关于(A6,A11)-双位点突变胰岛素原作为外源肽呈递骨架可行性的研究

通过重组DNA技术,以(A6,A11)-双突变胰岛素原分子为支架构建了含有外源抗栓肽功能区的嵌合分子,并在大肠杆菌进行了表达和纯化.对嵌合分子进行胰岛素受体结合活性、放射免疫活性及抗血小板聚集活性分析,结果表明该嵌合分子具有较强的血小板聚集抑制活性,而无胰岛素生物活性,证明以(A6,A11)-双突变胰岛素原作为外源肽序列呈递骨架是可行的.

外源性八肽胆囊收缩素对谷氨酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡的保护作用研究

目的探讨外源性八肽胆囊收缩素(CCK-8)对谷氨酸诱导体外大鼠大脑皮层神经元损伤模型中神经细胞凋亡的保护作用及其可能作用机制。方法不同浓度CCK-8处理体外培养的大鼠大脑皮层神经元,MTT法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养大鼠大脑皮层神经细胞并用谷氨酸(Glu)处理建立神经元损伤模型,分为模型组、CCK-8组,另设对照组。采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡率;Flou-4实验检测各组细胞Ca^(2+)水平;实时定量PCR法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)mRNA表达情况;Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组神经元细胞存活率、G_(1)期细胞分布比例、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,S期、G_(2)/M期细胞分布比例、细胞凋亡率、Ca^(2+)水平、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,CCK-8组神经元细胞存活率、G_(1)期细胞分布比例、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平升高,S期、G_(2)/M期细胞分布比例、细胞凋亡率、Ca^(2+)水平、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论CCK-8对谷氨酸诱导的神经元细胞凋亡有一定的抑制作用,可能是通过抑制钙离子内流,调节细胞内Bax/Bcl-2表达水平发挥作用。

噬菌体展示外源多肽的免疫原性研究

利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因 8克隆入 pKK2 2 3-3质粒中 .将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中 ,并制备了杂合噬菌体 .利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠 ,结果表明该噬菌体 -表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下均产生抗体 ,用ELISA方法采用双波长 (4 50 / 6 30nm)检测抗体 ,其在有无佐剂存在的情况下光密度值无明显差别 .免疫后小鼠脾淋巴细胞在有无佐剂的情况下均产生明显增殖 ,未见明显的毒副作用 ,具有良好的安全性 .该方法产生的抗体与传统的合成多肽相比具有方法简便、低价高效等特点 .它将成为生产高效低价疫苗的有效途径 .该噬菌体 -表位抗原PA为真菌疫苗的研制打下基础 .

外源性生物活性肽对反刍动物的营养代谢调控

外源性生物活性肽(eBAP)是饲料或食物中的某些蛋白质所隐含的一种特殊肽质,这些特殊肽在消化酶作用下释放出来,以肽的形式被吸收后,参与摄食、消化、代谢及内分泌调节等多种生理作用。

外源谷胱甘肽对低温胁迫下玉米幼苗的影响

试验旨在研究外源谷胱甘肽增强玉米幼苗防御低温胁迫的效应。选取生产上大面积推广的‘郑单958’品种为试验材料,采用土培法,设置6组处理,分别为CK、LT、G1、G2、G3、G4,每个处理3次重复。将培养至三叶一心的玉米幼苗分别进行叶面喷施3天后,在人工气候箱中采用10℃低温胁迫,并对玉米幼苗生长及相关生理指标进行分析。结果表明,喷施外源谷胱甘肽能够显著减轻低温胁迫对玉米幼苗苗高、叶片含水量及叶绿素含量的影响。低温胁迫5天后,谷胱甘肽通过增强过氧化物酶活性缓解低温胁迫对玉米幼苗的伤害,G3与LT处理存在明显差异,提高了79.25%;在低温天数的增加下,玉米叶片细胞内可溶性糖及丙二醛含量逐渐升高,胁迫7天后,LT处理与胁迫后第5天相比,可溶性糖及丙二醛含量分别增加了106.97%、25.33%。综合来看,外源谷胱甘肽能提高低温胁迫下玉米的生长能力,主要通过提高抗氧化酶和光合调控能力,保持细胞渗透平衡。

