延缓炎-癌转化进程,修复受损的结肠黏膜组织,预防UCAC的发生。

外源性PTEN基因诱导黏液表皮样癌细胞系凋亡的研究

目的：探讨转染外源性PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌细胞系M3SP2的诱导凋亡作用。方法：用含野生型PTEN抑癌基因逆转录病毒载体转染高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体亲本细胞为对照细胞。体外细胞凋亡采用苏木精-伊红染色、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪检测,裸鼠移植瘤细胞凋亡应用苏木精-伊红染色形态学判定。Bc l-2、P53和H-ras蛋白表达用免疫组化染色检测。结果：试验细胞M3SP2-PTEN与对照细胞M3SP2-pBp比较,出现较多的典型的凋亡细胞特征。试验细胞和对照细胞凋亡率分别为7.5%-13.6%和1.2%-2.3%;裸鼠移植瘤M3SP2-PTEN组和M3SP2-pBp组的凋亡指数分别为17.4%和3.5%。免疫组化染色显示M3SP2-PTEN细胞与对照细胞比较,P53蛋白表达增强,Bc l-2和H-ras蛋白表达减弱。结论：外源性PTEN抑癌基因能显著诱导高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞凋亡,并且与P53、Bc l-2和H-ras蛋白表达有一定关系。

胃腺癌中IGFⅠR的表达及与抑癌基因PTEN相关性的研究

目的:研究胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGFⅠR)与抑癌基因PTEN在胃腺癌组织中的表达,探讨IGFⅠR与PTEN的相关性及其与胃癌临床病理学特征的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测60例胃腺癌患者肿瘤组织和60例癌旁正常组织中IGFⅠR和PTEN的表达水平。结果:60例胃腺癌组织中IGFⅠR蛋白表达阳性率为70%(42/60),癌旁正常胃组织中的阳性表达率为35%(21/60),二者比较有显著差异(P=0.000);PTEN蛋白在胃腺癌中的阳性表达率为41.7%(25/60),在癌旁正常组织中的表达率为71.7%(43/60),两者比较有显著差异(P=0.001);IGFⅠR的表达水平与病人的年龄、性别无显著相关性(P>0.05),IGFⅠR在低分化腺癌表达要高于中高分化腺癌(P=0.002),有淋巴结转移者要高于无淋巴结转移者(P=0.003),并与肿瘤的临床分期(P=0.003)、浸润深度(P=0.006)有关;在胃腺癌组织中IGFⅠR和PTEN蛋白表达之间呈明显负相关(rs=-0.469,P<0.001)。结论:IGFⅠR的表达与胃癌的生物学行为密切相关,其高表达可能有助于肿瘤的生长和转移,IGFⅠR有可能成为一个很好的分子治疗靶点;抑癌基因PTEN的失活与胃癌的发生发展密切相关;PTEN可能对IGFⅠR的表达有着调控作用。

PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系生物学行为的影响

目的 探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭特性的影响。方法 用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照(M3SP2 -pBp细胞 ) ,分别用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、细胞迁移试验及细胞侵袭试验测定M3SP2 -PTEN细胞和M3SP2 -pBp细胞体外黏附、迁移和侵袭能力。结果 M3SP2 -PTEN细胞在Metrigel和Fn基质上黏附数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,黏附抑制率分别为 34 3%和 4 9 4 %。M3SP2 -PTEN细胞在Matrigel基质上迁移距离小 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,迁移抑制率为 2 6 0 %。M3SP2 -PTEN细胞体外侵袭细胞数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,侵袭抑制率为 31 4 %。结论 外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭具有抑制作用。

人原发性肝癌组织内抑癌基因PTEN的突变检测

目的 检测人原发性肝细胞性肝癌(HCC)组织中抑癌基因PTEN的突变。方法 采用PCR—SSCP技术和DNA测序技术检测60例HCC组织中PTEN的突变。结果 在60例配对HCC标本中，发现了共6个突变位点的存在。其中，出现在外显子内的突变有1个，即在31B号标本第4外显子中5’—侧翼下游13bP处检测到C→T的突变(89031C→T)，该突变导致了PTEN蛋白第84伉氨基酸由精氨酸变为赖氨酸。另外5个突变均位于内含子中，包括在34B号标本的第4外显子3’-侧翼下游106bP处的5碱基(AATAG)缺失突变、在9B号标本的第4外显子3’—侧翼下游67bP处检测到的一个G→T点突变(89125G→T)、在33B号标本的第6外显子3’—侧翼下游58bP处检测到的一个T→A点突变(110285T→A)、在44B号标本的第8外显子5’—侧翼上游29bP处检测到的一个C—T点突变(118833C→T)、在22B号标本的第8外显子5’—侧翼上游82bP处检测到一个A→C点突变(118780A→C)。在我们选择的SK—HEP—1、HePG2、Huh—7、ChangliVer和WRL68肝脏细胞中未检测到PTEN基因的突变。结论 肝癌组织中PTEN突变可能参与了原发性肝癌的形成。

