外源指导序列逆转淋球菌多重耐药性

目的研究外源指导序列(external guide sequence,EGS)在体外逆转淋球菌多重耐药株为敏感株中的作用。方法构建针对多传递耐药(multiple transferable resistance,mtr)系统中MtrC基因,并含卡那霉素抗性基因的EGS重组质粒pET-28a(+)-EGS-MtrC,采用常规CaCl2法将重组质粒导入临床分离的多重耐药淋球菌中,通过菌落PCR进行鉴定,并利用分光光度计检测阳性转化菌在含不同浓度氨苄西林的培养基中的生长情况,测定淋球菌转化前后对阿奇霉素、结晶紫、红霉素、TritonX-100、四环素的最小抑菌浓度(MIC)。结果PCR结果显示阳性转化菌含有预期大小的转化片段;多重耐药淋球菌在浓度为50、100μg/ml的氨苄西林培养基中生长良好,而导入EGS-MtrC的转化菌在含100μg/ml氨苄西林的培养基中不能生长,在50μg/ml氨苄西林培养基中生长受抑制。导入EGS-MtrC的转化菌对阿奇霉素、结晶紫、红霉素、TritonX-100、四环素的MIC值均有明显下降。结论pET-28a(+)-EGS-MtrC转化淋球菌成功;导入EGS-MtrC的转化菌部分恢复了对氨苄西林的敏感性;转化菌对阿奇霉素、结晶紫、红霉素、TritonX-100、四环素的敏感性增加。

外源指导序列逆转绿脓杆菌耐药性

本研究利用CaCl2 转化法 ,将构建的含针对氨苄青霉素耐药基因bla的外源指导序列 (EGS)的编码序列的质粒PMMB2 0 7 AmpEGS导入绿脓杆菌A6 19菌株中 ,通过原位杂交挑选转化菌 (t A6 19) ,并检测其在含氨苄青霉素LB培养基中的生长情况。结果表明 ,利用针对氨苄青霉素耐药性基因的外源指导序列 (EGS) ,能将氨苄青霉素耐药菌株A6

外源性指导序列体外转换临床大肠杆菌氯霉素抗性表型的实验研究

目的 研究外源性指导序列(EGS)体外逆转临床分离大肠杆菌氯霉素抗性的能力。方法 构建针对氯霉素(Cm)乙酰转移酶(cat)并含卡那霉素(Km)抗性基因筛选指标的EGS重组质粒以及只含Km抗性基因但不含EGS的对照质粒。采用CaCl2方法将重组质粒导入临床分离的耐Cm大肠杆菌株中。通过质粒抽提、菌落PCR鉴定EGS阳性克隆子,分光光度计A600检测导入EGS质粒后耐Cm菌株在液体培养基中的生长率以及KB法检测在固体培养基中的药物敏感试验,探讨EGS分子逆转耐药菌的逆转效应。结果 以pEGFP-C1-EGS cat1+cat2重组质粒对16株临床分离的CmR大肠杆菌供试菌进行转化试验,EGS转化子在含Km的培养基上筛选。其中4株转化菌在Cm 100—200 μg/ml的液体培养基中生长受抑;在Cm 100-200μg/ml的固体培养基中药敏试验对Cm敏感;转化菌质粒抽提检测出特异EGS条带;菌落PCR扩增鉴定存在EGS。表明16株供试菌中4株临床分离株获得了耐药菌型的表型转换、耐Cm的大肠杆菌临床分离株恢复了对Cm的敏感性。结论EGS分子具有逆转临床耐药菌为敏感菌的能力。