青岛和大连海区海带（Laminaria japonica）外生细菌的16SrRNA基因序列分析

从采集自青岛和大连的大型褐藻海带(Laminaria japonica)表面分离到22株革兰氏阴性海洋细菌。根据16SrRNA基因序列分析结果，将其分别鉴定为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas，Cobetia)菌，嗜冷单胞菌(Psychromonas)，交替单胞菌(Alteromonas)，产碱杆菌(Alcaligens)和海杆菌(Marinobacter)。其中假交替单胞菌在两地样品中占据绝对优势，但每个产地的假交替单胞菌不能单独聚类在一起，不同海区的海带表面存在遗传关系非常接近的菌株。假交替单胞菌之外的其他菌株于两地样品之间存在种或属水平上的差异。本文结果提示外生细菌的种类既与环境相关，又受宿主的状况影响。对8株受试菌株的拮抗实验结果显示了外生细菌在寻找新型抗生素方面的潜力。

条斑紫菜外生细菌的遗传多样性

为研究藻际微生物多样性与紫菜健康养殖的关系,从江苏南通(养殖)、山东青岛(野生)、浙江温州(养殖)三地的条斑紫菜叶状体和江苏东台条斑紫菜贝壳丝状体及其周围的海水样品中分离了条斑紫菜外生细菌。根据菌落特征和菌体形态将获得的63株细菌分为21种表型。16SrDNA-V3片段DGGE分析结合序列测序比对结果表明:这些菌株与假交替单孢菌(Pseudoalter-omonas)、嗜冷单胞菌(Psychrobacter)和芽孢杆菌(Bacillus)等10属相应菌株具有较高的同源性。通过对条斑紫菜外生细菌区系多样性分析得出:条斑紫菜藻体外生细菌组成与生活环境相关,但不同于周围海水细菌群落;不同来源(地点)、不同生理状况(健康与病烂)和不同生长阶段(叶状体和丝状体)的条斑紫菜外生菌种群组成差异较大。许多外生细菌对常见测试菌、海水养殖动物致病菌和人致病菌具有抑菌活性,其抑菌特点与紫菜生理性状相关。从健康条斑紫菜样品分离的外生菌中假交替单孢菌占优势,病烂紫菜未分离到假交替单孢菌,提示假交替单孢菌可能与紫菜健康生长有密切关系。

福鼎海域坛紫菜叶状体体表外生细菌的组成和数量分析

从采集自福鼎敏灶湾和硖门湾海域的健康坛紫菜（Porphyra haitanensis）叶状体体表分离、纯化到26株外生细菌．根据细菌菌落特征、菌体形态和16SrDNA基因序列分析相结合的方法进行鉴定，将其确认为6种不同的菌属，分别是假交替单胞菌属（Pseudoaheromonas）、Aquimarinas属、交替单胞菌属（Aheromonas）、黄杆菌属（Flavobacteriums）、弧菌属（Vibrio）和嗜琼胶菌属（Agarivorans）．2个海湾坛紫菜叶状体体表外生菌群数量稳定且差别不大，外生细菌菌属组成基本相同，个别菌属稍有差异，优势菌属为假交替单胞菌属和Aquimarinas属，常见菌属为交替单胞菌属和黄杆菌属，少见菌属为弧菌属．敏灶湾坛紫菜体表外生菌群数量为（5．7～6．5）×10^4cfu／g，外生细菌中各菌属所占比例为：假交替单胞菌属占38．5％，Aquimarinas属占52．8％，交替单胞菌属占13．9％，黄杆菌属占11．5％，弧菌属占3．3％．硖门湾坛紫菜体表外生菌群数量为（6．4～7．6）×10^4cfu／g，外生细菌中各菌属所占比例为：假交替单胞菌属占37．3％，Aquimarinas属占32．0％，交替单胞菌属占14．0％，黄杆菌属占12．7％，弧菌属占2．7％，嗜琼胶菌属占1．3％．优势和常见菌属菌株对健康坛紫菜叶状体进行感染，发现这些菌株对坛紫菜叶状体无致病力，叶状体生长无异常．这些可为坛紫菜微生物学研究提供基础资料．

基于16SrDNA分析的浒苔外生细菌多样性研究

为研究浙江近海浒苔Ulva spp.(Enteromorpha spp.)外生细菌多样性,采用传统的形态学和16S rDNA测序分析的方法,从舟山朱家尖、宁海国华电厂和奉化南沙3个地区分离到可培养的浒苔外生细菌及其周围海水细菌65株。根据细菌菌落特征和革兰氏染色结果等将分离到的细菌分为26种表型。16S rDNA序列测序比对发现:菌株与不动杆菌属(Acinetobacter)、交替单胞菌属(Alteromonas)、弧菌属(Vibrio)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、赤细菌属(Erythrobacter)、微球菌属(Micrococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、深海杆菌属(Idiomarina)、Phaeobacter、Roseivirgaj和Silicibacter等23个属相应菌株具有较高同源性。对不同地区浒苔外生细菌进行了Shannon-Wiener多样性指数分析。研究表明:(1)宁海国华电厂的浒苔外生细菌多样性最丰富,多样性指数为93.98%;(2)浒苔外生细菌与其生活地区密切相关,其群落组成具有地域差异,其优势类群也不尽相同,但均归属于变形菌门。

紫菜外生细菌抑菌活性及其多聚酮合酶(PKSI)基因筛选

【目的】基于紫菜外生细菌抑菌活性的研究,本文对具有广谱抑菌活性的菌株进行了多聚酮合酶(Polyketide synthase I,PKSI)基因的筛选,以期获得PKSI阳性菌株及探讨紫菜藻际微生物区系细菌的拮抗机制与PKSI途径的关系。【方法】利用琼脂柱法筛选出具广谱抑菌活性的菌株31株,以其基因组DNA为模板,设计引物扩增酮基合成酶(Ketosynthase,KS)片段基因并将其克隆到pMD19-T Vector,筛选出PKS I阳性菌,进行16S rDNA测序分析。【结果】紫菜外生细菌表现出广谱抑菌性。从温州病烂紫菜外生菌中筛选出3株具强抑菌活性的PKS I阳性菌,BLAST比对结果显示:菌株WPhG3、WPySw1和WPySw2扩增得到PKSI的KS结构域核苷酸序列所对应的氨基酸序列与Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168(NP-389602)、Bacillus subtilis(ABR19776)和Aspergillus carbonarius(AAZ99721)的PKS I的KS结构域的同源性分别达到98%、99%和98%;16S rDNA系统发生学分析显示它们均与Bacillus的同源性最高。【结论】紫菜藻际微生物群落组成复杂,通过多条途径调节藻际微生物区系的平衡。PKS I途径可能是温州病烂紫菜外生菌Bacillus表现抑菌活性的一种方式。