基于外源荧光探针的脱氧核酶切割RNA反应动力学参数测定方法的改进

对以EB作为外源荧光探针测定脱氧核酶切割RNA反应的动力学参数的方法进行了改进。实验结果表明:对于目前应用最为广泛的1023脱氧核酶和817脱氧核酶,在生理条件下(150mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,pH7.5,37℃)采用改进方法测得的反应动力学参数(kobs1023=0.12min-1,kobs817=0.08min-1)与原方法相比更接近于放射性标记方法的测定结果(k21023=0.13min-1,k2817=0.08min-1)。

含双腈基分子的振动光谱和计算化学表征

利用傅里叶变换红外光谱、结合计算化学手段,研究了2,2’-azobisobutyronitrile(AIBN)中的腈基(C≡N—)的红外光谱特性。发现其双C≡N—伸缩振动指纹(峰值和半峰宽)都具有一定的溶剂依赖性。密度泛函水平上的计算化学预测了该分子的C≡N—伸缩振动的二重简并度,与实验结果一致。可以预期,在引发聚合反应(如合成传统的基于多肽的水凝胶)过程中,上述红外振动光谱特性将发生改变,C≡N—的振动光谱会表现出与基态不同的振动特性。在此情形下,C≡N—伸缩振动可兼做原位红外光谱探针,用于监测化学反应的进行。

温度、尿素、盐酸胍等因素对烟草蛋白PR-1a荧光光谱的影响研究

诱导表达GST-PR-1a蛋白,利用蛋白质内源荧光和外源ANS荧光为探针,对分离的重组表达蛋白进行热稳定性、盐酸胍、尿素研究.50~80℃处理时,PR-1a内源荧光和外源荧光几乎无变化,90℃时荧光强度均有明显降低.盐酸胍、尿素处理后,随着浓度的增加,最大吸收波长红移,说明PR-1a中色氨酸残基主要存在于分子内部,且易受温度等因素影响从而导致三维结构的变化.特定浓度的盐酸胍处理后,蛋白呈现中间态.