不同的引导肽对丝状噬菌体基因8蛋白展示外源多肽的影响

为了研究不同的引导肽对在基因8蛋白上展示外源多肽的影响,利用基因工程方法将一短肽插入基因8蛋白的N端,并将引导多肽去除或用基因3蛋白的引导肽序列替代基因8的引导肽序列.采用放射性脉冲追踪技术检测不同的引导肽对在基因8蛋白上展示外源多肽的作用.结果表明,无引导肽序列的引导,蛋白前体无法向成熟蛋白转化.基因3蛋白的引导肽可以引导展示有外源多肽的基因8蛋白,完成从前体向成熟蛋白的转化,但转化率明显下降.研究结果对阐明噬菌体外壳蛋白在大肠杆菌中的跨膜机制具有重要的意义.

外源性生物活性肽对反刍动物的营养生理代谢调控

长期以来，人们普遍认为食物或饲料中的蛋白质必须在消化道中分解成游离的必需氨基酸或非必需氨基酸，才能被机体吸收和利用。然而近几十年的研究实践表明，以旧的蛋白质氨基酸理论为基础配制日粮不仅不能获得最佳生产性能，而且动物对饲料中各种氨基酸的利用程度并不完全受单一限制性氨基酸水平的影响，也并不完全遵循营养学经典理论——“水桶法则”

外源性生物活性肽的营养、生理作用

综述了国内外有关外源性生物活性肽的研究成果及外源性生物活性肽对单胃动物的营养、生理作用,为充分发挥外源性生物活性肽在生产实践中的作用提供参考。

外源性脑利钠肽联合芪苈强心胶囊对急性心力衰竭病人心功能指标及GDF-15水平的影响

目的观察外源性脑钠肽(rhBNP)联合芪苈强心胶囊对急性心力衰竭病人心功能指标及血清生长分化因子-15(GDF-15)水平的影响。方法选取2019年1月—2020年1月榆林市第二医院就诊的112例急性心力衰竭病人,采用随机数字表法将病人分为观察组和对照组,各56例。两组均给予吸氧、利尿、强心、扩张血管等基础治疗,对照组给予基础治疗联合rhBNP治疗,观察组在对照组基础上联合芪苈强心胶囊治疗。比较两组治疗前后心功能指标、纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级、血浆N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)及血清GDF-15水平和临床疗效。治疗前后检验血常规及肝肾功能,并观察治疗过程中可能出现的不良反应。结果观察组总有效率高于对照组,两组比较差异有统计学意义(85.71%与69.64%,P=0.030)。治疗后,两组左室射血分数(LVEF)较治疗前升高,左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、NT-proBNP、GDF-15均较治疗前降低,且观察组优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组NYHA心功能分级优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhBNP联合芪苈强心胶囊能有效改善急性心肌梗死病人心功能,降低血清GDF-15因子和NT-proBNP水平。

外源性RGD肽在肿瘤诊断与治疗中的应用研究进展

多种肿瘤细胞表面存在高表达的αvβ3、αvβ5等整合素,这些整合素可以与含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)三肽结构单元的肽特异性结合,且与肿瘤细胞的黏附、转移、侵袭及血管新生过程密切相关。因此,人们合成了多种含RGD三肽结构单元的外源性多肽,将其与肿瘤显影示踪剂或抗肿瘤活性分子结合,竞争性抑制含RGD结构单元的内源性物质,提高肿瘤显影示踪剂的定位准确性或增强抗肿瘤活性分子的治疗作用,为肿瘤的诊断和治疗提供了新的方向。本文主要介绍了一些外源性RGD肽,并概述其在肿瘤诊断及靶向抗肿瘤方面应用的研究进展。

外源性还原型谷胱甘肽对肾脏组织的抗氧化能力的影响

原发及继发性肾小球疾病是泌尿系统的常见病及多发病,晚期均可导致肾脏功能损伤,甚至尿毒症,给患者及家属带来极大的痛苦和沉重的经济负担.谷胱甘肽系统是肾脏组织细胞内主要的抗氧化损伤体系.原发及继发性肾小球疾病常同时伴有肾小管及肾间质病变,故体内谷胱甘肽系统明显缺乏,抗氧化损伤能力下降,加重肾脏损伤,加重肾脏功能恶化,故补充外源性还原型谷胱甘肽能否对机体抗氧化功能有所恢复是本文探讨的关键.