骨肉瘤中抑癌基因PTEN、Rb、p53蛋白的表达及相关性研究

目的检测抑癌基因PTEN、Rb、p53蛋白在骨肉瘤中的表达并探讨其相关性。方法采用免疫组化SP法检测人骨肉瘤组织中PTEN、Rb、p53蛋白的表达情况。结果60例骨肉瘤组织中,PTEN的失表达率为21.7%(13/60),在血管扩张型及复发型骨肉瘤中,PTEN失表达有增高趋势。Rb的失表达率为60%(36/60)。p53阳性率为23.3%(14/60)。PTEN与Rb、p53之间比较,P>0.05,缺乏相关性。结论PTEN的失表达可能为骨肉瘤细胞生长活跃和复发的机制之一。PTEN与Rb、p53之间可能通过不同的途径参与骨肉瘤细胞生长的调控。

抑癌基因PTEN与子宫内膜异位症恶变的相关性

PTEN基因是新近发现的具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,能够去除酪氨酸及丝/苏氨酸磷酸基团,并通过抑制PI3K信号系统和影响MAPK信号级联调节细胞生长、增殖、迁移等多种效应,多种肿瘤的发生与PTEN基因的缺失或突变有关。对关于PTEN基因抑癌机制研究的新进展及其在子宫内膜异位症恶变中的重要作用进行综述。

PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌实验性裸鼠肺转移的抑制作用

目的 探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌M3SP2细胞系实验性裸鼠肺转移能力的影响。方法 用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照M3SP2 -pBp细胞 ) ,应用裸鼠肺转移实验测定癌细胞的体内转移能力 ,并进行组织学观察。结果 对照组裸鼠肺转移结节数为 (2 4 0± 1.2 )个 ,组织学观察瘤细胞转移灶体积大 ,细胞生长活跃 ,可见较多核分裂。实验组裸鼠肺转移结节数量减少为 (8 5± 3 4 )个 ,转移抑制率为 6 5 6 % ;组织学观察可见转移灶数量少、体积小 ,并有较多的坏死和凋亡细胞。结论 转染野生型PTEN抑癌基因能降低人高转移性黏液表皮样癌细胞转移能力。

外源性PTEN基因稳定转染对大肠癌LS1747细胞周期及凋亡的影响

目的 :研究外源性基因PTEN对人类大肠癌LS174 7细胞周期及凋亡的影响。方法 :以携带有PTEN基因的真核表达载体体外转染人类大肠腺癌细胞LS174 7,筛选阳性克隆的细胞并扩增培养 ,鉴定转染成功后采用流式细胞仪、透射电镜、DNA琼脂糖电泳 ,检测转染PTEN基因后LS174 7细胞的凋亡以及观察三种细胞生长曲线。结果 :流式细胞仪显示 ,细胞周期从G1期到S期发生抑制 ,并在G1期峰前出现 1个明显的凋亡峰。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带。转染空载体及未转染的LS174 7细胞未见凋亡表现。转染PTEN的LS174 7细胞与空白质粒载体转染的LS174 7细胞和LS174 7细胞的生长速度相比 ,后两者生长速度较快。结论 :将外源性PTEN基因导入LS174 7细胞后 ,可以抑制细胞周期 ,并可诱导细胞凋亡 ,这可能是PTEN基因抑制大肠癌细胞增殖的重要机制之一。

外源性p53基因抑制卵巢癌细胞的增殖并增加其对放疗的敏感性

目的 探讨外源性p5 3基因转染对人卵巢癌细胞系SKOV - 3的生物学行为及放疗敏感性的影响。方法 用脂质体介导的方法 ,将p5 3基因的真核细胞表达载体 (PcDNA -p5 3)导入不表达p5 3的人卵巢癌SKOV - 3细胞中 ,经G4 1 8筛选 ,Northernblot及Westernblot鉴定后 ,观察细胞生长速度、集落形成能力和增殖周期的变化 ;观察p5 3基因转染与放疗联合作用对细胞集落形成的影响。结果 外源性p5 3基因的表达明显抑制了卵巢癌细胞的生长及集落形成能力 ,使细胞阻滞于G1 期。p5 3基因与放疗联合作用明显抑制了卵巢癌细胞的集落形成。结论 外源性p5 3基因能抑制卵巢癌细胞的生长 。