谷胱甘肽对小麦幼苗铜毒害的缓解作用及其与氮、硫、磷积累的相关性

采用水培法,对外源谷胱甘肽(GSH)缓解小麦幼苗铜毒害及其与氮、硫、磷等元素积累的相关性进行了研究。结果表明,Cu处理(T0组)显著抑制小麦幼苗的生长发育,导致根长、茎叶长、生物量、叶绿素和类胡萝卜素含量以及氮元素积累量下降,诱导了植株蛋白质、内源GSH含量以及硫、磷元素积累量上升。随施用外源GSH浓度的升高,GSH处理(T1、T2、T3组)的小麦幼苗茎叶长、根长、生物量,叶绿素a、b和类胡萝卜素含量、蛋白质含量先上升后下降,内源GSH含量以及氮、硫、磷等营养元素积累量持续上升;其中,T2组小麦幼苗的各项指标与T0组差异均达到显著水平(P<0.05),与对照组(CK)无显著差异。外源GSH促进了植株对铜离子的吸收、转运和积累,而外源和内源GSH均与铜胁迫下小麦幼苗氮、硫、磷等营养元素的积累呈极显著正相关(P<0.01),其中以T2处理组缓解小麦幼苗铜毒害的作用最显著。

多肽对香蕉幼苗生长及根系活力的影响

以巴西蕉组织培养苗为试材,研究不同多肽浓度(600、800、1000、1200倍液)对巴西蕉幼苗生长及根系活力的影响。结果表明,外源多肽处理能促进巴西蕉幼苗的生长,增加根重、苗高、叶片长度和宽度,同时还能提高巴西蕉幼苗根系活力,但是对根长影响不显著。在试验的各个浓度中,以600倍液的处理效果最好。

多肽在丝状噬菌体外壳蛋白上的展示

利用基因工程方法将丝状噬菌体ｆｄ基因８克隆入ｐＫＫ２２３－３质粒中．将人工合成的六个氨基酸残基的多肽基因插入到修饰后的质粒载体中，并制备了杂合噬菌体．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，外源多肽基因得到了正常表达，其产物展示于丝状噬菌体的外壳蛋白上．

大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究

为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。

功能性肽的分离及富集研究进展

功能性肽广泛存在于自然界中。其中天然存在于人体内的功能性肽类统称为内源性功能肽,与生命体的生长、代谢、免疫、信号传导等生理活动息息相关;人体以外的功能性肽类称为外源性功能肽,可以通过蛋白质降解或者氨基酸合成得到,具有抗肿瘤、降血压、促进骨骼健康等多种功能活性。然而内源性功能肽大多以低丰度形式存在,富集过程中极易受到高丰度蛋白的影响;蛋白质降解或氨基酸合成得到的外源性功能肽中混有其他复杂的成分。因此外源性功能肽的分离和内源性功能肽的富集以获得目标肽,是研究其结构和功能的前提。本文分别介绍了外源性功能肽的分离方法和内源性功能肽的富集手段,并阐述了各种方法的原理、适用对象、优缺点以及发展方向,以期为功能性肽的结构分析和功能开发提供理论参考。

GLP-1受体激动剂对2型糖尿病患者的心血管保护作用及机制研究进展

外源性胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)或GLP-1受体激动剂是临床常用降糖药物,可在促进胰岛素分泌取得降低血糖的同时,延缓胃排空、增强饱腹感,对肥胖性2型糖尿病患者具有积极意义。且此降糖药还具有降脂、降压、消炎等作用,并改善血管内皮细胞功能,提高心肌细胞能量代谢,减少心肌细胞受损等心血管保护作用。

外壳蛋白羧端序列缺失对烟草花叶病毒侵染性的影响

对野生型烟草花叶病毒(TMV-U1)的外壳蛋白羧端序列进行系列缺失突变,观察到TMV-U1株系的外壳蛋白羧端序列缺失6个氨基酸(保留152个氨基酸),仍能较强系统侵染烟草并高水平表达外壳蛋白,且能在新生叶里复制大量完整的病毒粒子。该研究结果表明:外壳蛋白羧端6个氨基酸序列并非烟草花叶病毒感染和复制所必需,并对利用外壳蛋白羧端缺失型病毒载体表达外源多肽具有一定的启示性。